ESCO2抑制剂在制备用于治疗下咽癌的药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了ESCO2的抑制剂在制备用于治疗下咽癌的药物中的应用，属于生物医药领域。所述的抑制剂选自以ESCO2蛋白或它们的转录本为靶序列、且能够抑制其蛋白表达或基因转录的反义核酸；或能表达或形成所述反义核酸的构建物。本发明专利技术提供了一种ESCO2敲减效果十分显著的siRNA，该靶基因siRNA经验证可明显抑制下咽癌Fadu细胞的增殖与侵袭，抑制活体内细胞的成瘤性及瘤组织的生长，具有良好的制备用于治疗下咽癌的药物潜力。

The use of ESCO2 inhibitors in the preparation of drugs for the treatment of hypopharyngeal cancer

【技术实现步骤摘要】
ESCO2抑制剂在制备用于治疗下咽癌的药物中的用途
本专利技术属于生物医药领域，具体地，涉及ESCO2抑制剂在制备用于治疗下咽癌的药物中的用途。
技术介绍
下咽鳞状细胞癌(Hypopharyngealsquamouscellcarcinoma，HSCC)是位于下咽区的恶性肿瘤，分化程度较差，且部位隐匿。常见的病发部位为梨状隐窝，环后区和下咽后壁区，复发率及远处转移率较高。目前临床上下咽癌的治疗模式呈多样式趋势，其中强调以放化疗为主的保守治疗因其可保留患者的喉咽功能有利于提高治疗患者的生活质量，成为了近几年来研究较多的治疗方法之一。尽管针对这种治疗方式的争议较多，但目前应用还是比较广泛的。近年来下咽癌发病率呈逐年上升趋势，由于较早容易出现转移，导致患病患者的生存率较其他恶性肿瘤患者明显下降。如何提高下咽癌的治愈率，从而提高其患者的生存率，是目前针对下咽癌急需要解决的难点之一。寻找有利于早发现、早诊断以及早治疗下咽癌的方法，同时研究下咽癌细胞的生物学特性，探求影响其生物学行为的生物学机制，找到有针对性的治疗方法显得比较迫切。
技术实现思路
为了解决上述技术问题的至少一个，专利技术人进行了大量的理论和实际研究，出乎意料地发现ESCO基因与下咽癌具有显著的关联，从而完成本专利技术。本专利技术第一方面提供ESCO2的抑制剂在制备用于治疗下咽癌的药物中的应用，所述的抑制剂选自以ESCO2蛋白或它们的转录本为靶序列、且能够抑制其蛋白表达或基因转录的反义核酸；或能表达或形成所述反义核酸的载体；或含有所述载体的重组细胞。内聚蛋白和内聚蛋白调控蛋白在姐妹染色单体内聚和分离过程中发挥着重要作用，同时还参与DNA双链断裂的修复和转录调控。内聚同源蛋白2(ESCO2)主要由一个靠近N端的C2H2锌指结构和乙酰基转移酶功能区所构成，是一种保守的内聚蛋白乙酰转移酶。ESCO2基因一旦发生突变，将会引起相应人体罹患罗伯兹综合症。在本专利技术的一些实施方案中，所述药物用于：a)抑制下咽癌细胞增殖；b)促进下咽癌细胞凋亡；c)抑制下咽癌细胞迁移；d)抑制下咽癌细胞侵袭；或e)抑制下咽癌患者体内瘤体生长。在本专利技术的一些实施方案中，所述的抑制剂为一种siRNA分子，其核苷酸序列如SEQIDNo.5或SEQIDNo.6所示。在本专利技术的另一些实施方案中，所述的抑制剂为一种shRNA分子，其编码序列如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示，或者如SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示。在本专利技术的又一些实施方案中，所述的抑制剂为一种载体，所述载体包含SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示序列，或包含SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示序列。本专利技术的第二方面提供一种治疗下咽癌的siRNA分子，所述的siRNA分子核酸序列如SEQIDNo.5或SEQIDNo.6所示。本专利技术的第三方面提供一种治疗下咽癌的shRNA分子，所述的shRNA分子的编码序列如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示，或者如SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示。本专利技术的第四方面提供一种治疗下咽癌的载体，所述载体包含SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示序列，或包含SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示序列。本专利技术的第五方面提供一种重组慢病毒，所述重组细胞由本专利技术第四方面所述的载体与病毒包装辅助质粒pHelper1.0载体和病毒包装辅助质粒pHelper2.0载体共转染哺乳动物细胞得到。本专利技术的第六方面提供一种宿主细胞，包括本专利技术第二方面所述siRNA、本专利技术第三方面所述shRNA、本专利技术第四方面所述载体和本专利技术第五方面所述重组慢病毒中的至少一种。本专利技术对所述宿主细胞的具体种类没有特别限定，例如为293T细胞。本专利技术的第七方面提供一种用于治疗下咽癌药物组合物，包含本专利技术第二方面所述的siRNA分子、本专利技术第三方面所述的shRNA分子，本专利技术第四方面所述的载体，本专利技术第五方面所述的重组慢病毒，或本专利技术第六方面所述的宿主细胞，以及药学上可接受的药物载体。如本文所用，所述的“ESCO2抑制剂”包括了拮抗剂、下调剂、阻滞剂、阻断剂等，只要它们能够下调ESCO2的表达水平。它们可以是化合物、化学小分子、生物分子。所述的生物分子可以是核酸水平(包括DNA、RNA)的，也可以是抑制ESCO2表达的病毒产品。所述的ESCO2抑制剂是指任何可降低ESCO2的活性、降低ESCO2的稳定性、下调ESCO2的表达、减少ESCO2有效作用时间的物质，这些物质均可用于本专利技术，作为对于下调ESCO2有用的物质。例如，所述的抑制剂是：核酸抑制物，蛋白抑制剂，核酸酶，核酸结合分子，只要其能够下调ESCO2的表达。本专利技术的有益效果相对于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术发现敲减ESCO2后可抑制下咽癌细胞株的增殖、迁移和侵袭，促进细胞凋亡，表明抑制ESCO2具有抑制下咽癌发生发展的作用，可作为新兴治疗靶点，针对下咽癌ESCO2高表达的病人给予降低ESCO2的表达，存在潜在治疗效果，ESCO2的抑制剂可用于制备治疗下咽癌的药物。2、本专利技术提供的siRNA能够特异性地降低ESCO2基因表达，具有良好的制备用于治疗下咽癌的药物潜力。附图说明图1示出了ESSCO2在下咽癌FaDu细胞中的表达情况。图2示出了RNA干扰载体阳性克隆琼脂糖凝胶电泳结果。泳道1：阴性对照(ddH2O)；泳道2：自连对照(空载体自连对照组)；泳道3：250bpMarker：从上至下依次为5kb、3kb、2kb、1.5kb、1kb、750bp、500bp、250bp、100bp；泳道4-8：A：单克隆psc45154-1、2、3、4、5，B：单克隆psc45156-1、2、3、4、5。图3示出了慢病毒滴度检测结果。图4示出了慢病毒感染FaDu细胞荧光图：图5示出了重组质粒对FaDu中ESCO2基因的敲减效率。图6示出了敲低ESCO2对FaDu细胞生长的影响。其中，shCtrl为对照组，shESCO2-1、shESCO2-2为实验组，A曲线为细胞生长的绝对数，B曲线细胞生长的相对值。(cellcount/fold为各实验组day1-day5相对day1的生长倍数)。图7示出了敲低ESCO2对FaDu细胞生长周期影响。其中，shCtrl为对照组，shESCO2-1、shESCO2-2为实验组。图8示出了敲低ESCO2对FaDu细胞增殖活性影响。其中，shCtrl为对照组，shESCO2-1、shESCO2-2为实验组(OD490反应具有活力的细胞的数量)。图9示出了敲低ESCO2对FaDu细胞凋亡影响。其中，shCtrl为对照组，shESCO2-1、shESCO2-2为实验组。图10示出了敲低ESCO2对FaDu细胞迁移能力影响。其中，shCtrl为对照组，shESCO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.ESCO2的抑制剂在制备用于治疗下咽癌的药物中的应用，所述的抑制剂选自以ESCO2蛋白或它们的转录本为靶序列、且能够抑制其蛋白表达或基因转录的反义核酸；或能表达或形成所述反义核酸的载体；或含有所述载体的重组细胞。/n

【技术特征摘要】
1.ESCO2的抑制剂在制备用于治疗下咽癌的药物中的应用，所述的抑制剂选自以ESCO2蛋白或它们的转录本为靶序列、且能够抑制其蛋白表达或基因转录的反义核酸；或能表达或形成所述反义核酸的载体；或含有所述载体的重组细胞。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物用于：
a)抑制下咽癌细胞增殖；
b)促进下咽癌细胞凋亡；
c)抑制下咽癌细胞迁移；
d)抑制下咽癌细胞侵袭；或
e)抑制下咽癌患者体内瘤体生长。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制剂为一种siRNA分子，其核苷酸序列如SEQIDNo.5或SEQIDNo.6所示。


4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制剂为一种shRNA分子，其编码序列如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示，或者如SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示。


5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制剂为一种载体，所述载体包含SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示序列，或包含SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓莉，张鼎伟，王正辉，任晓勇，许应龙，闫静，杨慧，刘亮亮，赵小燕，闫妍，狄海玉，
申请(专利权)人：西安交通大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：陕西;61