第三代测序用标签序列、接头序列、试剂盒和第三代测序建库方法技术

一种第三代测序用标签序列、接头序列、试剂盒和第三代测序建库方法。标签序列由若干连续的碱基组成，碱基中至少部分碱基是甲基化的碱基。接头序列包括上述标签序列。本发明专利技术使用甲基化的标签序列能够对常规拆分方法无法拆分的第三代测序数据进行拆分，大大提高了第三代测序数据的拆分率，本发明专利技术能够使第三代测序数据的整体拆分率达到85%左右。

Tag sequence, connector sequence, kit and library building method for the third generation sequencing

【技术实现步骤摘要】
第三代测序用标签序列、接头序列、试剂盒和第三代测序建库方法
本专利技术涉及第三代测序
，具体涉及一种第三代测序用标签序列、接头序列、试剂盒和第三代测序建库方法。
技术介绍
第三代测序(如Pacbio平台测序)基于边合成边测序的原理，以SMRT(单分子实时荧光测序技术)芯片为载体进行测序反应。测序时将基因组DNA打断成许多小片段，制成液滴后将其分散到不同的ZMW(zero-modewaveguides，零模波导)纳米孔中。当ZMW纳米孔底部聚合反应发生时，被不同荧光标记的核苷酸会在小孔的荧光探测区域中被聚合酶滞留，根据荧光的种类和荧光持续时间就可以判定模板DNA碱基组成的种类。Pacbio平台上每个SMRT芯片有100万个ZMW测序孔，平均可以产出5-15G数据，但是对于基因组较小的物种，所需要的数据量较少(数据需求小于1G)，往往需要把每个样本加上不同的分子标签(也称“标签序列”)，混合测序，最后通过标签序列拆分每个样本的序列。第二代测序平台，每张芯片可以产生多达1T的数据，但是单个样本一般不需要这么多数据，所以为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种第三代测序用标签序列，其特征在于，所述标签序列由若干连续的碱基组成，所述碱基中至少部分碱基是甲基化的碱基。/n

【技术特征摘要】
1.一种第三代测序用标签序列，其特征在于，所述标签序列由若干连续的碱基组成，所述碱基中至少部分碱基是甲基化的碱基。


2.根据权利要求1所述的标签序列，其特征在于，所述碱基中至少一种类型的碱基全部是甲基化的碱基；优选地，所述碱基中只有一种类型的碱基全部是甲基化的碱基；更优选地，所述碱基中腺嘌呤碱基全部是6-甲基腺嘌呤（6mA）；或者，所述碱基中胞嘧啶碱基全部是4-甲基胞嘧啶（4mC）或5-甲基胞嘧啶（5mC）。


3.根据权利要求1所述的标签序列，其特征在于，所述标签序列由6至20个碱基组成；优选地，所述标签序列由16个碱基组成。


4.一种第三代测序用接头序列，其特征在于，所述接头序列包括标签序列和与所述标签序列连接的其他序列，所述标签序列由若干连续的碱基组成，所述碱基中至少部分碱基是甲基化的碱基。


5.根据权利要求4所述的接头序列，其特征在于，所述标签序列的碱基中至少一种类型的碱基全部是甲基化的碱基；优选地，所述标签序列的碱基中只有一种类型的碱基全部是甲基化的碱基；更优选地，所述标签序列的碱基中腺嘌呤碱基全部是6-甲基腺嘌呤（6mA）；或者，所述标签序列的碱基中胞嘧啶碱基全部是4-甲基胞嘧啶（4mC）或5-甲基胞嘧啶（5mC）...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄标，骆备，黄金，吴传文，
申请(专利权)人：武汉华大医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42