靶向人LMNA的寡核苷酸类似物制造技术

提供了靶向LMNA的反义寡核苷酸，其用于降低编码早衰蛋白的一种或多种异常剪接的LMNA mRNA同种型的表达。

Oligonucleotide analogues targeting human LMNA

Antisense oligonucleotides targeting LMNA are provided to reduce the expression of one or more abnormally spliced LMNA mRNA homotypes encoding premature aging proteins.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向人LMNA的寡核苷酸类似物关于序列表的声明与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并且据此以引用方式并入到本说明书中。含有序列表的文本文件的名称是120178_503WO_SEQUENCE_LISTING.txt。所述文本文件为约6.5KB，于2017年4月26日创建，并且通过EFSweb以电子方式提交。
本公开大体上涉及靶向人核纤层蛋白A的反义化合物。
技术介绍
早年衰老综合症(Hutchinson-Gilfordprogeriasyndrome,HGPS)是一种罕见的遗传性病症，其特征是早发性动脉硬化和血管平滑肌细胞(SMC)的退化。HGPS本身最显著地表现为受影响儿童的加速、过早衰老。患有HGPS的儿童具有进行性症状，诸如生长迟缓、脱发、皮下脂肪减少和骨异常。平均寿命为12年，其中最常见的死亡原因是心肌梗塞或中风。大多数HGPS病例是由核纤层蛋白A(LMNA)基因中的单点突变引起的，从而导致产生早衰蛋白(progerin)，其是核纤层蛋白A的截短剪接突变体。单点突变是核纤层蛋白A(LMNA)基因的外显子11中的从头沉默取代(1824C>T，Gly608Gly)。所述取代激活了隐蔽的剪接供体位点，这导致产生具有内部缺失50个氨基酸的显性失活突变体核纤层蛋白A蛋白。所述突变蛋白，命名为早衰蛋白，积聚在核膜上，从而引起特征性的核突起(nuclearblebbing)((Scaffidi和Misteli2005；Cao,Blair等2011))。已知可使用二氨基磷酸酯吗啉代寡核苷酸(phosphorodiamidatemorpholinooligonucleotide,PMO)，或更具体地，剪接转换寡核苷酸(splice-switchingoligonucleotide,SSO)来校正异常剪接。SSO通过在位点处或附近杂交来阻断异常剪接位点，从而阻止由细胞剪接机构的识别。示例性SSO对核酸酶具有抗性，并且所得的双链结构消除了由RNA酶H进行RNA切割的可能性。已证明SSO在体外和体内均有效地修复地中海贫血和杜兴肌营养不良症的剪接模式。(Kinali,Arechavala-Gomeza等2009；Svasti,Suwanmanee等2009)。通过在细胞培养物(Scaffidi和Misteli2005)和相关动物模型(Osorio,Navarro等2011)中使用靶向激活的隐蔽剪接位点的修饰反义寡核苷酸校正异常剪接事件，已显示与HGPS相关的LMNA的异常剪接减少。PCT公开WO2013/086441和WO2013/086444公开了靶向人lmna的反义寡聚物和使用靶向人lmna的寡核苷酸类似物治疗早衰样核纤层蛋白病的方法，但没有公开本公开的反义寡聚物化合物和其使用方法。鉴于LMNA在HGPS中的作用，需要调节LMNA前mRNA的剪接以消除早衰蛋白表达的寡核苷酸。
技术实现思路
本公开的实施方案整体涉及反义寡聚物药物组合物和使用其调节LMNA前mRNA的异常剪接的方法。在一个方面，本公开的特征在于一种具有10至40个核碱基的修饰的反义寡核苷酸。修饰的反义寡核苷酸包括与LMNA的前mRNA内的靶区域互补的靶向序列。在某些实施方案中，反义寡聚物是式(I)的化合物：或其药学上可接受的盐，其中每个Nu是核碱基，它们一起形成靶向序列；Z是8至38的整数；T选自：并且G是选自-C(O)(CH2)5NH-CPP-Ra、-C(O)(CH2)2NH-CPP-Ra、-C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP-Ra、-C(O)CH2NH-CPP-Ra和以下结构的细胞穿透肽(“CPP”)和接头部分：其中CPP通过CPP羧基末端处的酰胺键连接到接头部分，并且Ra通过酰胺键连接到CPP氨基末端，其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。在各个方面，本公开的反义寡核苷酸包括式(II)的化合物：或其药学上可接受的盐，其中：其中每个Nu是核碱基，它们一起形成靶向序列；Z是8至38的整数；并且G是选自-C(O)(CH2)5NH-CPP-Ra、-C(O)(CH2)2NH-CPP-Ra、C(O)(CH2)2NHC(O)(CH2)5NH-CPP-Ra、-C(O)CH2NH-CPP-Ra和以下结构的细胞穿透肽(“CPP”)和接头部分：其中CPP通过CPP羧基末端处的酰胺键连接到接头部分，并且Ra通过酰胺键连接到CPP氨基末端，其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。在一些实施方案中，CPP选自SEQIDNO:5-21。在一些实施方案中，G选自SEQIDNO:22-25。在各种实施方案中，G(如式(I)和(II)中所述)选自：C(O)CH2NH-CPP和下式：其中CPP通过CPP羧基末端处的酰胺键连接到接头部分，并且Ra通过酰胺键连接到CPP氨基末端，并且其中CPP-Ra选自：(-R6-Ra)，其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。在一些实施方案中，G(如式(I)和(II)中所述)具有下式：其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基，并且J是4至9的整数。在某些实施方案中，J是6。在各种实施方案中，CPP-Ra(如式(I)和(II)中所述)具有下式：其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基，并且J是4至9的整数。在某些实施方案中，CPP是SEQIDNO:11。在各种实施方案中，J是6。在一些实施方案中，Ra选自H和乙酰基。例如，在一些实施方案中，Ra是H。在某些实施方案中，Ra是乙酰基。在一些实施方案中，G选自SEQIDNO:22-25。在某些实施方案中，G是SEQIDNO:25。在某些实施方案中，G是在寡聚物的3’端处共价键合到本公开的反义寡聚物的-C(O)CH2NH-R6-Ra，其中Ra是H、乙酰基、苯甲酰基或硬脂酰基以封端R6的氨基末端。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。在这些非限制性实例中，CPP-Ra是–R6-Ra并且接头是-C(O)CH2NH-，(即甘氨酸)。G＝-C(O)CH2NH-R6-Ra的这个具体实例还由以下结构例示：其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。在各种实施方案中，CPP-Ra是-R6-Ra，还例示为下式：其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基。在某些实施方案中，CPP是SEQIDNO:11。在一些实施方案中，Ra是乙酰基。在一些实施方案中，CPP-Ra是–(RXR)4-Ra，还例示为下式：在各种实施方案中，CPP-Ra是–R-(FFR)3-Ra，还例示为下式：在一些实施方案中，本公开的反义寡聚物(包括例如，式(I)和(II)的反义寡聚物的一些实施方案)的靶向序列，选自：a)SEQIDNO:3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)其中Z是23；和b)SEQIDNO:4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)其中Z是23。在本公开的另一方面，提供了治疗疾病(诸如与人LMNA相关的疾病或病状)的方法。在某些实施方案中，所述方法用于治疗早衰样疾病或相关病状，诸如早衰样核纤层蛋白病(诸如HGPS)、年龄相关病状本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种式(I)的反义寡聚物化合物：

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.29 US 62/3300271.一种式(I)的反义寡聚物化合物：或其药学上可接受的盐，其中每个Nu是核碱基，它们一起形成靶向序列；T选自：并且G是选自以下的细胞穿透肽(“CPP”)和接头部分：C(O)CH2NH-CPP-Ra和其中所述CPP通过CPP羧基末端处的酰胺键连接到所述接头部分，Ra通过酰胺键连接到CPP氨基末端，其中Ra选自H、乙酰基、苯甲酰基和硬脂酰基，并且所述CPP选自SEQIDNO:5–21，并且其中所述靶向序列选自：a)SEQIDNO:3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)其中Z是23；和b)SEQIDNO:4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)其中Z是23。2.如权利要求1所述的反义寡聚物化合物，其中G选自SEQIDNO:24或25。3.如权利要求1或2所述的反义寡聚物化合物，其中T是4.根据权利要求1-3中任一项所述的反义寡聚物化合物，其中CPP-Ra选自：5.根据权利要求1-3中任一项所述的反义寡聚物化合物，其中所述CPP-Ra是6.根据权利要求1-5中任一项所述的反义寡聚物化合物，其中Ra是乙酰基。7.根据权利要求1-6中任一项所述的反义寡聚物化合物，其中所述靶向序列是SEQIDNO:3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)并且Z是23。8.根据权利要求1-6中任一项所述的反义寡聚物化合物，其中所述靶向序列是SEQIDNO:4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)并且Z是23。9.一种式(III)的反义寡聚物化合物：或其药学上可接受的盐，其中：每个Nu是核碱基，它们一起形成选自以下的靶向序列(5’至3’)：a)SEQIDNO:3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)其中Z是...

【专利技术属性】
技术研发人员：MR埃尔多斯，FS科林斯，K曹，R科尔，RK贝斯特维克，LB戈登，
申请(专利权)人：萨勒普塔医疗公司，美国政府卫生与公众服务部，马里兰州大学，儿童早衰症研究基金会，
类型：发明
国别省市：美国,US