一种广谱高效提取植物ＲＮＡ的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种广谱、高效从各种植物组织中提取ＲＮＡ的方法，属生物化学技术领域。以硼酸缓冲液为缓冲体系首先有效分离和富集植物组织ＲＮＡ，再以三羟甲基氨基甲烷Ｔｒｉｓ－盐酸ＨＣｌ－乙二胺四乙酸钠ＥＤＴＡ－Ｎａ２－氯化钠ＮａＣｌ为提取缓冲液、十六烷基三甲基溴化铵ＣＴＡＢ为去污剂，并加入１ｍｏｌ／Ｌ异硫氰酸胍作为强变性剂迅速抑制ＲＮａｓｅ活性，提取高品质ＲＮＡ。该方法不仅可以提取棉花胚珠、花药、叶片、纤维等组织中的ＲＮＡ，而且可以从拟南芥、水稻、马塘以及香蕉（果皮、果肉）、马尾松、雪松等顽拗性植物中提取高品质的ＲＮＡ。该方法提取ＲＮＡ产率高，纯度高，没有盐类的污染。成本低，适合商品化开发，成为一种广谱、高效提取植物ＲＮＡ的专用试剂盒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种广谱、高效提取植物RNA的方法，属于生物化学
，适用于 从各种植物，包括富含多糖多酚及次生代谢物质的顽拗性植物组织中提取高质量的总RNA。
技术介绍
从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行 Northern杂交分析，纯化mRNA以用于体外翻译或构建cDNA文库，大规模转录组和miRNA测 序分析，基因芯片分析，RT-PCR及差显分析等功能基因组学和分子生物学研究，都需要高质 量的完整RNA。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的基 本前提，同时也是关键步骤。植物组织富含酚类化合物、多糖以及某些尚无法确定的次生代谢产物，而且RNase 的活性较高。在完整的细胞内，这些物质与核酸因区隔化分布而在空间上彼此隔离，但当 组织被研磨，细胞结构破坏之后，这些物质就会与RNA相互作用酚类化合物被氧化后会与 RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA的丢失，或形成不溶性 复合物；而多糖会形成难溶的胶状物，与RNA共沉淀下来；萜类化合物和RNase会分别造成 RNA的化学降解和酶解。一些顽拗性植本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种广谱、高效从植物中提取ＲＮＡ的试剂盒，包括：　　（１）提取缓冲溶液Ⅰ，即硼砂－十二烷基磺酸钠ＳＤＳ提取缓冲液：质量体积百分比浓度为２％的ＳＤＳ，０．０１２５ｍｏｌ／Ｌ硼砂，用硼酸调节ｐＨ到８．５，加入焦炭酸二乙酯ＤＥＰＣ使浓度达到０．１％体积百分比，高温高压灭菌；　　（２）提取缓冲溶液Ⅱ，即十六烷基三甲基溴化铵ＣＴＡＢ提取缓冲液：１００ｍｏｌ／Ｌ　ｐＨ为８．０的三羟甲基氨基甲烷Ｔｒｉｓ－盐酸ＨＣｌ，２０ｍｍｏｌ／Ｌ　ｐＨ为８．０的乙二胺四乙酸钠ＥＤＴＡ－Ｎａ２，质量体积百分比浓度为２％的ＣＴＡＢ，１．４ｍｏｌ／Ｌ氯化钠ＮａＣｌ，质量体积百分比浓度为２％的聚乙烯吡咯烷酮ＰＶＰ，体积百分比浓度...

【技术特征摘要】
一种广谱、高效从植物中提取RNA的试剂盒，包括(1)提取缓冲溶液I，即硼砂 十二烷基磺酸钠SDS提取缓冲液质量体积百分比浓度为2％的SDS，0.0125mol/L硼砂，用硼酸调节pH到8.5，加入焦炭酸二乙酯DEPC使浓度达到0.1％体积百分比，高温高压灭菌；(2)提取缓冲溶液II，即十六烷基三甲基溴化铵CTAB提取缓冲液100mol/L pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷Tris 盐酸HCl，20mmol/L pH为8.0的乙二胺四乙酸钠EDTA Na2，质量体积百分比浓度为2％的CTAB，1.4mol/L氯化钠NaCl，质量体积百分比浓度为2％的聚乙烯吡咯烷酮PVP，体积百分比浓度为1％的β 巯基乙醇，1mol/L异硫氰酸胍；(3)3mol/L pH为5.2的醋酸钠NaAc溶液4.801g NaAc·3H2O或3.566g NaAc·H2O溶于8mL水，用冰醋酸调pH至5.2，加入10μL DEPC，定容至10mL，高温高压灭菌；(4)8mol/L氯化锂LiCl33.91g LiCl溶于100mL水，加入100μL DEPC，高温高压灭菌；(5)异丙醇纯度100％；(6)DEPC水或称无RNase水体积百分比浓度0.1％DPEC的双蒸水溶液，高温高压灭菌。2.权利要求1所述试剂盒用于从植物中提取RNA的方法，其特征在于以硼酸缓冲液 为缓冲体系首先有效分离和富集植物组织RNA，再以Tris-HCl-EDTA-NaCl为缓冲液、CTAB 为去污剂并加入lmol/L异硫氰酸胍抑制RNase活性，提取纯品RNA。3.根据权利要求2所述一种从植物中提取RNA的方法，其特征在于(1)向IOmL离心管中加入3.OmL提取缓冲溶液I、0. 25mL β -巯基乙醇、2. OmL pH为 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘康，李茂峰，王晋，惠颖，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]