一种血液RNA保护剂及其制备方法技术

一种血液RNA保护剂及其制备方法，它涉及医学检验技术领域。一种血液RNA保护剂由以下组分组成：EDTA水、柠檬酸钠、硫酸铵、月桂酸、月桂酰肌氨酸钠、2，4-癸二酸乙酯。按组分配比取上述原料根据一种血液RNA保护剂的制备方法进行制备即可得到一种血液RNA保护剂。本发明专利技术有益效果为：第一时间保护血液中的RNA,能更好地保证标本RNA的完整性。保证标本RNA的完整性。

【技术实现步骤摘要】
一种血液RNA保护剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医学检验
，具体涉及一种血液RNA保护剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]核糖核酸(RNA)存在于细胞及部分病毒、类病毒当中，并行使遗传信息载体的功能。其广泛参与各项重要的生命历程，对于生命活动的维系具有重要作用。根据RNA的功能可将RNA大致分为四类：1)mRNA：即信使RNA，主要功能是将DNA上的遗传信息精确无误地转录下来，以传递遗传信息；2)tRNA：具有特异识别、转运氨基酸功能；3)rRNA：核糖体的重要组成成分。4)microRNA：具有调控功能。由此可见，RNA在生物体内，对于生物体生命活性具有重要意义。
[0003]全血作为较易获取的人体标本，特别适用于实验室和临床检测。 RNA提取是进行诸如定量RT-PCR、微矩阵、RNA定位、cDNA文库的建立、基因表达和其他种类的下游应用研究的基础。但由于RNA自身结构为单链状态，极不稳定，同时广泛存在的RNaseA时刻发挥着降解 RNA的功能，其活性难以被抑制，使得从全血中提取RNA以及对RNA 的保存相对困难。
[0004]为了实现RNA功能探索及生理意义相关研究，通常需要对RNA进行分离纯化，并将纯化的RNA进行冷冻保存。RNA的易降解性使RNA 的保存面临严峻的挑战。目前，研究者通常采用添加RNA酶抑制剂的方法，人为添加RNA酶抑制剂到RNA溶液当中，以降低或抑制RNA 酶的催化活性，从而达到RNA保护的目的。
[0005]在RNA的实际应用中，RNA的保存依赖于不含有RNase的纯水或者加入EDTA等螯合剂的水溶液来溶解RNA并可在-80℃的超低温冰箱中保存一年，而对于样本量微少的RNA来说，在室温条件下冻存至-80℃过程中会造成不可逆的RNA断裂，同样在-80℃恢复至室温条件下再次的物理性损害会破坏微小RNA原本的生物活性。
[0006]市面上已有的RNA酶抑制物往往存在成本很高、运输存储困难、易变质、活性不稳定、反复冻融导致RNA损伤等问题。而血液中的 RNA含量较少，血液中RNA酶含量多，RNA在没有保护的状态下很容易降解消失，开发新型的、易储存运输、活性稳定的RNA保护剂对于 RNA保护及相关领域具有重要意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种血液 RNA保护剂及其制备方法，该保护剂能够抑制RNA酶活性，保护血液中的RNA不被降解。本专利技术将采集的血液与RNA保护剂以10：1的比例缓慢充分混匀后，血液中RNA在常温可保存3天，4℃温度下稳定保存至少7天，-20℃至-80℃可长期保存，适用于各种血液RNA的保护和储存。解决现有技术存在的血液长期存放时RNA容易被降解且提取率低的问题，该保护剂RNA保护剂中加入了0.5-1.2ml/l的月桂酰肌氨酸钠，月桂酰肌氨酸钠为白色至淡黄色液体，有特殊气味。溶于水、乙醇或甘油等醇水溶液中。在通常条件下，对热、酸、碱都比较稳定。在室温条件下具有极高的稳定性。并且该浓度范围的月桂酰肌氨酸钠能够避免细菌等微生物的存活，具有明显的抑
制细菌真菌等微生物的生长作用，这对于保护微小RNA来说是必要的，否则细菌真菌等微生物的代谢会产生RNase，不利于微小RNA的保存和反复使用，在这样的保护条件下，即使反复冻融RNA样本仍然具有很高的生物活性，避免了液态保存血液样本反复冻融造成的损伤。并且月桂酰肌氨酸钠的化学性质能够提高微小RNA结构稳定性并提高酶反应活性。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案是：一种血液RNA保护剂，由以下含量组分组成：EDTA水6-15mg/ml、柠檬酸钠 10-25mg/ml、硫酸铵500-750mg/ml、月桂酸6-10mg/ml、月桂酰肌氨酸钠0.5-1.2ml/l、2，4-癸二酸乙酯1-3ml/l。它的制备方法包含以下步骤：
[0009]步骤一：将各组分按配方称取到容器中；
[0010]步骤二：向步骤一中加入500ml灭菌的超纯水，待所有组分溶解后全量转移到1L容量瓶中，多次清洗初次溶解的容器，洗涤液全量转移到容量瓶中，最后定容至1L；
[0011]步骤三：将步骤二得到的溶液通过PH调至物将PH值调至 7.2-8.0，得到血液RNA保护剂。
[0012]所述PH调至物为NaOH。
[0013]所述的血液RNA保护剂与外界采取的血液以1：10的比例缓慢充分均匀混合形成混合液。
[0014]所述混合液中的RNA在在常温可保存3天，4℃温度下稳定保存至少7天，-20℃至-80℃可长期保存，适用于各种血液RNA的保护和储存。
[0015]采用上述技术方案后，本专利技术有益效果为：第一时间保护血液中的RNA,能更好地保证标本RNA的完整性。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0017]图1是本专利技术图1采用Qiagen、Ambion两种RNAlater保存液保存3天后的RNA的电泳结果；
[0018]图2是采用本专利技术血液RNA保护剂4℃保存1天的血液RNA的电泳结果；
[0019]图3是采用本专利技术血液RNA保护剂4℃保存3天的血液RNA的电泳结果；
[0020]图4是采用本专利技术血液RNA保护剂4℃保存7天的血液RNA的电泳结果。
具体实施方式
[0021]实施例1
[0022]随机抽取1个全血样本，平均分成2组，每组两个。其中1组置于Qiagen RNAlater保存液中，另1组置于Ambion RNAlater保护剂中，常温保存三天后对RNA进行提取，提取结果如表1。从表1中可以看出，采用Qiagen、Ambion两种RNAlater保存液保存3天后的RNA的260/230比值分别为0.42、0.51、0.34、0.46，均严重偏低。这说明提取出来的RNA中残留有大量盐分。RNA降解较为严重。 RNA提取浓度偏低，说明RNA降解较为严重，如图1所示。
[0023]表1：采用Qiagen、Ambion两种RNAlater保存液保存3天后RNA的提取浓度
[0024][0025]图1采用Qiagen、Ambion两种RNAlater保存液保存3天后的RNA的电泳结果
[0026]实施例2对比试验
[0027]随机抽取4个全血样本，置于本专利技术所述血液RNA保护剂中。分别在4℃保存1天、3天、7天后对血液样本RNA进行提取。提取结果如表2-4。4℃保存1天、3天及4℃保存7天后的RNA电泳图如图 2-4。大量的实验数据表明，置于本专利技术所述的血液RNA保护剂中的血液提取RNA时，血液样品可在常温稳定保存至少3天，4℃温度下稳定保存至少7天。采用本专利技术提供的血液RN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血液RNA保护剂，其特征在于它由以下含量组分组成：EDTA水6-15mg/ml、柠檬酸钠10-25mg/ml、硫酸铵500-750mg/ml、月桂酸6-10mg/ml、月桂酰肌氨酸钠0.5-1.2ml/l、2，4-癸二酸乙酯1-3ml/l。2.一种血液RNA保护剂的制备方法，其特征在于它包含以下步骤：步骤一：将各组分按配方称取到容器中；步骤二：向步骤一中加入500ml灭菌的超纯水，待所有组分溶解后全量转移到1L容量瓶中，多次清洗初次溶解的容器，洗涤液全量转移到容量瓶中，最后定容至1L；步骤三：将...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛晓，颉彦华，
申请(专利权)人：北京华颉基因医疗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：