一种用于基因组DNA提取的试剂盒及其应用制造技术

本申请公开了一种用于基因组DNA提取的试剂盒及其应用。本申请试剂盒包括裂解液、红细胞裂解液；裂解液含20‑300mM Tris‑HCl、20‑100mM EDTA、0.3‑2M NaCl、0.5‑5％PEG8000和0.5‑10％Triton X‑100、SDS或吐温20；红细胞裂解液含10‑100mM Tris‑HCl、1‑50mM EDTA、10‑300mM NaCl和0.01‑0.2％Triton X‑100。本申请试剂盒，通过裂解液和红细胞裂解液优化，能有效去除多糖，结合酚，防止酚与DNA结合，解决粘稠和浑浊问题，适用于多种不同样本，提取的基因组DNA纯度和得量都能满足各种下游实验使用需求。

A kit for genomic DNA extraction and its application

【技术实现步骤摘要】
一种用于基因组DNA提取的试剂盒及其应用
本申请涉及基因组DNA提取
，特别是涉及一种用于基因组DNA提取的试剂盒及其应用。
技术介绍
核酸是一类非常重要的生物大分子，它在生物的繁衍、生长、发育、衰老和死亡等一系列的生命进程中都发挥着不可替代的作用，堪称生物界的“主宰”，现在已成为生物化学、分子生物学、遗传学、生命医学等多个生命科学领域的重要研究课题。因此，从众多纷繁复杂的生物大分子里提取出高质量、高纯度的核酸，是开展其他研究必不可少的第一步。DNA提取的原则包括：保证DNA一级结构的完整性；不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；将其他生物大分子，如蛋白质、多糖和脂类分子等，的污染应降低到最低程度；排除其它核酸分子，如RNA，的污染。目前，DNA提取的方法主要分为三种：酚氯仿抽提法、离心柱法、磁珠法。酚氯仿抽提法是通过苯酚、氯仿对蛋白质变性、抽提，然后通过有机试剂沉淀而得到DNA；优点是成本低、易实现；缺点是特殊样本DNA纯度偏低，酚氯仿试剂有毒，且需要离心机不断离心，提取大量样本时效率较低。离心柱法主要原理是将对核酸有吸附作用的官能基团固定在离心柱膜上，通过加入不同的裂解试剂、洗涤试剂，并进行反复离心，以达到核酸与杂质分离的目的，获得纯化的核酸。离心柱法的优点是DNA纯度和质量较高，操作便捷、可进行微量提取；缺点是需要反复离心，不适用于大量提取。磁珠法的原理是在磁珠表面修饰有对核酸有吸附作用的特定活性官能基团，通过不同的裂解液结合液洗涤液在特定的条件下能够与目的物质进行特异性结合，同时利用磁珠自身的磁性，在外磁场的作用下可以方便的实现定向移动与富集，从而达到核酸与杂质分离的目的，进而实现对目标物质的分离纯化，获得纯化核酸。磁珠法的优点是提取便捷，安全无毒，无需离心，可适用于高通量提取；缺点是特殊样本纯度较差，易出现磁珠残留、洗脱液带颜色等现象。目前，市售的DNA提取试剂盒基本全部采用离心柱法或磁珠法。人组织、血细胞、唾液是医学检验领域最常见的基因组DNA提取检测样本。血细胞中的基因组DNA提取容易出现洗脱液粘稠、纯度偏低等问题。唾液中的基因组DNA提取也容易出现得量偏低、洗脱液粘稠、浑浊等问题。总的来说，目前市售的基因组DNA提取试剂盒，大部分都只能针对一种样本进行基因组DNA提取，例如血细胞中基因组DNA提取试剂盒，或唾液中基因组DNA提取试剂盒，并且，如前面提到的，现有的试剂盒普遍存在洗脱液粘稠、纯度偏低、得量偏低等问题。
技术实现思路
本申请的目的是提供一种改进的用于基因组DNA提取的试剂盒及其应用。为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：本申请的第一方面公开了一种用于基因组DNA提取的试剂盒，该试剂盒采用磁珠法对离体样本进行基因组DNA提取，其中，离体样本为人组织样本、血细胞或唾液，该试剂盒包括磁珠、裂解液、红细胞裂解液、结合液、清洗液1和清洗液2；裂解液中含有20-300mmol/L的Tris-HCl、20-100mmol/L的乙二胺四乙酸(EDTA)、0.3-2mol/L的NaCl、0.5％-5％的PEG8000，以及0.5％-10％的TritonX-100、SDS和Tween-20中的至少一种；红细胞裂解液中含有10-100mmol/L的Tris-HCl、1-50mmol/L的乙二胺四乙酸、10-300mmol/L的NaCl和0.01％-0.2％的TritonX-100。需要说明的是，本申请的试剂盒中提供了两种用于裂解的溶液，即裂解液和红细胞裂解液；其中，裂解液单独用于人组织样本和唾液的基因组DNA提取，红细胞裂解液与裂解液组合使用主要用于血细胞基因组DNA的提取；其余组份，包括磁珠、结合液、清洗液1和清洗液2都是通用的，即都可以用于人组织样本、血细胞和唾液。本申请的试剂盒，特别针对唾液和红细胞研发了两种用于裂解的溶液，即裂解液和红细胞裂解液，通过对两种裂解溶液的优化和改进，能够在裂解时，有效去除多糖，结合酚，防止酚与DNA结合，从而解决提取过程中出现的粘稠和浑浊等问题，提高人组织样本、血细胞和唾液基因组DNA提取的纯度和得量。本申请试剂盒中优化的两种裂解溶液，在进行裂解时，能够使蛋白质变性、染色体离析、释放核酸，适用于组织、血液、细胞、细菌等多种样本基因组DNA的提取。本申请试剂盒提取的基因组DNA在质量和得量上都能满足各种下游实验的要求，例如分子标记检测、基因测序等；并且，采用本申请的试剂盒进行基因组DNA提取，包括样本裂解、结合、清洗、洗脱总共仅需约1h左右，与市售同类型试剂盒相比，本申请试剂盒的流程简便，提取质量和效率高。可以理解，本申请的试剂盒可以适用于相对较复杂的各种临检常用样本的基因组DNA提取，例如组织、血细胞、唾液等；当然，也可以用于细菌等的基因组DNA提取。还需要说明的是，本申请的关键之一即裂解液和红细胞裂解液的优化改进，至于其它组分，例如磁珠、结合液、清洗液1和清洗液2，都可以参考现有的磁珠法试剂或试剂盒，例如结合液采用异丙醇或无水乙醇；但是，为了获得更好的基因组DNA提取效果，本申请的优选方案中，分别对清洗液1和清洗液2进行了限定，详见以下技术方案。另外，可以理解，本申请的试剂盒除了磁珠、裂解液、结合液、清洗液1和清洗液2以外，还可以包含其它磁珠法常规使用的试剂，例如蛋白酶K、洗脱液等。其中，蛋白酶K可以组合到本申请的试剂盒中，也可以市售购买。至于洗脱液，一般DNA提取采用的洗脱液为TE溶液或者直接采用无核酸酶的灭菌去离子水，TE溶液可以自行配制或者市售购买获得，灭菌去离子水是实验室常规使用的溶剂。因此，蛋白酶K和洗脱液可以根据需要选择性的组合在本申请的试剂盒中，在此不作具体限定。优选的，本申请的试剂盒只能够，裂解液由100mmol/L的Tris-HCl、20mmol/L的乙二胺四乙酸、1.4mol/L的NaCl、1％的PEG8000和1％的Tween-20组成；红细胞裂解液由30mmol/L的Tris-HCl、5mmol/L的乙二胺四乙酸、60mmol/L的NaCl和0.015％的TritonX-100组成。需要说明的是，以上组分和具体浓度是本申请的一种实现方式中具体采用的，证实具有较好基因组DNA提取效果的配方，不排除可以在本申请的优选配方基础上进行化学剂量允许的调整，例如本申请剂量正负5％左右偏差，都能够基本达到本申请的效果。优选的，清洗液1中含有1-4mol/L的异硫氰酸胍或盐酸胍，以及40％-70％的无水乙醇。优选的，清洗液1由2mol/L的盐酸胍和50％的无水乙醇组成。优选的，清洗液2中含有10-100mmol/L的NaCl和70％-80％的无水乙醇。优选的，清洗液2由50mmol/L的NaCl和75％的无水乙醇组成。需要说明的是，本申请的试剂盒，实际上对两种裂解溶液、清洗液1和清洗液2都分别有改进，因此，在要求较低的情况下，或者一些特殊使用情况下，本申请的两种裂解溶液、清洗液1和清洗液2都可以分别单独与现有的磁珠法试剂组合使本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于基因组DNA提取的试剂盒，所述试剂盒采用磁珠法对离体样本进行基因组DNA提取，所述离体样本为人组织样本、血细胞或唾液，其特征在于：所述试剂盒包括磁珠、裂解液、红细胞裂解液、结合液、清洗液1和清洗液2；/n所述裂解液中含有20-300mmol/L的Tris-HCl、20-100mmol/L的乙二胺四乙酸、0.3-2mol/L的NaCl、0.5％-5％的PEG8000，/n以及0.5％-10％的Triton X-100、SDS和Tween-20中的至少一种；/n所述红细胞裂解液中含有10-100mmol/L的Tris-HCl、1-50mmol/L的乙二胺四乙酸、10-300mmol/L的NaCl和0.01％-0.2％的Triton X-100。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于基因组DNA提取的试剂盒，所述试剂盒采用磁珠法对离体样本进行基因组DNA提取，所述离体样本为人组织样本、血细胞或唾液，其特征在于：所述试剂盒包括磁珠、裂解液、红细胞裂解液、结合液、清洗液1和清洗液2；
所述裂解液中含有20-300mmol/L的Tris-HCl、20-100mmol/L的乙二胺四乙酸、0.3-2mol/L的NaCl、0.5％-5％的PEG8000，
以及0.5％-10％的TritonX-100、SDS和Tween-20中的至少一种；
所述红细胞裂解液中含有10-100mmol/L的Tris-HCl、1-50mmol/L的乙二胺四乙酸、10-300mmol/L的NaCl和0.01％-0.2％的TritonX-100。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述裂解液由100mmol/L的Tris-HCl、20mmol/L的乙二胺四乙酸、1.4mol/L的NaCl、1％的PEG8000和1％的Tween-20组成；
所述红细胞裂解液由30mmol/L的Tris-HCl、5mmol/L的乙二胺四乙酸、60mmol/L的NaCl和0.015％的TritonX-100组成。


3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述清洗液1中含有1-4mol/L的异硫氰酸胍或盐酸胍，以及40％-70％的无水乙醇。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述清洗液1由2mol/L的盐酸胍和50％的无水乙醇组成。


5.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述清洗液2中含有10-100mmol/L的NaCl和70％-80％的无水乙醇；
优选的，所述清洗液2由50mmol/L的NaCl和75％的无水乙醇组成。


6.一种用于磁珠法提取基因组DNA的裂解液，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：许明炎，张晓妮，沈广强，张生，
申请(专利权)人：深圳市海普洛斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44