治疗眼部疾病的反义寡核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及医学和免疫学领域。具体而言，本发明专利技术涉及可用于治疗、预防和/或延缓II型乌谢尔综合征和/或USH2A相关的非综合征性视网膜变性的新型反义寡核苷酸(AON)。

Antisense oligonucleotides for ocular diseases

The present invention relates to the field of medicine and immunology. Specifically, the present invention relates to novel antisense oligonucleotides (AONs) that can be used to treat, prevent and/or delay type II Usher syndrome and/or USH2A-related non-syndromic retinal degeneration.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗眼部疾病的反义寡核苷酸专利
本专利技术涉及医学和免疫学领域。具体而言，本专利技术涉及用于治疗、预防和/或延缓眼部疾病、优选II型乌谢尔综合征(Ushersyndrome)和/或USH2A相关的视网膜变性的单链反义寡核苷酸(AON)。
技术介绍
乌谢尔综合征(USH或仅称“乌谢尔病”)和非综合征性视网膜色素变性(NSRP)是视网膜变性疾病。乌谢尔病在临床上和遗传学上有很多种类，迄今是人中最常见的遗传性盲聋的类型(6,000人中有1人；Kimberling等人.2010.FrequencyofUshersyndromeintwopediatricpopulations：implicationsforgeneticscreeningofdeafandhardofhearingchildren(乌谢尔综合征在两种儿童群体中的频率：耳聋和弱听儿童遗传筛查的意义).GenetMed12：512-516))。乌谢尔病患者的听觉障碍大多是稳定的、先天性的，可以通过助听器或人工耳蜗得到部分补偿。NSRP比乌谢尔病更加普遍，每4,000人中发生1例(Hartong等人.2006.Retinitispigmentosa(视网膜色素变性).Lancet368(9549)：1795-1809)。乌谢尔病和NSRP中感光细胞的退化是进行性的，常常在30-40岁之间导致完全失明，因此留有治疗干预的时间。USH2A基因的突变是乌谢尔病最普遍的原因，其解释了多达50％的全球所有乌谢尔病患者(荷兰±1300名患者)，如McGee等人所指出(2010.NovelmutationsinthelongisoformoftheUSH2AgeneinpatientswithUshersyndrometypeIIornon-syndromicretinitispigmentosa(II型乌谢尔综合征或非综合征性视网膜色素变性患者中USH2A基因的长同种型中的新型突变).JMedGenet47(7)：499-506)，也是美国最普遍的NSRP的原因，类似地解释了12-25％的全部视网膜色素变性病例(荷兰±600名患者)。突变遍及72个USH2A外显子及其侧翼的内含子(intronic)序列分布，由无义和错义突变、缺失、重复、大的重排和剪接变体组成。外显子13是迄今最频繁突变的外显子，其包括2个基础突变(USH2患者中的c.2299delG(p.E767SfsX21)和NSRP患者中的c.2276G＞T(p.C759F))。对于外显子50，已报道了15个致病性突变，其中至少8明显是蛋白质截短的。最近，报道了USH2A的内含子40中的首个深部内含子突变(c.7595-2144A＞G)(Vache等人.2012.Ushersyndrometype2causedbyactivationofanUSH2Apseudoexon：implicationsfordiagnosisandtherapy(USH2A伪外显子的激活导致的2型乌谢尔综合征：诊断和治疗意义).HumanMutation33(1)：104-108)。该突变在内含子40中产生隐蔽的高质量剪接供体位点，导致在突变USH2AmRNA中包括152bp的异常外显子(伪外显子40或PE40)，并造成翻译的提前终止。外显子13中发现的c.2299delG突变导致造成提前终止密码子的移码，并推测其导致无义介导的衰变。Lenassi等人(2014.Theeffectofthecommonc.2299delGmutationinUSH2AonRNAsplicing(USH2A中常见的突变对RNA剪接的影响).ExpEyeRes122：9-12)表明，在乌谢尔病患者中，突变导致剪接过程中外显子12+外显子13的双跳读，而在一些患者中，发现外显子13单一跳读和外显子12/外显子13双跳读的组合。外显子序列的改变造成异常剪接并不常见。生物信息学工具已经预测c.2299delG变化会破坏外显子剪接增强子，并在外显子13内产生外显子剪接沉默基因。序列分析表明，仅使异常外显子13跳读，携带突变，导致移码突变的去除，但也导致外显子12和外显子14之间的框内连接。当外显子11与外显子14连接时，外显子12和外显子13的双跳读导致框外缺失。因此，尽管(在携带c.2299delG突变时)要求使外显子13跳读，优选外显子12得以保留。很久以来乌谢尔病和其他视网膜营养性萎缩症被认为是无法治愈的疾病。若干使用基因增强疗法的I/II期临床试验在RPE65(Bainbridge等人.2008.EffectofgenetherapyonvisualfunctioninLeber′scongenitalamaurosis(基因疗法对莱伯氏先天性黑蒙症中视功能的影响).NEnglJMed358，2231-2239)和MYO7A(Hashimoto等人.2007.LentiviralgenereplacementtherapyofretinasinamousemodelforUshersyndrometype1B(1B型乌谢尔综合征小鼠模型中视网膜的慢病毒基因替代疗法).GeneTher14(7)：584-594)基因中具有突变的LCA/RP/USH患者的选择组中已经取得富有前景的结果。不幸的是，由于目前许多可用载体(例如，腺相关病毒(AAV)和慢病毒载体)的货物大小有限，基因增强疗法受限于USH2A基因和mRNA的编码序列的大小(15,606bp)以及可变剪接。尽管基于反义寡核苷酸(AON)的疗法具有广阔的临床前景，其并不常用于脊椎动物眼部。AON通常是能够干扰剪接的小多核苷酸分子(16-至25-聚体)，因为其序列与目标前mRNA分子互补。预期的机制是，当AON和与其互补的目标序列结合时，前mRNA内的目标区不再可用于剪接因子，这反过来导致目标外显子的跳读。在治疗上，该方法学可以以两种方式应用：a)再引导突变激活隐蔽剪接位点的基因的正常剪接；和b)以mRNA的读框保持完整并产生(部分)功能蛋白质的方式使携带突变的外显子跳读。两种方法均已成功应用于具有严重遗传病的患者(Scaffidi和Misteli.2005.ReversalofthecellularphenotypeintheprematureagingdiseaseHutchinson-Gilfordprogeriasyndrome(过早衰老的疾病Hutchinson-Gilford早衰综合征中细胞表型的逆转).Nat.Med11(4)：440-445；Cirak等人.2011.RestorationoftheDystrophin-associatedGlycoproteinComplexafterExonSkippingTherapyinDuchenneMuscularDystrophy(杜氏肌营养不良症中外显子跳读疗法之后肌营养不良相关的糖蛋白复合物的恢复).MolTher20：462-467；Cirak等人.2011.ExonskippinganddystrophinrestorationinpatientswithDuchennemusculardystrophyaftersy本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于使人USH2A前mRNA中的外显子13跳读的反义寡核苷酸(AON)，其中所述AON在生理条件下与序列SEQ ID NO：12、13或14或其一部分结合和/或互补。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.23 GB 1616202.61.一种用于使人USH2A前mRNA中的外显子13跳读的反义寡核苷酸(AON)，其中所述AON在生理条件下与序列SEQIDNO：12、13或14或其一部分结合和/或互补。2.一种用于使人USH2A前mRNA中的外显子13跳读的AON，其中所述AON包括序列SEQIDNO：5、6或7或者由其组成。3.根据权利要求1或2所述的AON，其中所述AON是寡核糖核苷酸。4.根据权利要求1-3中任一项所述的AON，其中所述AON包括2′-O烷基修饰，例如2′-O-甲基修饰的糖。5.根据权利要求4所述的AON，其中所述AON中的所有核苷酸均为2′-O-甲基修饰的。6.根据权利要求1-3中任一项所述的AON，其中所述AON包括2′-O-甲氧基乙基修饰。7.根据权利要求6所述的AON，其中所述AON的所有核苷酸均携带2′-O-甲氧基乙基修饰。8.根据权利要求4或6所述的AON，其中所述AON是包括2′-O-甲基和2′-O-甲氧基乙基修饰的寡核糖核苷酸。9.根据权利要求1-8中任一项所述的AON，其中所述AON具有至少一个硫代磷酸酯键。10.根据权利要求9所述的AON，其中所有的顺次核苷酸均通过硫代磷酸酯键互连。11.一种药物组合物，其包括根据权利要求1-10中任一项所述的AON和药学可接受的载体。12.根据权利要求11所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于玻璃体内给药，并且以0.05mg-5mg总AON/眼的剂量范围给药。13.根据权利要求11或12所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于玻璃体内给药，并且以0.1-1mg总AON/眼的剂量...

【专利技术属性】
技术研发人员：H·C·范迪鹏，J·J·图鲁宁，H·L·陈，
申请(专利权)人：ProQR治疗上市公司Ⅱ，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL