奥利亚罗非鱼性染色体特异分子标记及基于该分子标记的遗传性别鉴定和单性鱼生产方法技术

本发明专利技术一种奥利亚罗非鱼性染色体特异分子标记以及基于该分子标记的遗传性别鉴定和单性鱼生产方法。本发明专利技术首次同时筛选出奥利亚罗非鱼Z染色体和W染色体的特异分子标记，基于该分子标记构建的奥利亚罗非鱼遗传性别鉴定方法准确、稳定、高效，可通用于不同种群的奥利亚罗非鱼，可以经济、快速、准确的区分正常雄鱼

Sex chromosome specific molecular marker of Oreochromis aureus and its application in sex identification and production

【技术实现步骤摘要】
奥利亚罗非鱼性染色体特异分子标记及基于该分子标记的遗传性别鉴定和单性鱼生产方法
本专利技术属于分子育种领域，涉及一种奥利亚罗非鱼性染色体特异分子标记及基于该分子标记的遗传性别鉴定和单性鱼生产方法。
技术介绍
奥利亚罗非鱼，属于鲈形目(Perciformes)，丽鱼科(Cichlidae)，口孵非鲫属(Oreochromis)，体色发蓝，故又称蓝罗非鱼，原产于非洲西部，尼罗河下游和以色列等地，具有适应性强、繁殖力高、耐高盐低氧、抗病力强、肉质鲜美、营养丰富等特点，是世界性的主要养殖鱼类之一，也是我国的重要淡水养殖对象。中国是罗非鱼第一大生产国和出口国。由于罗非鱼生长具有显著的性别二态性，雄鱼比雌鱼生长快40％～50％，因此在生产上更倾向于生产全雄罗非鱼。目前在生产上获得单雄性罗非鱼的方法主要有激素处理和种间杂交。激素处理，即采用雄激素处理苗种使之性反转来获得全雄鱼，该方法简单易操作，在生产中使用较广，但激素残留会产生环境污染和影响消费者健康等问题，在绿色养殖呼声越来越高的今天，这种方法不能走向长远。种间杂交，即利用不同种的罗非鱼进行杂交。奥利亚罗非鱼与尼罗罗非鱼是近缘种，两者的性别决定类型截然不同，尼罗罗非鱼为雄性异配的XX/XY型，而奥利亚罗非鱼为雌性异配的ZZ/ZW型，两个种杂交可产生高雄性率后代，称为奥尼鱼，其相较于父母本，生长速度更快、抗寒能力更强，但对亲本的要求很高。还有一种是通过测交选育遗传雄性罗非鱼(GeneticallyMaleTilapia,GMT)技术，用原系、转化系和雄性纯合系配套生产遗传全雄罗非鱼，根据测交子代性别比例来判断亲本的基因型，操作繁琐费时，劳动强度大，不利于GMT的应用。目前最有效的单性鱼育种手段是通过分子标记辅助选育遗传全雄罗非鱼(MarkerAssistedselection-GeneticallyMaleTilapia,MAS-GMT)技术。因此，申请人前期开发出了尼罗罗非鱼的性别特异分子标记(专利申请CN102533751A)，可以实现全雄鱼鱼苗和YY超雄鱼的规模化生产。但对性别决定类型为ZZ/ZW的奥利亚罗非鱼来说，由于缺乏普适的分子标记，限制了MAS-GMT技术的应用。目前在罗非鱼生产上，除普遍生产全雄尼罗罗非鱼外，还倾向于生产耐低氧、抗病力强、生长快的奥尼杂交鱼，因此我们也可以同时利用尼罗罗非鱼和奥利亚罗非鱼来构建GMT育种技术，实现全雄鱼苗的规模化生产，方法如下：(1)将ZZ雄鱼性逆转为雌鱼，再用ZZ转化雌鱼与正常的ZZ雄鱼交配，获得基因型为ZZ的全雄后代；(2)将ZZ雄鱼与尼罗罗非鱼XX雌鱼杂交，即可得到ZX全雄后代；(3)将ZZ转化雌鱼与尼罗罗非鱼YY雄鱼杂交，获得基因型为ZY的全雄后代；(4)生产WW全雌鱼，然后与尼罗罗非鱼YY超雄鱼杂交，得到基因型为WY的全雄后代(如图7)。但上述方法同时依赖于奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼性别特异分子标记，否则只能通过测交来确定亲本基因型，耗时耗力，不利于该方法的应用。虽然目前已有奥利亚罗非鱼性别连锁分子标记专利报导(专利申请CN101921865A)，但仅限于W染色体特异分子标记，没有Z染色体特异分子标记，并且只适用于特定群体，不具有普适性。因此，有必要找到一个具有普适性的奥利亚罗非鱼性染色体特异分子标记，来快速、准确地鉴定奥利亚罗非鱼遗传性别，来简化GMT的生产流程，降低生产成本，提高效益。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种奥利亚罗非鱼性染色体特异分子标记，可通用于多个品系的奥利亚罗非鱼；目的之二在于提供一种基于上述分子标记进行奥利亚罗非鱼遗传性别鉴定方法，可以经济、快速、准确地区分正常雄鱼ZZ♂、正常雌鱼ZW♀、超雌鱼WW♀、转化雌鱼ZZ♀、转化雄鱼ZW♂、转化雄鱼WW♂；目的之三在于提供一种基于上述分子标记快速高效生产全雄鱼的方法，以显著提高养殖产量，降低养殖成本，提高经济效益；目的之四在于提供一种基于上述分子标记生产超雌鱼的方法，为研究奥利亚罗非鱼性别决定的分子机制、实现其性别控制奠定基础。为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：1、奥利亚罗非鱼性染色体特异分子标记，包括奥利亚罗非鱼Z和W染色体特异分子标记，它们的核苷酸序列分别如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。2、奥利亚罗非鱼遗传性别鉴定的分子标记方法，包括以下步骤：A.PCR扩增：剪取待测奥利亚罗非鱼的鳍条，提取基因组DNA；以所得基因组DNA为模板，分别采用SEQIDNO.1所示的上游引物F1和SEQIDNO.2所示的下游引物R1，以及SEQIDNO.3所示的上游引物F2和SEQIDNO.4所示的下游引物R2，进行PCR扩增，并将所得产物与上述的奥利亚罗非鱼性染色体特异分子标记进行对比；B.结果判断：从待测奥利亚罗非鱼的基因组DNA中仅扩增出Z染色体特异条带，则判断该待测奥利亚罗非鱼为遗传上的雄鱼，基因型为ZZ；从待测奥利亚罗非鱼的基因组DNA中仅扩增出W染色体特异条带，则判断该待测奥利亚罗非鱼为遗传上的超雌鱼，基因型为WW；从待测奥利亚罗非鱼的基因组DNA中既扩增出Z染色体特异条带，又扩增出W染色体特异条带，则判断该待测奥利亚罗非鱼为遗传上的雌鱼，基因型为ZW。各核苷酸序列如下：F1：5’-AGCCTCCGTCGTTTGTTGTCT-3’，如SEQIDNO.1所示；R1：5’-GGTCTGTGTTGAGTCTTCCAGC-3’，如SEQIDNO.2所示；F2：5’-CACACACGACTGTGTTGCTA-3’，如SEQIDNO.3所示；R2：5’-TGTTGGTGTATAATGGAGCACTG-3’，如SEQIDNO.4所示；Z染色体特异分子标记AGCCTCCGTCGTTTGTTGTCTGGTCTGCAGTTGATCGATCTCGCTTCAGGGTAAAAGGAGGACACATTTGTCGGAGTCTACGAATTTAGACAGCCTTCGTCGCGTCGCTGTGACGTAATCGGCCTACAAATGCGGCCTCAGGAGGATGCAACCCATGAATTTGGACACGACTAGAGACTTAGAGCTTTTTATTGTCATTGTGCAATTTCTTGCACAGCAAAATTGGGTAGCTGGCCACAAAGGTGCAAAAGCAAGAACAAAAAACAATATACAACGAGGGGGGGGGGGGGATAAAATAAAATAAAAAGCAATATATATGTATACATATATGTCAGTGAAACTATATGCACAGTGTATGCGTAAGAAACCCTGAAACAGAAACATTGTGGGTCTGTATACGAGGGCAATTATAAAATATAATAAATAAATAAGGGTGGAGGTGCTATGGTTATTTAGGGTGGAGATGGTAATTTCACGGAGACCAAACTATTGCACCTACCAAAGATATTGCACATGAGCCAAAAAAATAATAATTAGCAA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.奥利亚罗非鱼性染色体特异分子标记，其特征在于，包括奥利亚罗非鱼Z和W染色体特异分子标记，它们的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。/n

【技术特征摘要】
1.奥利亚罗非鱼性染色体特异分子标记，其特征在于，包括奥利亚罗非鱼Z和W染色体特异分子标记，它们的核苷酸序列分别如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。


2.奥利亚罗非鱼遗传性别鉴定的分子标记方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.PCR扩增：剪取待测奥利亚罗非鱼的鳍条，提取基因组DNA；以所得基因组DNA为模板，分别采用SEQIDNO.1所示的上游引物F1和SEQIDNO.2所示的下游引物R1，以及SEQIDNO.3所示的上游引物F2和SEQIDNO.4所示的下游引物R2，进行PCR扩增，并将所得产物与上述的奥利亚罗非鱼性染色体特异分子标记进行对比；
B.结果判断：从待测奥利亚罗非鱼的基因组DNA中仅扩增出Z染色体特异条带，则判断该待测奥利亚罗非鱼为遗传上的雄鱼，基因型为ZZ；从待测奥利亚罗非鱼的基因组DNA中仅扩增出W染色体特异条带，则判断该待测奥利亚罗非鱼为遗传上的超雌鱼，基因型为WW；从待测奥利亚罗非鱼的基因组DNA中既扩增出Z染色体特异条带，又扩增出W染色体特异条带，则判断该待测奥利亚罗非鱼为遗传上的雌鱼，基因型为ZW。


...

【专利技术属性】
技术研发人员：王德寿，赵琳，陶文静，伍鑫，樊征，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50