一种人血液样本的保存及RNA提取方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种人血液样本的保存及RNA提取方法，先采用装有抗凝剂和Trizol试剂的负压采血管采集血液，室温保存，然后进行RNA提取。采血管内的抗凝剂、Trizol试剂和负压的比例为0.8‑1.2mL:5.5‑8.0mL:2.8‑4.0mL，血液离体后立即得到保护，室温下保存30天，提取得到的RNA的RIN值超过8.0，完整性好，同时纯度高；RNA提取方法简单，能够在15分钟内完成，提取率高，减少血液采集量。总之，采用本发明专利技术的负压采血管采集、室温保存血液，简化了提取方法，避免冷链运输，降低成本，便于推广。

A Method for Preservation and RNA Extraction of Human Blood Samples

The invention belongs to the field of biotechnology, and relates to a method for storing human blood samples and extracting RNA. First, blood is collected by negative pressure blood collection with anticoagulant and Trizol reagent, then stored at room temperature, and then RNA is extracted. The ratio of anticoagulant, Trizol reagent and negative pressure is 0.8 1.2 mL: 5.5 8.0 mL: 2.8 4.0 mL. The blood is protected immediately after being isolated and stored at room temperature for 30 days. The RIN value of the extracted RNA is over 8.0 with good integrity and high purity. The method of RNA extraction is simple and can be completed in 15 minutes with high extraction rate and reduced blood collection. In a word, the negative pressure blood collection and blood preservation at room temperature simplify the extraction method, avoid cold chain transportation, reduce costs and facilitate popularization.

【技术实现步骤摘要】
一种人血液样本的保存及RNA提取方法
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种人血液样本的保存及RNA提取方法。
技术介绍
随着分子生物学的迅速发展，核酸的研究越来越多。而人血是临床上最容易获得的样本之一，被广泛应用于医学研究、尤其是临床诊断中。从血液样本中提取高质量的总RNA，是进行下游的测序、qPCR、芯片检测等技术的基础。但是，提取高质量的总RNA存在技术难点，RNA难以保存是基因表达组研究的一大瓶颈。首先，RNA非常脆弱，极难保存，由于自然界广泛存在的RNA酶，包括组织内及病原体的RNA酶，使得RNA在室温几分钟内就开始降解，30分钟内完全降解成为检测不可用的小片段，限制了RNA的试验研究。其次，目前RNA的采集和运输要求冷链，而且是干冰冷链，极大限制了RNA的使用范围，提高了运输成本；而且大量运输使得空运成为不可能。最后，现有的RNA提取方法存在操作复杂，提取率低，RNA完整性不好的问题；或者提取用试剂盒的价格昂贵，还需对样本进行特定的预处理，难以推广。中国专利CN108244094A公开了一种血液保存剂及其配套的采血管，尤其公开了血液保存剂的组成为：抗凝剂、防腐剂、细胞膜本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人血液样本的保存及RNA提取方法，包括采集血液，保存血液样本，和血液样本中RNA的提取，其特征在于，所述采集血液的方法为：用装有抗凝剂和Trizol试剂的负压采血管采集血液，用手振荡10‑15S，得到血液样本，室温保存。

【技术特征摘要】
1.一种人血液样本的保存及RNA提取方法，包括采集血液，保存血液样本，和血液样本中RNA的提取，其特征在于，所述采集血液的方法为：用装有抗凝剂和Trizol试剂的负压采血管采集血液，用手振荡10-15S，得到血液样本，室温保存。2.根据权利要求1所述的人血液样本的保存及RNA提取方法，其特征在于，所述血液样本中RNA的提取步骤包括：S1.上下翻转血液样本，用枪头吹吸5-10次至血液样本均匀，移取400μL血液样本至1.5mL的离心管内，加入氯仿，漩涡振荡15-20S，室温孵育10-15min，离心；S2.将步骤S1离心后的上清液转移至1.5mL的离心管内，加入异丙醇，漩涡振荡5-10S，室温孵育10-12min，离心，移除上清液，离心管内的沉淀物备用；S3.往步骤S2中离心管内的沉淀物中加入体积浓度为75％的乙醇，翻转离心管5-10次，离心，移除上清液，室温下晾置，得到RNA。3.根据权利要求1所述的人血液样本的保存及RNA提取方法，其特征在于，所述用于采集血液的负压采血管内的抗凝剂、Trizol试剂和负压的比例为0.8-1.2mL:5.5-8.0mL:2.8-4.0mL。4.根据权利要求2所述的人血液样本的保存及RNA提取方法，其特征在于，还至少包括以下技术特征之一：所述步骤S1中，上下翻转血液样本的次数为5-10次，加入氯仿的体积为移入离心管内的血液样本中Trizol试剂的体积的1/5-1/4，离心的条件为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：颉彦华，
申请(专利权)人：北京华颉基因医疗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11