微小RNA及其使用方法技术

本文中公开了治疗对象的肿瘤的方法，包括向对象施用一种或多种在肿瘤中表达改变的miRNA核酸或其变体(如模拟物或拟似物)。本文中还公开了包括一种或多种miRNA核酸的组合物。在一些实例中，miRNA核酸是例如修饰的miRNA，及包括一个或多个修饰的核苷酸和/或5′端和/或3′端修饰的miRNA核酸。在具体实例中，修饰的miRNA核酸是miR‑30a核酸。本文中还公开了将对象诊断为患有具有一种或多种miRNA核酸表达改变的肿瘤的方法。在一些实施方案中，所述方法包括检测来自对象的样品中一种或多种miRNA的表达并将来自对象的样品中的表达与对照相比较。

MicroRNA and its application

Methods for treating tumors of a target are disclosed in this article, including the application of one or more microRNAs or their variants (such as analogues or analogues) expressing changes in tumors to the target. Compositions comprising one or more microRNA nucleic acids are also disclosed herein. In some instances, a microRNA nucleic acid is, for example, a modified microRNA, and a microRNA nucleic acid comprising one or more modified nucleotides and/or 5'and/or 3' modified. In a specific example, the modified microRNA nucleic acid is the microRNA 30A nucleic acid. Methods for diagnosing tumors with one or more changes in the expression of microRNA nucleic acids are also disclosed. In some implementations, the method includes detecting the expression of one or more microRNAs in a sample from an object and comparing the expression of a sample from an object with that of a control.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】微小RNA及其使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2016年3月7日提交的美国临时申请第62/304,844号的权益，所述临时申请以引证的方式纳入本文中。
本公开内容涉及癌症的治疗和/或诊断，特别是利用微小RNA的方法。
技术介绍
微小RNA(miR)表达失调已经成为异常表达的mRNA的潜在重要贡献驱动因素，所述异常表达的mRNA介导癌症的复杂恶性表型(Stahlhut和Slack,《基因组医学(GenomeMed.)》5:111,2013)。哪些miR共调控不同途径和基因程序内调整恶性表型的关键mRNA靶还不太清楚。由于单一miR可同时靶向多个mRNA，故基于miR的治疗剂可帮助减轻使用选择性较高的小分子或生物疗法靶向癌症中的单一癌基因或途径所观察到的内在或获得性抗性。
技术实现思路
本文中公开了在癌症中表达增加或减少的miRNA。所公开的miRNA或其模拟物(mimics)和/或拟似物(mimetics)可以用于治疗和/或诊断患有癌症(如恶性肿瘤)的对象的方法中。本文中公开了治疗患有癌症的对象的方法。所述方法包括向对象施用一种或多种在肿瘤中表达改变的miRNA核酸(或其模拟物或拟似物)。在一些实例中，所述方法包括向患有癌症的对象施用有效量的miR-30核酸、miR-26a-5p核酸、miR-26b-5p核酸、miR-145-5p核酸、miR-338-3p核酸、miR-375核酸、miR-29核酸、miR-27核酸、miR-101核酸、其模拟物或拟似物，与miR-30、miR-26a-5p、miR-26b-5p、miR145-5p、miR-338-3p、miR-375的任一互补的miR，或其中任何两种或更多种的组合。在具体实例中，对象患有鳞状细胞癌，如头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)。在其它实例中，所述方法包括向对象施用有效量的表1、表3、表4、表5、表18、表20、表21及表23任一个中所列miRNA核酸的至少一种、其模拟物或拟似物、互补寡核苷酸，或其中任何两种或更多种的组合。在一些实例中，miRNA核酸以双链体miRNA核酸和/或被包括在载体中施用。在一些实例中，miRNA核酸和/或其模拟物或拟似物使表6至14中所列一种或多种mRNA的表达减少。本文中还公开了包括一种或多种miRNA核酸，如表1、表3、表4、表5、表18、表20、表21及表23任一个中所列miRNA的至少一种的组合物。在一些实例中，miRNA核酸是修饰的miRNA，例如包括一个或多个序列修饰、修饰的核苷酸，和/或5′端和/或3′端修饰的miRNA核酸。在具体实例中，修饰的miRNA核酸是miR-30a核酸，包括但不限于在本文中以SEQIDNO:37-61提供的修饰的miRNA。在其它实例中，修饰的miRNA核酸包括本文中以SEQIDNO:62-67提供的miRNA核酸。在又其它实例中，修饰的miRNA核酸包括本文中以SEQIDNO:73-158提供的miRNA核酸。在一些实例中，miRNA核酸包括双链体miRNA核酸和/或被包括在载体中。本文中还公开了将对象诊断为患有具有一种或多种miRNA核酸表达改变的肿瘤的方法。在一些实施方案中，所述方法包括检测来自对象的样品中表1、3、4、5、18及20任一个中所列一种或多种miRNA的表达，并将来自对象的样品中的表达与对照相比较。在一些实例中，miRNA表达量相较于对照有改变，指示对象患有肿瘤。在一些实例中，所述方法包括检测miR-30-核酸、miR-26a-5p核酸、miR-26b-5p核酸、miR-145-5p核酸、miR-338-3p核酸或miR-375核酸中的一种或多种的表达，并且如果所述miRNA中的一种或多种的表达相较于对照减少，则确定对象患有肿瘤(包括但不限于，鳞状细胞癌肿瘤)。在一些实施方案中，所述方法还包括向对象施用一种或多种miRNA核酸，如miR-30核酸、miR-26a-5p核酸、miR-26b-5p核酸、miR-145-5p核酸、miR-338-3p核酸、miR-375核酸或其模拟物或拟似物中的一种或多种。本公开内容的前述的和其它特征将因以下详细描述而变得更加明显，以下详细描述参照附图进行。附图说明图1是显示用于筛选和验证HNSCC中miR-30的表达和功能的示例性方法的图式。图2A和2B是显示当与粘膜对照相比较时TCGA(图2A)和USMC(图2B)HNSCC肿瘤队列中由SAMseq鉴定为差异表达的33个miRNA的一对图。对于各图，左侧：肿瘤与粘膜之间中值表达的倍数变化，以线性标度呈现。右侧：以log10RPM表示的粘膜和肿瘤的中值表达分布的箱须图。中值是由中间的粗黑线表示，条柱表示第25和第75个百分点，并且离群值是以个别点展示。FDR≤0.05。图2C和2D是显示TCGA(图2C)和UMSC(图2D)HNSCC队列中表达减少的九个miRNA的一对图。肿瘤与粘膜对照之间中值表达的倍数变化展示于各图的左侧。粘膜和肿瘤的中值表达分布的箱须图以log10RPM(每百万个碱基对的reads)呈现于各图的右侧。中值是由中间的粗黑线表示，条柱表示第25和第75个百分点，离群值是以个别点展示。图3A-3D是显示表达减少的miRNA对HNSCC增殖的影响的一系列图。在HNSCC细胞系UM-SCC-1中进行的体外全基因组RNAi筛选中，微小RNA展示抗增殖活性。散点图展示使用TCGA(图3A)和UMSC(图3B)表达数据，差异表达的微小RNA(在y轴中log2肿瘤对比粘膜)随增殖分数统计分布(绝对中位差(MAD))的变化。图中左下方部分中的框表示在RNAi筛选中因抗增殖活性(x轴)而受到抑制的微小RNA表达比率(y轴)。miR-30-5p家族成员以红色标记。图3C是显示在UM-SCC-1中转染之后96小时，miRNA模拟物的抗增殖性的图，以miRNA模拟物对照的百分比呈现。图3D显示在来自TCGA队列的粘膜和肿瘤试样中hsa-miR-30-5p家族成员的表达。条柱表示SEM并且*表示(q<0.2samseq工具)。miR-30a-5p和miR-30e-5p是粘膜试样中表达量最高的家族成员并且在肿瘤试样中展示最大程度的减少。图4是显示来自HNSCCTCGA数据集并且针对含有预测的miR-30结合位点的mRNA过滤的miR-30a-5p的表达(log10RPM，x轴)对比mRNA表达(log10RSEM(期望最大化RNA-Seq)，y轴)的一系列图。呈现了指定mRNA的线性回归散点图和p值。图5是显示用miR阴性对照(negCon)、miR-30a或抗miR-30a对照寡核苷酸转染72小时的UM-SCC-46细胞中所选miR-30靶基因的qRT-PCR测量的一对图。所有数据都表示三次独立实验的平均值并且误差条表示SEM。*p值<0.05，由student'sT-检验测定。图6A-6E是显示HNSCC细胞系中miR-30a预测靶的验证的一系列图。图6A显示由Mfold(可见于万维网unafold.rna.albany.edu/？q＝mfold)预测的miR-30a(SEQIDNO:1)与靶mRNAEGFR(SEQIDNO:68)、IGFIR(S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种治疗患有癌症的对象的方法，包括向所述对象施用有效量的分离的微小RNA(miRNA)核酸，所述miRNA核酸包含miR‑30核酸、miR‑26a‑5p核酸、miR‑26b‑5p核酸、miR‑145‑5p核酸、miR‑338‑3p核酸、miR‑205‑5p核酸、miR‑375核酸、miR‑29核酸、miR‑27核酸、miR‑101核酸，其中任一种的模拟物和/或拟似物，或其任何两种或更多种的组合，由此治疗所述患有癌症的对象。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.07 US 62/304,8441.一种治疗患有癌症的对象的方法，包括向所述对象施用有效量的分离的微小RNA(miRNA)核酸，所述miRNA核酸包含miR-30核酸、miR-26a-5p核酸、miR-26b-5p核酸、miR-145-5p核酸、miR-338-3p核酸、miR-205-5p核酸、miR-375核酸、miR-29核酸、miR-27核酸、miR-101核酸，其中任一种的模拟物和/或拟似物，或其任何两种或更多种的组合，由此治疗所述患有癌症的对象。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述miR-30核酸是miR-30a-5p核酸、miR-30b-5p核酸、miR-30c-5p核酸、miR-30d-5p核酸、miR-30e-5p核酸，或其模拟物和/或拟似物。3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述miR-30核酸或其模拟物和/或拟似物包含SEQIDNO:42和56的双链体、SEQIDNO:42和57的双链体，或SEQIDNO:1-11、37-61及66中的一种或多种。4.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述miR-30核酸或其模拟物和/或拟似物包含SEQIDNO:73-92中的一种或多种、SEQIDNO:50和61的双链体、SEQIDNO:73和61的双链体或SEQIDNO:74和61的双链体。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述miR-26a-5p核酸包含SEQIDNO:12，所述miR-26b-5p核酸包含SEQIDNO:15，所述miR-145-5p核酸包含SEQIDNO:18，所述miR-338-3p核酸包含SEQIDNO:21，所述miR-375核酸包含SEQIDNO:17，或其模拟物和/或拟似物。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述miR-26a-5p模拟物或拟似物包含SEQIDNO:64、65及105-115中的一种或多种，所述miR-145-5p模拟物或拟似物包含SEQIDNO:66、67及116-125中的一种或多种，所述miR-375模拟物或拟似物包含SEQIDNO:62、63及93-104中的一种或多种，所述miR-101模拟物或拟似物包含SEQIDNO:126-135中的一种或多种，所述miR-29模拟物或拟似物包含SEQIDNO:136-146中的一种或多种，或所述miR-27模拟物或拟似物包含SEQIDNO:147-158中的一种或多种。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用有效量的所述miR-30核酸、所述miR-26a-5p核酸、所述miR-145-5p核酸及所述miR-375核酸或其模拟物和/或拟似物。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述miRNA核酸和/或其模拟物或拟似物使表6至14中所列一种或多种mRNA的表达减少。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述一种或多种分离的miRNA核酸以脂质体组合物施用。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述脂质体还包含一个或多个使所述脂质体靶向所述癌症的分子。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述靶向分子包含抗转铁蛋白受体抗体或其片段。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述癌症包含鳞状细胞癌。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述鳞状细胞癌包含头颈部鳞状细胞癌、肺鳞状细胞癌或子宫颈鳞状细胞癌。14.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述癌症是上皮起源的并且选自下组：子宫颈腺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、乳腺癌及胰腺癌。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，所述方法还包括施用一种或多种另外的疗法。16.根据权利要求15所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·D·萨利赫，C·万韦斯，Z·陈，H·程，
申请(专利权)人：美国政府由卫生和人类服务部的部长所代表，米雷楚莱股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US