一种用于RNA提取的试剂盒及其提取方法技术

一种用于RNA提取的试剂盒及其提取方法，它涉及生物技术领域。一种RNA提取试剂盒包含以下试剂组分：焦磷酸二乙酯、无菌双蒸水、异硫氰酸胍、十二烷基磺酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、β‑巯基乙醇、NaAC、水饱和酚、氯仿‑异戊醇、乙醇、甘油和山梨醇。采用上述技术方案后，本发明专利技术的有益效果为：它的设计合理，可以很好的提取人体、小鼠、烟草的组织RNA，提取步骤简单，成本低廉，易于广泛应用。它所需RNA样本量小，RNA提取率高，提取得到的RNA完整性极高，可以完全适用于测序、RT‑PCR和N‑count等等下游的研究工作。

A kit for RNA extraction and its extraction method

【技术实现步骤摘要】
一种用于RNA提取的试剂盒及其提取方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种用于RNA提取的试剂盒及其提取方法。
技术介绍
随着分子生物学的迅速发展，核酸的研究越来越多，组织样本被广泛应用于医学研究、尤其是临床诊断中。从组织样本中提取高质量的总RNA，是进行下游的测序、qPCR、芯片检测等技术的基础，但是，提取高质量的总RNA存在技术难点。首先，RNA提取要防止RNase的污染。RNase无处不在，在实验操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不当操作都有可能造成RNase污染，从而导致整个实验的失败(ShabanNM,HarveyS,PerrinoFW,etal.TheStructureoftheMammalianRNaseH2ComplexProvidesInsightintoRNA·DNAHybridProcessingtoPreventImmuneDysfunction*[J].JournalofBiologicalChemistry,2010,285.)。然而核酸在许多条件下均可能发生降解。造成核酸降解的外界物理因素如温度、湿度、紫外线等本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RNA提取试剂盒，其特征在于：它包含以下试剂组分：焦磷酸二乙酯、无菌双蒸水、异硫氰酸胍、十二烷基磺酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、β-巯基乙醇、NaAC、水饱和酚、氯仿-异戊醇、乙醇、甘油和山梨醇。/n

【技术特征摘要】
1.一种RNA提取试剂盒，其特征在于：它包含以下试剂组分：焦磷酸二乙酯、无菌双蒸水、异硫氰酸胍、十二烷基磺酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、β-巯基乙醇、NaAC、水饱和酚、氯仿-异戊醇、乙醇、甘油和山梨醇。


2.一种RNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于它包括以下步骤：步骤一，取一定量的组织，依次加入聚乙烯吡咯烷酮、巯基乙醇、液氮充分研磨成粉末后加入提取缓冲液，充分混匀；步骤二，依次加入NaAC、水饱和酚、氯仿-异戊醇，振荡混匀后进行冰浴、离心；步骤三，取上清，加入等体积酚/氯仿/异戊醇，充分混匀后进行冰浴、离心；步骤四，取上清，加入氯仿/异戊醇，再抽提一次；步骤五，取上清加入NaAC，混匀，加入等体积异丙醇混匀，-20℃放置；步骤六，将混合液至于离心机离心，弃上清，用乙醇清洗沉淀，两次，室温风干；步骤七，加入一定体积的焦磷酸二乙酯水，溶解沉淀，-80℃保存。


3.根据权利要求1所述的一种RNA提取试剂盒，其特征在于：所述的异硫氰酸胍、NaAC、甘油、山梨醇浓度分别为3-4.5M、1.5-2.5M、0.001-0.010％V/V、0.8-1.5M/L，NaAC的PH值在3.5-4.5之间，乙醇由75％的无水乙醇现用现配，焦磷酸二乙酯用于制备无RNase的双蒸水，无RNase的双蒸水用于配制试剂。


4.根据权利要求2所述的一种RNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于：所述的步骤一中加入聚乙烯吡咯烷酮的体积为1-2ml，加入疏基乙醇的体积为0.005-0.15ml，...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛晓，颉彦华，
申请(专利权)人：北京华颉基因医疗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11