一种抽提拟南芥种子高质量RNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种抽提拟南芥种子高质量RNA的方法，包括：S1、将拟南芥种子在液氮中研磨成粉末并转移至第一离心管中；S2、向所述第一离心管中加入RNA提取试剂，震荡获得匀浆液；S3、将所述匀浆液在室温下孵育，而后离心，获得上清液；S4、在所述上清液中加入氯仿和浓度5mol/L的NaCl，充分混匀后再离心，获得上层水相；S5、将所述水相转移至一离心柱中并用RNeasy Mini Kit进行纯化，得到RNA样品。本发明专利技术的方法提取到的RNA样品质量好、纯度高、满足RNA‑Seq的试验要求且提取效率高。

A method of extracting high quality RNA from Arabidopsis seeds

【技术实现步骤摘要】
一种抽提拟南芥种子高质量RNA的方法
本专利技术涉及植物生物
，尤其是涉及一种抽提拟南芥种子高质量RNA的方法。
技术介绍
RNA(RibonucleicAcid，核糖核酸)是分子生物学研究的基础，优质、高纯度的RNA将极大地便利分子生物学和遗传学研究。拟南芥是遗传学研究的模式植物，从拟南芥中提取优质、高纯度的RNA将极大地方便分子生物学和遗传学等基础研究的开展。但与其它组织不同的是，拟南芥种子中往往含有较多的脂类、多糖、酚类和蛋白质等成分，严重影响RNA提取效率和提取质量。目前的提取方法常会遇到RNA产量不足、盐类或有机溶剂污染、样品降解等问题。随着第二代、第三代测序技术(RNA-seq)的发展，其测序文库构建对RNA纯度、浓度和完整性均具有更高要求。然而，采用常规提取手段获得的RNA难以满足RNA-Seq类型试验对RNA质量的要求。因此，研究抽提拟南芥种子高质量RNA的方法研究显得尤为重要。专利号为CN201410434938.4的专利技术专利公开了从烟草种子中提取RNA的方法，先用物理方法除去脂类物质，之后用醋酸钠和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抽提拟南芥种子高质量RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、将拟南芥种子在液氮中研磨成粉末并转移至第一离心管中；/nS2、向所述第一离心管中加入RNA提取试剂，震荡获得匀浆液；/nS3、将所述匀浆液在室温下孵育，而后离心，获得上清液；/nS4、在所述上清液中加入氯仿和浓度5mol/L的NaCl，充分混匀后再离心，获得上层水相；/nS5、将所述水相转移至一离心柱中并用RNeasy Mini Kit进行纯化，得到RNA样品。/n

【技术特征摘要】
1.一种抽提拟南芥种子高质量RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将拟南芥种子在液氮中研磨成粉末并转移至第一离心管中；
S2、向所述第一离心管中加入RNA提取试剂，震荡获得匀浆液；
S3、将所述匀浆液在室温下孵育，而后离心，获得上清液；
S4、在所述上清液中加入氯仿和浓度5mol/L的NaCl，充分混匀后再离心，获得上层水相；
S5、将所述水相转移至一离心柱中并用RNeasyMiniKit进行纯化，得到RNA样品。


2.如权利要求1所述的抽提拟南芥种子高质量RNA的方法，其特征在于：步骤S1中进行研磨时，边研磨边不断地加入液氮。


3.如权利要求1所述的抽提拟南芥种子高质量RNA的方法，其特征在于：步骤S2中所用的RNA提取试剂为PureLinkPlantRNAReagent，用量为拟南芥种子粉末的1～5倍体积。


4.如权利要求1所述的抽提拟南芥种子高质量RNA的方法，其特征在于：步骤S1中拟南芥种子的粉末用量为0.1～0.4mL。


5.如权利要求1所述的抽提拟南芥种子高质量RNA的方法，其特征在于：步骤S3中孵育的时间为5～10min。


6.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈沫先，胡琦娟，张建华，
申请(专利权)人：香港中文大学深圳研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44