本发明专利技术涉及包含重复三核苷酸单元的反义寡核苷酸(AON)，其用于治疗或预防遗传性眼病、优选由RNA毒性引起的眼营养不良症比如Fuchs角膜内皮营养不良(FECD)。本发明专利技术的寡核苷酸用于靶向内含子序列中存在的三核苷酸重复(TNR)序列扩增，以防止与这种TNR扩增相互作用的细胞蛋白质的疾病相关螯合。
Use of single chain antisense oligonucleotides in the prevention or treatment of genetic diseases involving trinucleotide repeat amplification
The present invention relates to antisense oligodeoxynucleotides (AON) containing repeated trinucleotide units, which are used to treat or prevent hereditary ophthalmopathy and to optimize eye dystrophy caused by RNA toxicity, such as Fuchs corneal endothelial dystrophy (FECD). The oligonucleotide of the present invention is used to amplify the trinucleotide repeat (TNR) sequence existing in the target intron sequence to prevent the disease related chelation of the cell proteins interacting with this TNR amplification.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】单链反义寡核苷酸在预防或治疗涉及三核苷酸重复扩增的遗传疾病中的用途
本专利技术涉及医学领域，特别地涉及预防和治疗遗传疾病的领域。更特别地，本专利技术涉及预防和/或治疗与三核苷酸重复扩增相关的遗传疾病，比如角膜内皮疾病。
技术介绍
角膜内皮是角膜内表面上的非再生性细胞单层，将角膜基质与前房液分开(见图1)。角膜内皮通过如下持续的过程来负责保持角膜透明，该持续的过程防止角膜因阳离子和水分子流入胶原性角膜基质而过量水合，通常称为“去肿胀(deturgescence)”。Fuchs角膜内皮营养不良(FECD)是一种常见的与角膜滴状物的存在有关的遗传性角膜内皮变性疾病，角膜滴状物是角膜内皮层下方的微观胶原积聚。40岁以后，高达5％的美国成年人表现出角膜滴状物。滴状物的存在是FECD的指征，但通常表现为完全无症状的轻微疾病。晚期(严重)疾病发展于小部分患有滴状物的患者。晚期FECD的特征在于大量的滴状物、内皮细胞损失、角膜水肿、角膜混浊以及由于角膜水肿和混浊导致的视力丧失。角膜水肿、混浊和随后的视力丧失是内皮细胞变性和损失去肿胀的直接后果。由于FECD引起的视力丧失是需要全厚度角膜移植(穿透性角膜移植术)的最常见指征，仅在美国每年占超过14,000次手术。对于FECD没有其它治疗可用。尽管角膜移植是一种在很大程度上很成功的治疗，但它也有缺点，它具有侵入性，并且与大约30％的排斥率相关，这与其它实体器官同种异体移植没有什么不同。也可以进行一种仅替换角膜内皮的替代方法(内皮角膜移植术)，但只能由经验丰富的外科医生进行。两种干预均受限于供体材料(源自供体角膜的可移植角膜片或角膜衍生内皮细胞)的缺乏。FECD对于其他手术比如白内障手术也是一种风险，并且对于屈光手术比如激光辅助原位角膜磨镶术(LAISK)是禁忌，因为这些技术导致额外的角膜内皮细胞损失。FECD分为早发型FECD和年龄相关型FECD，这可能是不同的疾病，因为在早发型FECD中通常不存在滴状物。早发型FECD很少见，并且与Col82A2等基因有关，该基因编码作为内皮基底膜组分的胶原蛋白VIII的α2-亚基。在年龄相关型FECD中，已经在不同的基因比如KCNJ13(钾通道)、SLC4A11(硼酸钠共转运子)和ZEB1(锌指E-盒同源结构域蛋白1)中发现了某些罕见的常染色体显性突变。然而，重要的是，根据全基因组关联研究(BaratzKH等人，E2-2proteinandFuch’scornealdystrophy.NEnglJMed2010363：1016-1024)，大多数常染色体显性年龄相关型FECD的遗传基础归因于转录因子-4(TCF4)基因。在这些研究中，在TCF4基因的内含子中识别出单核苷酸多态性(SNP)：染色体18q21.2上的rs613872，其特异性地在年龄相关型FECD患者中分离出。FECD发展风险的增加计算为纯合子受试者中增加30倍，并且rs613872标志物能够以76％的准确度区分病例和对照。在先前观察到FECD与位于18q21.2-18q21.32的染色体区域相关联(SundinOH等人，AcommonlocusforlateonsetFuchscornealdystrophymapsto18q21.2-q21.32.InvestOphthalmolVisSci200647：3919-3926)之后，TCF4基因座的至少两个区域与FECD的发展相关。其他几项研究表明，TCF4三核苷酸重复(TNR)的存在比rs613872标志物更能预测FECD(WiebenED等人，Acommontrinucleotiderepeatexpansionwithinthetranscription4(TCF4，E2-2)genepredictsFuchscornealdystrophy.PLoSOne20127：e49083；WiebenED等人，ComprehensiveassessmentofgeneticvariantswithinTCF4inFuchs’endothelialcornealdystrophy.InvestOphtalmolVisSci201455：6101-6107；MoothaVV等人，AssociationandfamilialsegregationofCTG18.1trinucleotideexpansionofTCF4geneinFuchs’endothelialcornealdystrophy.InvestOphtalmolVisSci201455：32-42；StamlerJF等人，ConfirmationoftheassociationbetweentheTCF4riskalleleandFuchsendothelialcornealdystrophyinpatientsfromtheMidwesternUnitedStates.OphthalmicGenet.201334(1-2)：32-4；KuotA等人，AssociationofTCF4andCLUpolymorphismswithFuchs’endothelialdystrophyandimplicationofCLUandTGFBIproteinsinthediseaseprocess.EurJHumGenet.201220(6)：632-8；ThalamuthuA等人，AssociationofTCF4genepolymorphismswithFuchs’cornealdystrophyintheChinese.InvestOphthalmolVisSci.201152(8)：5573-8；XingC等人，TransethnicreplicationofassociationofCTG18.1repeatexpansionofTCF4genewithFuchs’cornealdystrophyinChineseimpliescommoncausalvariant.InvestOphthalmolVisSci.201455(11)：7073-8；NandaGG等人，GeneticassociationofTCF4intronicpolymorphisms，CTG18.1andrs17089887，withFuchs’endothelialcornealdystrophyinanIndianpopulation.InvestOphthalmolVisSci.201455(11)7674-80)。不稳定的重复发现于各种基因区域，比如导致亨廷顿舞蹈病(HD)的基因的编码区，由此通过改变蛋白质功能和/或蛋白质折叠产生疾病的表型。不稳定的重复单元也发现于非编码区，比如引起1型肌强直性营养不良(DM1)的DMPK基因的3’-UTR、引起脆性X综合征的FMR1基因的5’-UTR，以及发现于内含子序列，比如引起2型肌强直性营养不良(DM2)的ZNF9基因的第一内含子。DM1是成人中最常见的肌营养不良症，并且主要是骨骼肌、心脏和大脑的遗传性、进行性、退行性、多系统性疾病。DM1由不稳定三核苷酸(CTG)n重复的扩增(如上所述，在DMPK基因的3’-UTR中)引起。DM本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于预防和/或治疗遗传疾病的单链反义寡核苷酸，其中所述寡核苷酸与靶RNA分子至少部分互补，并且其中所述寡核苷酸能够结合所述靶RNA分子内的内含子序列中存在的三核苷酸重复(TNR)扩增。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.05 GB 1517565.6;2016.03.11 GB 1604253.31.一种用于预防和/或治疗遗传疾病的单链反义寡核苷酸，其中所述寡核苷酸与靶RNA分子至少部分互补，并且其中所述寡核苷酸能够结合所述靶RNA分子内的内含子序列中存在的三核苷酸重复(TNR)扩增。2.根据权利要求1所述用途的寡核苷酸，其中所述TNR扩增包含序列5’-(CUG)n-3’，其中n是40或更大的整数。3.根据权利要求2所述用途的寡核苷酸，其中n是50或更大的整数。4.根据权利要求1至3中任一项所述用途的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的全部核苷酸是2’-O甲基硫代磷酸酯核糖核苷酸。5.根据权利要求1至4中任一项所述用途的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含序列5’-(CAG)m-3’、5’-(CAI)m-3’、5’-(CGG)m-3’、5’-(CGI)m-3’、5’-(CIG)m-3’、5’-(CII)m-3’、5’-(UAG)m-3’、5’-(UAI)m-3’、5’-(UGG)m-3’、5’-(UGI)m-3’、5’-(UIG)m-3’和/或5’-(UII)m-3’，其中m是2至66范围内的整数。6.根据权利要求5所述用途的寡核苷酸，其中m是整数2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17。7.根据权利要求1至6中任一项所述用途的寡核苷...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·亚当森，J·J·图鲁宁，G·J·普拉滕伯格，
申请(专利权)人：ProQR治疗上市公司Ⅱ，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL
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