抑制MEX3B基因的表达的核酸、MEX3B基因表达抑制试剂、抑制MEX3B基因表达的方法及由MEX3B基因表达所引起的疾病的预防或治疗剂技术

本发明专利技术提供作为副作用的细胞毒性低且能够抑制MEX3B基因的表达的核酸、包含上述核酸的MEX3B基因表达抑制试剂、抑制MEX3B基因表达的方法及由MEX3B基因表达所引起的疾病的预防或治疗剂。抑制MEX3B基因的表达的核酸，所述核酸为：反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸具有与MEX3B基因的外显子中的非翻译区中的包含至少10个连续核苷酸的寡核苷酸互补的序列；或者双链RNA或编码上述双链RNA的DNA，所述双链RNA包含上述非翻译区中的至少20个连续核苷酸。

Nucleic acids that inhibit the expression of MEX3B gene, inhibitors of MEX3B gene expression, methods of inhibiting the expression of MEX3B gene and preventive or therapeutic agents for diseases caused by the expression of MEX3B gene

The present invention provides nucleic acid with low cytotoxicity and can inhibit the expression of MEX3B gene as a side effect, MEX3B gene expression inhibitor containing the above nucleic acid, method for inhibiting the expression of MEX3B gene and preventive or therapeutic agent for diseases caused by MEX3B gene expression. The nucleic acid that inhibits the expression of MEX3B gene is: antisense oligonucleotide, the antisense oligonucleotide has an oligonucleotide complementary sequence containing at least 10 consecutive nucleotides in the untranslated region of the exon of MEX3B gene; or double-stranded RNA or DNA encoding the said double-stranded RNA, the double-stranded RNA contains at least 20 consecutive nucleotides in the untranslated region.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抑制MEX3B基因的表达的核酸、MEX3B基因表达抑制试剂、抑制MEX3B基因表达的方法及由MEX3B基因表达所引起的疾病的预防或治疗剂
本专利技术涉及抑制MEX3B基因的表达的核酸、包含上述核酸的MEX3B基因表达抑制试剂、抑制MEX3B基因表达的方法及由MEX3B基因表达所引起的疾病的预防或治疗剂。
技术介绍
MEX3B基因最初被鉴定为由TGF-β活化的基因，根据之后的解析已获知，MEX3B蛋白质是与各种mRNA结合并对这些mRNA的功能(即翻译为蛋白质)进行控制的分子(例如，非专利文献1)。另外，已知MEX3B蛋白质为诱导细胞凋亡的蛋白质(例如，专利文献1)。已知细胞凋亡除参与正常的生理学过程以外，还参与神经变性病等严重疾病的发病。例如，认为细胞凋亡的异常亢进是神经变性病(例如，阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症、亨廷顿舞蹈病等)的病因(例如，非专利文献2)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本专利第4429269号公报非专利文献非专利文献1：NucleicAcidsRes.2007，35(4)：1289-300。非专利文献2：Wolozin，B.等人，(1996)Science，274，1710-1713
技术实现思路
专利技术要解决的课题在上述背景下，要求开发出能够在抑制副作用的同时抑制MEX3B基因的表达的核酸医药品。本专利技术是鉴于上述情况而作出的，目的在于提供作为副作用的细胞毒性低且能够抑制MEX3B基因的表达的核酸、包含上述核酸的MEX3B基因表达抑制试剂、抑制MEX3B基因表达的方法及由MEX3B基因表达所引起的疾病的预防或治疗剂。用于解决课题的手段本申请的专利技术人发现，使用具有与MEX3B基因的外显子中的编码氨基酸的区域(CDS)中包含的寡核苷酸互补的序列的反义寡核苷酸来抑制MEX3B基因的mRNA表达时，容易出现细胞毒性。与此相对，使用具有与外显子中的不编码氨基酸的非翻译区(UTR)中包含的寡核苷酸互补的序列的反义寡核苷酸时，惊奇地发现，作为副作用的细胞毒性低，并且能够抑制MEX3B基因的mRNA表达。推测作为副作用的细胞毒性低是基于以下原因：与CDS相比，UTR与MEX3B同源物的同源性更低，不易产生脱靶效应。基于上述发现完成了本专利技术。具体而言，本专利技术如下所述。本专利技术的第1方式为抑制MEX3B基因的表达的核酸，所述核酸为：反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸具有与MEX3B基因的外显子中的非翻译区中的包含至少10个连续核苷酸的寡核苷酸互补的序列；或者双链RNA或编码上述双链RNA的DNA，所述双链RNA包含上述非翻译区中的至少20个连续核苷酸。本专利技术的第2方式为MEX3B基因表达抑制试剂，其包含第1方式涉及的核酸。本专利技术的第3方式为抑制MEX3B基因表达的方法，所述方法包括使第2方式涉及的试剂与对象(不包括人类个体)接触的步骤。本专利技术的第4方式为由MEX3B基因表达所引起的疾病的预防或治疗剂，其包含第2方式涉及的试剂。专利技术的效果可提供作为副作用的细胞毒性低且能够抑制MEX3B基因的表达的核酸、包含上述核酸的MEX3B基因表达抑制试剂、抑制MEX3B基因表达的方法及由MEX3B基因表达所引起的疾病的预防或治疗剂。附图说明[图1](a)为示出使用了不抑制MEX3B的作为阴性对照的Gapmer型核酸(TakaraBio公司制)而未遭受细胞毒性的细胞的显微镜照片的图，(b)为示出因比较例的Gapmer型核酸而遭受到细胞毒性的细胞的显微镜照片的图。[图2]为示出通过转染各Gapmer型核酸而抑制MEX3BmRNA的表达水平的图。[图3]为示出因以CDS为靶标的Gapmer型核酸而遭受到细胞毒性的细胞的显微镜照片、和未因以UTR为靶标的Gapmer型核酸而遭受细胞毒性的细胞的显微镜照片的图。具体实施方式以下，对本专利技术的实施方式详细地进行说明，但本专利技术并不受以下实施方式的任何限定，可以在本专利技术目的的范围内适当加以变更而实施。(MEX3B基因)MEX3B基因包含外显子1、内含子及外显子2，该结构在人、小鼠、其他哺乳动物中高度保守。作为外显子中的不编码氨基酸的非翻译区(UTR)，在较起始密码子更靠上游处，存在有5’UTR，在较终止密码子更靠下游处，存在有3’UTR。编码人MEX3B的mRNA的人MEX3B基因具有由后述的序列号1表示的序列。序列号1中，第437～2146位的碱基序列为CDS，第1～436位的碱基序列为5’UTR，第2147～3532位的碱基序列为3’UTR。编码小鼠MEX3B的mRNA的小鼠MEX3B基因具有由后述的序列号2表示的序列。序列号2中，第319～2049位的碱基序列为CDS，第1～318位的碱基序列为5’UTR，第2050～3416位的碱基序列为3’UTR。后述的序列号3表示人MEX3B基因的内含子区的836个碱基。序列号10表示编码剪接前的人MEX3B的前体mRNA的碱基序列。由序列号10表示的编码人MEX3B的前体mRNA的序列中的第437～692位及第1529～2982位的碱基序列为CDS，第1～436位的碱基序列为5’UTR，第2983～4368位的碱基序列为3’UTR，第693～1528位的区域相当于由序列号3表示的人MEX3B基因的内含子区。另外，编码MEX3B蛋白质(例如，具有由后述的序列号4或5表示的氨基酸序列的蛋白质)的基因均属于MEX3B基因。(MEX3B基因的获取)MEX3B基因的获取方法没有特别限定。可基于本说明书的序列表的序列号1、2、4、5及10中记载的碱基序列及氨基酸序列的信息来制备合适的探针、引物，并使用它们从人cDNA文库(按照常规方法而从表达MEX3B基因的合适细胞制备)中筛选期望的克隆，由此分离MEX3B基因。<抑制MEX3B基因的表达的核酸>第1方式涉及的抑制MEX3B基因的表达的核酸(以下，也简称为“第1方式涉及的核酸”。)为：反义寡核苷酸，其具有与MEX3B基因的外显子中的非翻译区(UTR)中的包含至少10个连续核苷酸的寡核苷酸互补的序列；或者双链RNA或编码上述双链RNA的DNA，所述双链RNA包含上述UTR中的至少20个连续核苷酸。(反义寡核苷酸)作为第1方式涉及的核酸的1个实施方式，为下述反义寡核苷酸，其具有与MEX3B基因的外显子中的UTR中的包含至少10个连续核苷酸的寡核苷酸互补的序列。例如，优选的是，MEX3B基因的外显子中的UTR所包含的寡核苷酸和与其互补的上述反义寡核苷酸在导入细胞后形成杂交体(hybrid)，由此产生杂交双链，并利用对该杂交双链具有特异性的核酸酶(例如，核糖核酸酶H)将包含核苷酸链的MEX3B的mRNA降解。作为上述反义寡核苷酸，可以为DNA，也可以为RNA，从与上述外显子中的UTR所包含的寡核苷酸形成杂交体的观点考虑，优选DNA。作为具有与上述反义寡核苷酸互补的序列的包含至少10个连续核苷酸的寡核苷酸所存在于的UTR，5’UTR及3’UTR均可，从细胞毒性低的观点考虑，优选3’UTR。作为上述反义寡核苷酸，优选为具有与MEX3B基因的碱基序列(外显子中的UTR)中的包含至少11个连续核苷酸的寡核苷酸互补的序列的反义寡核苷酸，更优选为具有与包含至少12个连续核苷酸的寡核苷酸互补的序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抑制MEX3B基因的表达的核酸，所述核酸为：反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸具有与MEX3B基因的外显子中的非翻译区中的包含至少10个连续核苷酸的寡核苷酸互补的序列；或者双链RNA或编码所述双链RNA的DNA，所述双链RNA包含所述非翻译区中的至少20个连续核苷酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.07.08 JP 2016-1364011.抑制MEX3B基因的表达的核酸，所述核酸为：反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸具有与MEX3B基因的外显子中的非翻译区中的包含至少10个连续核苷酸的寡核苷酸互补的序列；或者双链RNA或编码所述双链RNA的DNA，所述双链RNA包含所述非翻译区中的至少20个连续核苷酸。2.如权利要求1所述的核酸，其中，所述非翻译区被包含于序列号1或2表示的MEX3B基因中。3.如权利要求1或2所述的核酸，所述核酸为：下述反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸具有与序列号10的非翻译区中的第4119～4293位的序列中的包含12～20个连续核苷酸的寡核苷酸互补的序列，所述序列号10表示人MEX3B的前体mRNA；或者下述反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸具有与序列号2的非翻译区中的第3...

【专利技术属性】
技术研发人员：秋山彻，山角祐介，河府和义，
申请(专利权)人：TAK循环株式会社，国立大学法人东京大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP