一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途技术

本公开提供了一种抑制载脂蛋白C3(ApoC3)基因表达的siRNA，含有该siRNA的药物组合物和缀合物。所述siRNA中的每个核苷酸均为修饰的核苷酸，该siRNA含有正义链和反义链，所述正义链含有核苷酸序列A，所述核苷酸序列A与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列长度相等，且不多于3个核苷酸差异，所述反义链含有核苷酸序列B，所述核苷酸序列B与SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列长度相等，且不多于3个核苷酸差异。本公开提供的siRNA及其药物组合物和缀合物，可以有效治疗和/或预防血脂异常。

A nucleic acid, composition and conjugate containing the nucleic acid, preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
技术介绍
血脂异常，又名高脂血症，是脂肪代谢或运转异常，使血浆脂质高于正常值的一种全身性疾病，正严重威胁着全球患者的健康。现有的治疗血脂异常的药物主要有他汀类、胆固醇吸收抑制剂、树脂类、普罗步考、贝特类和烟酸及其衍生物。载脂蛋白C3(APOC3)在脂质代谢中具有重要作用，携带有APOC3突变基因的人血液循环中APOC3的表达量下降46％，血浆内甘油三酯水平较普通人下降39％，同时较低的血脂水平可使APOC3突变基因携带者患心脏病的风险比非携带者降低35.1％。因此，若能从基因水平沉默基因表达，阻断APOC3的生成，无疑将是最为理想的治疗手段。小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)可基于RNA干扰(RNA interference，RNAi)这一机制，以序列特异性的方式抑制或阻断任何感兴趣的目的基因的表达，从而达到治疗疾病的目的。siRNA稳定化修饰及其递送系统是小RNA药物开发中的两个关键技术。
技术实现思路
在一些实施方式中，本公开提供了一种siRNA缀合物，该缀合物具有式(1)所示的结构：其中：n1为选自1-3的整数，n3为选自0-4的整数；m1、m2和m3独立地为选自2-10的整数；R10、R11、R12、R13、R14和R15各自独立地为H，或选自于由以下基团所组成的组：C1-C10烷基、C1-C10卤代烷基以及C1-C10烷氧基；R3为式A59所示结构的基团：其中，E1为OH、SH或BH2，Nu为siRNA；所述siRNA中的每个核苷酸各自独立地为修饰或未修饰的核苷酸，所述siRNA含有正义链和反义链，所述正义链包含核苷酸序列1，所述反义链包含核苷酸序列2，所述核苷酸序列1和所述核苷酸序列2至少部分地反向互补形成双链区，所述核苷酸序列1与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列长度相等，且不多于3个核苷酸差异，且所述核苷酸序列2与SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列长度相等，且不多于3个核苷酸差异：5'-CAAUAAAGCUGGACAAGAZ-3'(SEQ ID NO:1)；5'-Z'UCUUGUCCAGCUUUAUUG-3'(SEQ ID NO:2)；其中，Z为A，Z'为U，所述核苷酸序列1中包含位置对应于Z的核苷酸ZA，所述核苷酸序列2中包含位置对应于Z'的核苷酸Z'B，所述Z'B是所述反义链5'末端的第一个核苷酸；R2是长度为1-20个碳原子的直链亚烷基，其中一个或多个碳原子任选地被选自于以下基团所组成的组中的一个或多个所替换：C(O)、NH、O、S、CH＝N、S(O)2、C2-C10亚烯基、C2-C10亚炔基、C6-C10亚芳基、C3-C18亚杂环基和C5-C10亚杂芳基；并且其中，R2可任选地具有由以下基团所组成的组中的任何一个或多个的取代基：C1-C10烷基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C1-C10卤代烷基、-OC1-C10烷基、-OC1-C10烷基苯基、-C1-C10烷基-OH、-OC1-C10卤代烷基、-SC1-C10烷基、-SC1-C10烷基苯基、-C1-C10烷基-SH、-SC1-C10卤代烷基、卤素取代基、-OH、-SH、-NH2、-C1-C10烷基-NH2、-N(C1-C10烷基)(C1-C10烷基)、-NH(C1-C10烷基)、氰基、硝基、-CO2H、-C(O)O(C1-C10烷基)、-CON(C1-C10烷基)(C1-C10烷基)、-CONH(C1-C10烷基)、-CONH2，-NHC(O)(C1-C10烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C1-C10烷基)C(O)(C1-C10烷基)、-N(C1-C10烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C1-C10烷基、-C(O)C1-C10烷基苯基、-C(O)C1-C10卤烷基、-OC(O)C1-C10烷基、-SO2(C1-C10烷基)、-SO2(苯基)、-SO2(C1-C10卤代烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C10烷基)、-SO2NH(苯基)、-NHSO2(C1-C10烷基)、-NHSO2(苯基)和-NHSO2(C1-C10卤代烷基)；每个L1是长度为1-70个碳原子的直链亚烷基，其中一个或多个碳原子任选地被选自于以下基团所组成的组中的一个或多个所替换：C(O)、NH、O、S、CH＝N、S(O)2、C2-C10亚烯基、C2-C10亚炔基、C6-C10亚芳基、C3-C18亚杂环基和C5-C10亚杂芳基；并且其中，L1可任选地具有由以下基团所组成的组中的任何一个或多个的取代基：C1-C10烷基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C1-C10卤代烷基、-OC1-C10烷基、-OC1-C10烷基苯基、-C1-C10烷基-OH、-OC1-C10卤代烷基、-SC1-C10烷基、-SC1-C10烷基苯基、-C1-C10烷基-SH、-SC1-C10卤代烷基、卤素取代基、-OH、-SH、-NH2、-C1-C10烷基-NH2、-N(C1-C10烷基)(C1-C10烷基)、-NH(C1-C10烷基)、氰基、硝基、-CO2H、-C(O)O(C1-C10烷基)、-CON(C1-C10烷基)(C1-C10烷基)、-CONH(C1-C10烷基)、-CONH2，-NHC(O)(C1-C10烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C...

【技术保护点】
一种siRNA缀合物，该缀合物具有式(1)所示的结构：/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171201 CN 2017112493450;20171229 CN 201711486999一种siRNA缀合物，该缀合物具有式(1)所示的结构：



其中，
n1为选自1-3的整数，n3为选自0-4的整数；
m1、m2和m3独立地为选自2-10的整数；
R
10、R
11、R
12、R
13、R
14和R
15各自独立地为H，或选自于由以下基团所组成的组：C
1-C
10烷基、C
1-C
10卤代烷基以及C
1-C
10烷氧基；

R
3为式A59所示结构的基团：




其中，E
1为OH、SH或BH
2，Nu为siRNA；

所述siRNA中的每个核苷酸各自独立地为修饰或未修饰的核苷酸，所述siRNA含有正义链和反义链，所述正义链包含核苷酸序列1，所述反义链包含核苷酸序列2，所述核苷酸序列1和所述核苷酸序列2至少部分地反向互补形成双链区，所述核苷酸序列1与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列长度相等，且不多于3个核苷酸差异，且所述核苷酸序列2与SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列长度相等，且不多于3个核苷酸差异：
5'-CAAUAAAGCUGGACAAGAZ-3'(SEQ ID NO:1)，
5'-Z'UCUUGUCCAGCUUUAUUG-3'(SEQ ID NO:2)；
其中，Z为A，Z'为U，
所述核苷酸序列1中包含位置对应于Z的核苷酸Z
A，所述核苷酸序列2中包含位置对应于Z'的核苷酸Z'
B，所述Z'
B是所述反义链5'末端的第一个核苷酸；

R
2是长度为1-20个碳原子的直链亚烷基，其中一个或多个碳原子任选地被选自于以下基团所组成的组中的一个或多个所替换：C(O)、NH、O、S、CH＝N、S(O)
2、C
2-C
10亚烯基、C
2-C
10亚炔基、C
6-C
10亚芳基、C
3-C
18亚杂环基和C
5-C
10亚杂芳基；并且其中R
2可任选地具有由以下基团所组成的组中的任何一个或多个的取代基：C
1-C
10烷基、C
6-C
10芳基、C
5-C
10杂芳基、C
1-C
10卤代烷基、-OC
1-C
10烷基、-OC
1-C
10烷基苯基、-C
1-C
10烷基-OH、-OC
1-C
10卤代烷基、-SC
1-C
10烷基、-SC
1-C
10烷基苯基、-C
1-C
10烷基-SH、-SC
1-C
10卤代烷基、卤素取代基、-OH、-SH、-NH
2、-C
1-C
10烷基-NH
2、-N(C
1-C
10烷基)(C
1-C
10烷基)、-NH(C
1-C
10烷基)、氰基、硝基、-CO
2H、-C(O)O(C
1-C
10烷基)、-CON(C
1-C
10烷基)(C
1-C
10烷基)、-CONH(C
1-C
10烷基)、-CONH
2，-NHC(O)(C
1-C
10烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C
1-C
10烷基)C(O)(C
1-C
10烷基)、-N(C
1-C
10烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C
1-C
10烷基、-C(O)C
1-C
10烷基苯基、-C(O)C
1-C
10卤烷基、-OC(O)C
1-C
10烷基、-SO
2(C
1-C
10烷基)、-SO
2(苯基)、-SO
2(C
1-C
10卤代烷基)、-SO
2NH
2、-SO
2NH(C
1-C
10烷基)、-SO
2NH(苯基)、-NHSO
2(C
1-C
10烷基)、-NHSO
2(苯基)和-NHSO
2(C
1-C
10卤代烷基)；

每个L
1是长度为1-70个碳原子的直链亚烷基，其中一个或多个碳原子任选地被选自于以下基团所组成的组中的一个或多个所替换：C(O)、NH、O、S、CH＝N、S(O)
2、C
2-C
10亚烯基、C
2-C
10亚炔基、C
6-C
10亚芳基、C
3-C
18亚杂环基和C
5-C
10亚杂芳基；并且其中，L
1可任选地具有由以下基团所组成的组中的任何一个或多个的取代基：C
1-C
10烷基、C
6-C
10芳基、C
5-C
10杂芳基、C
1-C
10卤代烷基、-OC
1-C
10烷基、-OC
1-C
10烷基苯基、-C
1-C
10烷基-OH、-OC
1-C
10卤代烷基、-SC
1-C
10烷基、-SC
1-C
10烷基苯基、-C
1-C
10烷基-SH、-SC
1-C
10卤代烷基、卤素取代基、-OH、-SH、-NH
2、-C
1-C
10烷基-NH
2、-N(C
1-C
10烷基)(C
1-C
10烷基)、-NH(C
1-C
10烷基)、氰基、硝基、-CO
2H、-C(O)O(C
1-C
10烷基)、-CON(C
1-C
10烷基)(C
1-C
10烷基)、-CONH(C
1-C
10烷基)、-CONH
2，-NHC(O)(C
1-C
10烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C
1-C
10烷基)C(O)(C
1-C
10烷基)、-N(C
1-C
10烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C
1-C
10烷基、-C(O)C
1-C
10烷基苯基、-C(O)C
1-C
10卤烷基、-OC(O)C
1-C
10烷基、-SO
2(C
1-C
10烷基)、-SO
2(苯基)、-SO
2(C
1-C
10卤代烷基)、-SO
2NH
2、-SO
2NH(C
1-C
10烷基)、-SO
2NH(苯基)、-NHSO
2(C
1-C
10烷基)、-NHSO
2(苯基)和-NHSO
2(C
1-C
10卤代烷基)；


表示基团连接至分子其余部分的位点；

M
1表示靶向基团。



根据权利要求1所述的siRNA缀合物，其中，每个L
1独立地选自式A1-A26基团中的一种或多种的连接组合：







其中，j1为1-20的整数；j2为1-20的整数；
R’为C
1-C
10的烷基；

Ra选自式A27-A45基团或其任意组合所组成的组：






Rb为C
1-C
10的烷基。



根据权利要求2所述的siRNA缀合物，其中，L
1选自A1、A4、A5、A6、A8、A10、A11、A13中的一种或多种的连接组合。



根据权利要求2或3中所述的siRNA缀合物，其中，L
1选自A1、A4、A8、A10和A11中至少2个的连接组合。



根据权利要求2-4中任一项所述的siRNA缀合物，其中，L
1选自A1、A8、A10中至少2个的连接组合。



根据权利要求1-5中任一项所述的siRNA缀合物，其中，L
1的长度为3-25个原子。



根据权利要求1-6中任一项所述的siRNA缀合物，其中，L
1的长度为4-15个原子。



根据权利要求2-7中任一项所述的siRNA缀合物，其中，j1为2-10的整数，j2为2-10的整数，R’为C
1-C
4的烷基，Ra为A27、A28、A29、A30和A31中的一种，Rb为C
1-C
5的烷基。



根据权利要求2-8中任一项所述的siRNA缀合物，其中，j1为3-5的整数，j2为3-5的整数，R’为甲基、乙基和异丙基中的一种，Ra为A27或A28，Rb为甲基、乙基、异丙基和丁基中的一种。


根据权利要求1-9中任一项所述的siRNA缀合物，其中，n1为1-2的整数，n3为0-1的整数，且n1+n3＝2-3。


根据权利要求1-10中任一项所述的siRNA缀合物，其中，m1、m2和m3各自独立地为2-5的整数。


根据权利要求1-11中任一项所述的siRNA缀合物，其中，m1＝m2＝m3。


根据权利要求1-12中任一项所述的siRNA缀合物，其中，每个所述靶向基团独立地为与哺乳动物肝细胞表面的去唾液酸糖蛋白受体亲和的配体。


根据权利要求1-13中任一项所述的siRNA缀合物，其中，每个所述靶向基团独立地为去唾液酸糖蛋白或糖。


根据权利要求1-14中任一项所述的siRNA缀合物，其中，每个所述靶向基团独立地选自D-吡喃甘露糖、L-吡喃甘露糖、D-阿拉伯糖、D-呋喃木糖、L-呋喃木糖、D-葡萄糖、L-葡萄糖、D-半乳糖、L-半乳糖、α-D-呋喃甘露糖、β-D-呋喃甘露糖、α-D-吡喃甘露糖、β-D-吡喃甘露糖、α-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃葡萄糖、α-D-呋喃葡萄糖、β-D-呋喃葡萄糖、α-D-呋喃果糖、α-D-吡喃果糖、α-D-吡喃半乳糖、β-D-吡喃半乳糖、α-D-呋喃半乳糖、β-D-呋喃半乳糖、葡糖胺、唾液酸、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺、N-三氟乙酰基半乳糖胺、N-丙酰基半乳糖胺、N-正丁酰基半乳糖胺、N-异丁酰基半乳糖胺、2-氨基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖、2-脱氧-2-甲基氨基-L-吡喃葡萄糖、4,6-二脱氧-4-甲酰胺基-2,3-二-O-甲基-D-吡喃甘露糖、2-脱氧-2-磺氨基-D-吡喃葡萄糖、N-乙醇酰基-α-神经氨酸、5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖、2,3,4-三-O-乙酰基-1-硫代-6-O-三苯甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷甲酯、4-硫代-β-D-吡喃半乳糖、3,4,6,7-四-O-乙酰基-2-脱氧-1,5-二硫代-α-D-吡喃葡庚糖苷乙酯、2,5-脱水-D-阿洛糖腈、核糖、D-核糖、D-4-硫代核糖、L-核糖、L-4-硫代核糖中的一种。


根据权利要求1-15中任一项所述的siRNA缀合物，其中，至少一个或每个所述靶向基团为半乳糖或N-乙酰半乳糖胺。


根据权利要求1-16中任一项所述的siRNA缀合物，其中，R
10、R
11、R
12、R
13、R
14和R
15独立地为H、甲基或乙基。



根据权利要求1-17中任一项所述的siRNA缀合物，其中，R
2上同时含有与含氮骨架上的N连接的位点和与R
3中的P连接的位点。



根据权利要求18所述的siRNA缀合物，其中，R
2上所述与含氮骨架上的N连接的位点与N形成酰胺键，所述与R
3中的P连接的位点与P形成磷酸酯键。



根据权利要求1-19中任一项所述的siRNA缀合物，其中，R
2选自B5、B6、B5’或B6’：




其中，
表示基团共价键连接的位点，q
2为1-10的整数。



根据权利要求20所述的siRNA缀合物，其中，q
2为1-5的整数。



根据权利要求1-21中任一项所述的siRNA缀合物，其中，该缀合物具有式(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、(18)、(19)、(20)、(21)或(22)所示的结构：




















根据权利要求1-22中任一项所述的siRNA缀合物，其中，式A59中的P连接到siRNA正义链或反义链的端部，所述端部指所述正义链或反义链中从其一端起算的前4个核苷酸。


根据权利要求1-23中任一项所述的siRNA缀合物，其中，式A59中的P连接到所述siRNA正义链或反义链的末端。


根据权利要求1-24中任一项所述的siRNA缀合物，其中，式A59中的P连接到所述siRNA正义链的3'末端。


根据权利要求1-25中任一项所述的siRNA缀合物，其中，式A59中的P通过形成磷酸二酯键而连接至所述siRNA中的核苷酸的2'位、3'位或5'位。


根据权利要求1-26中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述核苷酸序列1与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列不多于1个核苷酸差异，和/或所述核苷酸序列2与SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列不多于1个核苷酸差异。


根据权利要求1-27中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述核苷酸序列2与SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列之间的核苷酸差异包括Z'
B位置处的差异，且Z'
B选自A、C或G。



根据权利要求1-28中任一项所述的siRNA缀合物，其中，Z
A是与Z'
B互补的核苷酸。



根据权利要求1-29所述的siRNA缀合物，其中，所述核苷酸序列1和所述核苷酸序列2基本上反向互补、实质上反向互补或完全反向互补；所述基本上反向互补是指两个核苷酸序列之间存在不多于3个的碱基错配；所述实质上反向互补是指两个核苷酸序列之间存在不多于1个的碱基错配；完全反向互补是指两个核苷酸序列之间没有错配。


根据权利要求1-30所述的siRNA缀合物，其中，所述正义链还含有核苷酸序列3，所述反义链还含有核苷酸序列4，所述核苷酸序列3和所述核苷酸序列4的长度各自为1-4个核苷酸，所述核苷酸序列3连接在所述核苷酸序列1的5'末端，并且所述核苷酸序列4连接在所述核苷酸序列2的3'末端，所述核苷酸序列3和所述核苷酸序列4长度相等并且实质上反向互补或完全反向互补；所述实质上反向互补是指两个核苷酸序列之间存在不多于1个的碱基错配；完全反向互补是指两个核苷酸序列之间没有错配。


根据权利要求31所述的siRNA缀合物，其中，所述核苷酸序列3和所述核苷酸序列4的长度均为1个核苷酸，所述核苷酸序列3的碱基为C；或者，所述核苷酸序列3和所述核苷酸序列4的长度均为2个核苷酸，按照5'末端到3'末端的方向，核苷酸序列3的碱基依次为C和C；或者，所述核苷酸序列3和所述核苷酸序列4的长度均为3个核苷酸，按照5'末端到3'末端的方向，所述核苷酸序列3的碱基依次为U、C和C；或者，所述核苷酸序列3和所述核苷酸序列4的长度均为4个核苷酸，按照5'末端到3'末端的方向，所述核苷酸序列3的碱基依次为C、U、C和C。


根据权利要求1-32中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述siRNA还含有核苷酸序列5，所述核苷酸序列5的长度为1至3个核苷酸，连接在所述反义链的3'末端，从而构成所述反义链的3'突出端。


根据权利要求33所述的siRNA缀合物，其中，所述核苷酸序列5的长度为2个核苷酸，并且按照5'末端到3'末端的方向，所述核苷酸序列5为连续的2个胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸、连续的2个尿嘧啶核糖核苷酸、或者与靶mRNA互补的两个核苷酸。


根据权利要求1-34中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述正义链含有如SEQ ID NO:60所示的核苷酸序列，所述反义链含有如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列：
5’-CAAUAAAGCUGGACAAGAZ
A-3’(SEQ ID NO:60)；

5’-Z'
BUCUUGUCCAGCUUUAUUGGG-3’(SEQ ID NO:3)；

或者，所述正义链含有如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列，所述反义链含有如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列：
5’-CCCAAUAAAGCUGGACAAGAZ
A-3’(SEQ ID NO:4)；

5’-Z'
BUCUUGUCCAGCUUUAUUGGGAG-3’(SEQ ID NO:5)；

其中，所述Z'
B是反义链5'末端的第一个核苷酸，Z
A选自A、U、G或C，并且Z'
B是与Z
A互补的核苷酸。



根据权利要求1-35中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述siRNA为siAP1或siAP2：
siAP1
正义链：5’-CAAUAAAGCUGGACAAGAA-3’(SEQ ID NO:6)；
反义链：5’-UUCUUGUCCAGCUUUAUUGGG-3’(SEQ ID NO:7)；
siAP2
正义链：5’-CCCAAUAAAGCUGGACAAGAA-3’(SEQ ID NO:8)；
反义链：5’-UUCUUGUCCAGCUUUAUUGGGAG-3’(SEQ ID NO:9)。


根据权利要求1-36中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述正义链或所述反义链中的至少一个核苷酸为修饰的核苷酸，和/或至少一个磷酸酯基为具有修饰基团的磷酸酯基。


根据权利要求1-37中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述正义链和所述反义链中的每一个核苷酸独立地为氟代修饰的核苷酸或非氟代修饰的核苷酸，氟代修饰的核苷酸指核苷酸的核糖基2'位的羟基被氟取代形成的核苷酸，非氟代修饰的核苷酸指核苷酸的核糖基2'位的羟基被非氟基团取代形成的核苷酸或核苷酸类似物。


根据权利要求38所述的siRNA缀合物，其中，所述氟代修饰的核苷酸位于核苷酸序列1和核苷酸序列2中，并且，按照5'末端到3'末端的方向，所述核苷酸序列1的第7、8、9位的核苷酸为氟代修饰的核苷酸；按照5'末端到3'末端的方向，所述核苷酸序列2的第2、6、14、16位的核苷酸为氟代修饰的核苷酸。


根据权利要求1-39中任一项所述的siRNA缀合物，其中，按照5'末端到3'末端的方向，在所述正义链中，所述核苷酸序列1的第7、8、9位或者5、7、8、9位的核苷酸为氟代修饰的核苷酸，所述正义链中其余位置的核苷酸为非氟代修饰的核苷酸；在所述反义链中，所述核苷酸序列2的第2、6、14、16位或者2、6、8、9、14、16位的核苷酸为氟代修饰的核苷酸，所述反义链中其余位置的核苷酸为非氟代修饰的核苷酸。


根据权利要求38-40中任一项所述的siRNA缀合物，其中，每一个非氟代修饰的核苷酸独立地选自核苷酸的核糖基2'位的羟基被非氟基团取代形成的核苷酸或核苷酸类似物中的一种。


根据权利要求41所述的siRNA缀合物，其中，核苷酸的核糖基2'位的羟基被非氟基团取代形成的核苷酸选自2'-烷氧基修饰的核苷酸、2'-经取代的烷氧基修饰的核苷酸、2'-烷基修饰的核苷酸、2'-经取代的烷基修饰的核苷酸、2'-氨基修饰的核苷酸、2'-经取代的氨基修饰的核苷酸、2'-脱氧核苷酸中的一种；核苷酸类似物选自异核苷酸、LNA、ENA、cET、UNA和GNA中的一种。


根据权利要求38-42中任一项所述的siRNA缀合物，其中，每一个非氟代修饰的核苷酸均为甲氧基修饰的核苷酸，所述甲氧基修饰的核苷酸指核糖基的2'-羟基被甲氧基取代而形成的核苷酸。


根据权利要求1-43中任一项所述的siRNA缀合物，其中，按照5’末端到3’末端的方向，所述siRNA的正义链中核苷酸序列1的第5、7、8和9位的核苷酸为氟代修饰的核苷酸，siRNA的正义链的其余位置的核苷酸为甲氧基修饰的核苷酸，并且，按照5’末端到3’末端的方向，所述siRNA的反义链中核苷酸序列2的第2、6、8、9、14和16位的核苷酸为-氟代修饰的核苷酸，siRNA的反义链其余位置的核苷酸为甲氧基修饰的核苷酸；
或者，按照5’末端到3’末端的方向，所述siRNA的正义链中核苷酸序列1的第7、8和9位的核苷酸为氟代修饰的核苷酸，siRNA的正义链的其余位置的核苷酸为甲氧基修饰的核苷酸，并且，按照5’末端到3’末端的方向，所述siRNA的反义链中核苷酸序列2的第2、6、14和16位的核苷酸为氟代修饰的核苷酸，siRNA的反义链其余位置的核苷酸为甲氧基修饰的核苷酸。


根据权利要求1-44中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述siRNA为siAP1-M1、siAP2-M1、siAP1-M2、siAP2-M2中的任意一种：
siAP1-M1
正义链：5’-CmAmAmUmAfAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(SEQ ID NO:10)
反义链：5’-UmUfCmUmUmGfUmCfCfAmGmCmUmUfUmAfUmUmGmGmGm-3’(SEQ ID NO:11)
siAP2-M1
正义链：5’-CmCmCmAmAmUmAfAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(SEQ ID NO:12)
反义链：5’-UmUfCmUmUmGfUmCfCfAmGmCmUmUfUmAfUmUmGmGmGmAmGm-3’(SEQ ID NO:13)
siAP1-M2
正义链：5’-CmAmAmUmAmAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(SEQ ID NO:14)
反义链：5’-UmUfCmUmUmGfUmCmCmAmGmCmUmUfUmAfUmUmGmGmGm-3’(SEQ ID NO:15)
siAP2-M2
正义链：5’-CmCmCmAmAmUmAmAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(SEQ ID NO:16)
反义链：5’-UmUfCmUmUmGfUmCmCmAmGmCmUmUfUmAfUmUmGmGmGmAmGm-3’(SEQ ID NO:17)
其中，大写字母C、G、U、A表示核苷酸的碱基组成；小写字母m表示该字母m左侧相邻的一个核苷酸为甲氧基修饰的核苷酸；小写字母f表示该字母f左侧相邻的一个核苷酸为氟代修饰的核苷酸。


根据权利要求37-45中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述具有修饰基团的磷酸酯基为具有如式(101)所示结构的硫代磷酸酯基：





根据权利要求46所述的siRNA缀合物，其中，所述siRNA中，硫代磷酸酯基连接存在于由以下位置组成的组中的至少一处：
所述正义链的5'末端端部第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；
所述正义链的5'末端端部第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；
所述正义链的3'末端端部第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；
所述正义链的3'末端端部第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；
所述反义链的5'末端端部第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；
所述反义链的5'末端端部第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；
所述反义链的3'末端端部第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；以及
所述反义链的3'末端端部第2个核苷酸和第3个核苷酸之间。


根据权利要求1-47中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述siRNA为siAP1-M1S、siAP2-M1S、siAP1-M2S、siAP2-M2S中的任意一种：
siAP1-M1S
正义链：5’-CmsAmsAmUmAfAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(SEQ ID NO:18)
反义链：5’-UmsUfsCmUmUmGfUmCfCfAmGmCmUmUfUmAfUmUmGmsGmsGm-3’(SEQ ID NO:19)
siAP2-M1S
正义链：5’-CmsCmsCmAmAmUmAfAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(SEQ ID NO:20)
反义链：5’-UmsUfsCmUmUmGfUmCfCfAmGmCmUmUfUmAfUmUmGmGmGmsAmsGm-3’(SEQ ID NO:21)
siAP1-M2S
正义链：5’-CmsAmsAmUmAmAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(SEQ ID NO:22)
反义链：5’-UmsUfsCmUmUmGfUmCmCmAmGmCmUmUfUmAfUmUmGmsGmsGm-3’(SEQ ID NO:23)
siAP2-M2S
正义链：5’-CmsCmsCmAmAmUmAmAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(SEQ ID NO:24)
反义链：5’-UmsUfsCmUmUmGfUmCmCmAmGmCmUmUfUmAfUmUmGmGmGmsAmsGm-3’(SEQ ID NO:25)
其中，大写字母C、G、U、A表示核苷酸的碱基组成；小写字母m表示该字母m左侧相邻的一个核苷酸为甲氧基修饰的核苷酸；小写字母f表示该字母f左侧相邻的一个核苷酸为氟代修饰的核苷酸；小写字母s表示与该字母s左右相邻的两个核苷酸之间的连接为硫代磷酸酯基连接。


根据权利要求1-48中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述反义链的5'末端核苷酸为5'-磷酸核苷酸或5'-磷酸类似物修饰的核苷酸。


根据权利要求1-49中任一项所述的siRNA缀合物，其中，所述siRNA为siAP1-M1P1、siAP2-M1P1、siAP1-M2P1、siAP2-M2P1、siAP1-M1SP1、siAP2-M1SP1、siAP1-M2SP1、siAP2-M2SP1中的任意一种：
siAP1-M1P1
正义链：5’-CmAmAmUmAfAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(SEQ ID NO:10)
反义链：5’-P1-UmUfCmUmUmGfUmCfCfAmGmCmUmUfUmAfUmUmGmGmGm-3’(SEQ ID NO:26)siAP2-M1P1
正义链：5’-CmCmCmAmAmUmAfAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(SEQ ID NO:12)
反义链：5’-P1-UmUfCmUmUmGfUmCfCfAmGmCmUmUfUmAfUmUmGmGmGmAmGm-3’(SEQ ID NO:27)
siAP1-M2P1
正义链：5’-CmAmAmUmAmAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(SEQ ID NO:14)
反义链：5’-P1-UmUfCmUmUmGfUmCmCmAmGmCmUmUfUmAfUmUmGmGmGm-3’(SEQ ID NO:28)
siAP2-M2P1
正义链：5’-CmCmCmAmAmUmAmAmAfGfCfUmGmGmAmCmAmAmGmAmAm-3’(S...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鸿雁，高山，康代武，
申请(专利权)人：苏州瑞博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32