用于通过选择性减少免疫调节M2单核细胞治疗癌症及增强治疗性免疫力的方法和组合物技术

本公开提供了包含能够靶向M2细胞中的IGF‑1R表达的核酸的药物组合物。本公开还提供了用于通过靶向这些细胞中IGF‑1R的表达而选择性降低M2细胞的方法。本公开进一步提供了用于通过靶向患者的M2细胞中IGF‑1R的表达而治疗癌症并增强治疗的方法。当对其需要的受试者全身给予时，本发明专利技术的药物组合物是有效的。药物组合物的给予方便性有利于治疗并增强患者依从性。

Methods and compositions for treating cancer and enhancing therapeutic immunity by selectively reducing immune regulation of M2 monocytes

The present disclosure provides a pharmaceutical composition containing nucleic acids that can be expressed in IGF cells expressed in M2 cells. The present disclosure also provides a method for selectively reducing M2 cells by targeting the expression of IGF 1R in these cells. This disclosure further provides a method for treating cancer and enhancing treatment for the expression of IGF 1R in M2 cells targeted to patients. The pharmaceutical composition of the invention is effective when it is given to the subjects in need. The convenience of drug composition is conducive to treatment and enhance patient compliance.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于通过选择性减少免疫调节M2单核细胞治疗癌症及增强治疗性免疫力的方法和组合物
本公开涉及通过用针对胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)的反义核酸靶向这些细胞以选择性降低M2细胞而治疗癌症并增强治疗性免疫力的方法和组合物。相关申请的引证本申请为了所有目的以其全部内容并入2015年4月10日提交的美国临时申请序列号62/145,758。电子提交的文本文件的描述此处电子提交的文本文件的内容通过引证以它们的全部内容结合于本文中：序列表的计算机可读格式副本(文件名：IMVX_002_01US_SeqList_ST25.txt，记录日期：2016年4月11日，文件大小12千字节)。
技术介绍
单核细胞是源自骨髓中的骨髓祖细胞的一种白细胞。它们由此进入外周血流中，并随后迁移到组织中。在组织中，在暴露于局部生长因子、促炎性细胞因子和微生物化合物之后，单核细胞分化成巨噬细胞和树突状细胞。源自单核细胞前体的巨噬细胞会经历特异性分化成经典型极化的(M1)巨噬细胞和非经典型活化的(M2)巨噬细胞。通常，巨噬细胞在免疫系统中起三个主要作用。这些作用是吞噬作用、抗原呈递和细胞因子呈递。此外，某些类型的癌症(如例如，乳腺癌、星形细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、II型乳头状肾细胞癌、肺癌、胰腺癌、胆囊癌、直肠癌、神经胶质瘤，经典型霍奇金淋巴瘤、卵巢癌和结肠直肠癌)在肿瘤内表现出升高的M2样巨噬细胞水平和外周中循环的类似M2单核细胞。尽管癌症疗法进展，但是这些癌症的预后仍然较差，并且使用常规治疗如例如化学疗法、外部束放射和短程放射疗法治疗这些癌症的尝试已经导致无进展生存期和总生存期的仅微小的改善。因此，本领域内仍需要获得用于这种癌症的新且改进的疗法。
技术实现思路
在一些方面中，本公开提供了包含有效量的胰岛素样生长因子1受体反义寡脱氧核苷酸(IGF-1RASODN)的药物组合物，其中将药物组合物给予在他们的循环、肿瘤微环境中具有M2细胞，或具有使未分化的单核细胞向M2细胞极化的血清的受试者，降低受试者中M2细胞的数量。在其它方面中，本公开提供了用于选择性消除受试者中M2细胞的方法，包括向受试者全身给予有效量的药物组合物。在其他实施方式中，本公开提供了通过降低M2细胞的数量而治疗癌症的方法，包括向患有癌症的受试者全身给予有效量的药物组合物。在其他实施方式中，本公开提供了用于增强受试者的免疫响应的方法，包括向受试者全身给予有效量的药物组合物。附图说明图1描绘了患有神经胶质瘤的患者外周中CD163+细胞的表达。该单核细胞的子集由肿瘤的存在引发，并且这个亚群由于其血管生成和免疫抑制性质而支持肿瘤生长和侵袭。神经胶质瘤等级与携带M2单核细胞标记的细胞的积累和活性相关。肿瘤中这种M2样CD163+巨噬细胞的群体和循环外周中的相似M2单核细胞的存在也破坏了任何促炎性抗肿瘤疫苗策略。a.描绘了反映WHOIII级星形细胞瘤中CD14+细胞增加的流式细胞术。b.根据WHO等级比较CD163+细胞的水平的图示。与正常受试者或WHOII级星形细胞瘤相比，III级和IV级肿瘤显示出显著不同的PMBC中的单核细胞％。图2描绘了根据细胞类型(图2a)和免疫型(图2b)的针对胰岛素样生长因子1受体(IFG-1RASODN)的标记的反义核酸的吸收。源自肿瘤的巨噬细胞(CD14+)和胶质瘤患者中匹配的血液样品急性吸收针对胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1RASODN)的反义。图3描绘了具有胰岛素样生长因子1受体(IFG-1R)表达的细胞的流式细胞术。极化成M2细胞的正常外周单核细胞体，与诱导为M1极化的巨噬细胞相比过表达IGF-1R。此外，IGF-1RASODN以剂量依赖性的方式选择性地诱导M2亚群体中的细胞死亡。图3a详细描绘了IGF-1RASODN选择性靶向M2巨噬细胞的去除，使得在这些细胞占优势的情况下，可以消除它们的肿瘤促进作用并且可以拯救治疗性Th1免疫力。空心圆表示分化的、未刺激的细胞，实心圆表示分化和刺激的细胞。图3b描绘了根据巨噬细胞极化的用IGF-1RASODN处理后单核细胞亚群分布的差异。图4描绘了在整个治疗过程中患者中肿瘤相关的CD163+细胞的定量。通过Aperio量化法测定5400x场的平均值和SD。提供了四个时间点，第一次手术、第一次复发、第二次复发和尸体解剖以及y轴上的AperioCD163+细胞。图4显示了本文公开的方法对于标准治疗失败的患者在降低CD163+细胞方面是有效的。图5显示了6个连续的多形性成胶质细胞瘤样本中IGF-1R的免疫组织化学。所有肿瘤均证实IGF-1R免疫反应性，表明在肿瘤微环境中存在一种或多种表达IGF-1R的细胞，并识别IGF-1R作为癌症治疗的靶标。图6描绘了IGF-1RASODN的两个不同序列批次的质谱。a-c：DWA序列的Avecia批量生产；d-f：NOBEL序列的Girindus批量生产；a，d：冻干粉末形式的ASODN的稳定性；b，e：无菌盐水中的制剂；c，f：无菌盐水中的制剂。IMV118批次号GAI-08-060-S3-B1的稳定性结果表明，最小的降解产物为～300Da，而因此测量的光谱质量满足5709±300Da的要求，以及由批量发布至今的可接受的储存稳定性。Avecia序列(DWA)显示出超过九年期间的稳定性。图7显示，在CNS中植入GL261后，在全身(腹腔内)接受一剂量的NOBEL(SEQIDNO:1)之后至少14天，在动物中循环CD68+CD163+细胞减少。NOBEL是由起始甲硫氨酸密码子下游六个核苷酸开始的18-聚体的硫代磷酸寡脱氧核苷酸IGF1-R反义寡脱氧核苷酸(ASODN)。NOBEL是使用完善的方法在装备有封闭的化学柱反应器的合成仪中使用流通技术通过固相有机合成法制造的。固体载体上的每个合成循环序列由多个步骤组成，其按序进行直到建立全长寡核苷酸。然后将NOBEL冻干，用包装于具有螺旋盖HDPE容器中，并随后真空热密封于5mL的Mylar袋内，储存于-80℃下。使用前，将冻干粉末溶于盐水中直到得到100mg/mL的溶液。将获得的溶液通过0.22μm膜过滤器无菌过滤。将1mL等分装入USP1型玻璃小瓶中，并用合适的橡胶塞和铝盖密封之后储存于-80℃下。对于该实验，将白细胞用生物素化的抗小鼠CD163(Biorbyt)染色，洗涤并加入二级链霉亲和素-APC。两次洗涤和固定后，将细胞透化并用抗小鼠CD68-PE细胞内染色，随后用perm-缓冲液和最终PBS洗涤进行两次洗涤以封闭膜。使样品经过MilliporeGuava流式细胞仪，并使用FlowJo分析。在处死后采集的样品显示出在腹腔内给予NOBEL之后WBC群体的显著变化。a.PBS腹腔内注射对照；b.NOBEL腹腔内注射。图8显示了在肿瘤发展之前单独给予NOBEL(SEQIDNO:1)在延迟GL261细胞赘生发生方面是有效的。20％和50％的C57和Tbet敲除的小鼠，与分别腹腔内接受载体(PBS)的60和100％的C57和Tbet敲除的动物相比，分别在腹腔注射NOBEL之后肿瘤发展。使用对数秩检验评价显著性(*＝p<0.05)。图9显示了胞嘧啶-硫代磷酸-鸟苷-DNA活化在B细胞和浆细胞样树突状细胞(DC)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种药物组合物，包含有效量的胰岛素样生长因子1受体反义寡脱氧核苷酸(IGF‑1R AS ODN)，其中将所述药物组合物在他们的循环中给予具有M2细胞的受试者、肿瘤微环境中的M2细胞或使未分化单核细胞向M2细胞极化的血清来降低所述受试者中M2细胞的数量。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.10 US 62/145,7581.一种药物组合物，包含有效量的胰岛素样生长因子1受体反义寡脱氧核苷酸(IGF-1RASODN)，其中将所述药物组合物在他们的循环中给予具有M2细胞的受试者、肿瘤微环境中的M2细胞或使未分化单核细胞向M2细胞极化的血清来降低所述受试者中M2细胞的数量。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，如通过FACS测量的，所述受试者中的所述M2细胞在向所述受试者给予所述药物组合物之后约24小时降低至少约40％。3.根据权利要求1-2中任一项所述的药物组合物，其中，所述药物组合物的给予不影响所述受试者中M1细胞的数量。4.根据权利要求1-3中任一项所述的药物组合物，其中，所述IGF-1RASODN包含一个或多个硫代磷酸键。5.根据权利要求1-4中任一项所述的药物组合物，其中，所述IGF-1RASODN与SEQIDNO:1-14中的任一种具有至少约75％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约98％的同一性。6.根据权利要求1-4中任一项所述的药物组合物，其中，所述ASODN由SEQIDNO:1-14中的任一种组成。7.根据权利要求1-4中任一项所述的药物组合物，其中，所述ASODN是SEQIDNO:1。8.根据权利要求6所述的药物组合物，其中将SEQIDNO:1-14中的任一种以约0.025g/kg至约0.2g/kg范围内的剂量给予所述受试者。9.根据权利要求7所述的药物组合物，其中将SEQIDNO:1以约0.025g/kg至约0.2g/kg范围内的剂量给予所述受试者。10.根据权利要求1-9中任一项所述的药物组合物，其中，所述药物组合物在所述受试者中恢复1型免疫力。11.根据权利要求1-10中任一项所述的药物组合物，其中，所述IGF-1RASODN在约37℃下不形成发夹环结构。12.根据权利要求1-11中任一项所述的药物组合物，其中，所述M2细胞是表达选自由CD11b、CD14、CD15、CD23、CD64、CD68、CD163、CD204和CD206组成的组中的一种或多种细胞表面标记的M2巨噬细胞。13.根据权利要求1-11中任一项所述的药物组合物，其中，所述M2细胞是表达选自由CD11b、CD14、CD15、CD23、CD64、CD68、CD163、CD204和CD206组成的组中的一种或多种细胞表面标记的M2单核细胞。14.根据权利要求12或13所述的药物组合物，其中，所述细胞表面标记是CD163。15.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述受试者在他们的循环中具有M2细胞。16.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述受试者在所述肿瘤微环境中包含M2细胞。17.根据权利要求1-16中任一项所述的药物组合物，其中，所述受试者患有癌症。...

【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·W·安德鲁斯，道格拉斯·C·霍普尔，
申请(专利权)人：托马斯杰弗逊大学，
类型：发明
国别省市：美国,US