本发明专利技术公开了一种抑制人microRNA-484表达的反义寡聚核苷酸及其应用。该反义寡聚核苷酸特异性结合于人miR-484，包含与下述核苷酸序列中13～22个连续核苷酸互补的序列：5’-UCAGGCUCAGUCCCCUCCCGAU-3’，特别是其包含序列：5’-AUCGGGAGGGGACUGAGCCUGA-3’。本发明专利技术的反义寡聚核苷酸可以为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸与脱氧核糖核苷酸的嵌合体，并可对链中任一核苷酸进行修饰。本发明专利技术的miR-484反义寡聚核苷酸能够有效抑制人脑胶质瘤细胞中miR-484表达，抑制其生长和增殖，从而有效治疗脑胶质瘤及其他miR-484高表达的肿瘤。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学材料
和药物领域。具体地，本专利技术涉及一种microRNAs (miRNA)反义寡聚核苷酸,尤其是涉及人microRNA-484 (人miR-484)反义寡聚核苷酸及其应用。该反义寡聚核苷酸可与人miR-484互补，从而抑制人miR-484的表达而起到抗肿瘤的作用。本专利技术还涉及包含该miRNA反义寡聚核苷酸的药物组合物。
技术介绍
miRNAs (又称为microRNA或微小RNA)是小的非编码RNA，长度为20_25bp，通常是由RNA聚合酶II (Pol II)转录的，一般最初产物为大的具有帽子结构(7MGpppG)和多聚腺苷酸尾巴(MAAA)的pri-miRNA(primary miRNA,初级miRNA)。这些pri-miRNA在RNase IIIDrosha和其辅助因子Pasha的作用下被处理成70个核苷酸组成的前体miRNA (precursormiRNA, pre-mi RNA)。RAN-GTP和export in 5 (输出蛋白5)将这种前体分子输送到细胞质中。随后，另一个RNase III Dicer(核糖核酸内切酶)将其剪切产生约为22个核苷酸长度的双链。这种双链很快被引导进入miRISC(miRNA-induced silencing complex, miRNA诱导的沉默复合物)复合体中，其中含有Argonaute蛋白(AGO蛋白)，并且成熟的单链miRNA保留在这一复合物中。成熟的miRNA结合到与其互补的mRNA的位点并通过两种依赖于序列互补性的机制负调控基因表达，与靶mRNA不完全互补的miRNA在蛋白质翻译水平上抑制其表达。然而，最近也有证据表明，这些miRNA也有可能影响mRNA的稳定性。使用这种机制的miRNA结合位点通常在mRNA的3’端非翻译区。如果miRNA与靶位点完全互补(或者几乎完全互补)，那么这些miRNA的结合往往引起祀分子mRNA的降解。miRNAs在物种进化中相当保守，在动物，植物和真菌等中发现的miRNAs表达均有严格的组织特异性和时序性。目前，只有很小一部分miRNAs的生物学功能得到阐明。这些miRNAs调节细胞生长和组织分化，与生物生长发育有关。一系列的研究表明miRNAs在细胞生长和凋亡、血细胞分化、同源异形盒基因调节、神经元的极性、胰岛素分泌、大脑形态形成、心脏发生和胚胎后期发育等过程中发挥重要作用。例如，miR-273参与线虫的神经系统发育过程;miR-430参与斑马鱼的大脑发育；miR-181控制哺乳动物造血细胞分化为B细胞；miR-375调节哺乳动物胰岛细胞发育和胰岛素分泌；miR-143在脂肪细胞分化起作用；miR-196参与了哺乳动物四肢形成，miR-1与心脏发育有关。另有研究人员发现许多神经系统的miRNAs在大脑皮层培养中受到时序调节，表明其可能控制着区域化的mRNA翻译。miRNA表达与多种癌症相关，并且这些基因可能起到肿瘤抑制基因或是癌基因作用。最先在B细胞慢性淋巴性白血病(CLL)中发现有miRNA表达水平的改变，随后陆续在各种人类肿瘤中均检测到miRNA表达水平的变化。研究发现，miRNAs与肿瘤形成相关，既能发挥肿瘤抑制基因的作用(如miR-15a和miR-16-l)，又能起到癌基因的作用(如miR-155和miR-17-92簇)。目前认为，在肿瘤细胞中，有些miRNA成熟体或前体表达水平异常，而表达异常的miRNA通过影响靶mRNA翻译发挥作用，参与肿瘤形成过程，并起重要作用。如Ras原癌基因受let-7家族的调控，BCL2抗凋亡基因受miR-15a-miR-16_l簇调控，E2F1转、录因子受miR-17-92簇调控，BCL6抗凋亡基因受miR-127的调控等。miRNAs的表达下调也和肿瘤发生有密切关系，这预示着miRNA具有癌基因的功能。例如，miR-143和miR-145在结肠癌中明显下调。有趣的是，其发夹结构的前体分子在肿瘤和正常组织中含量相似，这表明,miRNAs的表达下调可能是由于其加工过程受到破坏。但是,miR-143和miR-145的肿瘤抑制基因功能可能不仅仅局限于结肠癌，在乳腺癌、前列腺癌、子宫癌、淋巴癌等细胞系中其表达量也明显下调。另一个报道表明，miR-21在胶质母细胞瘤中表达增加。这个基因在肿瘤组织中的表达量比在正常组织中高5-100倍。miRNAs是天然的反义作用因子，能够调控与真核生物生存和增殖相关的多种基因。在肿瘤治疗方面，miRNA的应用前景光明。在利用miRNA作为治疗靶点方面，已有实验数据支持如在吉西他滨(gemcitabine)治疗的过程中，出现miRNA表达谱的变化；调控部分miRNA的表达水平(如使miR-21过表达)，能增进胆管癌细胞对化疗药物的敏感性。通过引入与具有癌基因特性的miRNA互补的合成的反义寡聚核苷酸一抗miRNA寡聚核苷酸(AMOs)-可能有效的灭活肿瘤中的miRNAs,延缓其生长。临床上,可以通过经常的或者持 续的2’ -O-甲基化或者锁核酸(LNA)等修饰的反义寡聚核苷酸给药使miRNA失活。这些修饰使得寡核苷酸更稳定，比其他治疗手段毒性更低。使用antagomirs (与胆固醇偶联的AMOs)，注射小鼠后可以在不同器官有效抑制miRNA活性，因而可能成为一种有希望的治疗药物。相反的，过表达那些具有肿瘤抑制基因作用的miRNAs，如let-7家族，也可以用于治疗某些特定的肿瘤。反义寡聚核苷酸(FlanaganWM. Antisense comes of age. Cancer MetastasisReviews 1998 ;17 (2) :169-76)是指一段可以与其靶基因的碱基互补的核苷酸。反义寡聚核苷酸可以抑制相应基因的表达。人microRNA-484(hsa-miR-484)位于 16 号染色体，前体序列为 AGCCUCGUCAGGCUCA⑶CCCCUCCCGAUAAACCCCUAAAUAGGGACUUUCCCGGGGGGUGACCCUGGCUUUUUUGGCG(SEQ ID No. I)。有 I 个成熟 microRNA :hsa_miR-484 (MIMAT0002174，序列为 UCAGGCUCAGUCCCCUCCCGAU (SEQID No. 2))。Bimpaki等利用microarray研究肾上腺皮质大结节病组织中miR-484表达上调。Tang等发现胰岛beta细胞对高糖刺激后miR-484表达下调(Tang等,2009)。但在胶质瘤中还没有关于miR-484的功能和表达水平的研究报道。近三十年,尽管临床上肿瘤的综合治疗已很普遍,但以手术为主、放化疗为辅的综合治疗对肿瘤患者的生存率提高并不明显，5年总体生存率仍然较低，徘徊在30% 55%左右，并没有显著提高，中晚期患者的5年生存率更低，约为20%。而且这些方法都存在各自的局限性，特别是对中晚期和复发患者疗效不佳，对伴有远处转移者疗效更差。因此，寻找更安全有效的治疗途径是提高肿瘤患者生存率和生存质量所亟待解决的难题。
技术实现思路
针对现有技术不足，本专利技术设计了一系列可以结合于miR-484不同位置的反义核酸(反义寡聚核苷酸)分子，在培养细胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种人microRNA-484的反义寡聚核苷酸，其特征在于，所述反义寡聚核苷酸包含与下述核苷酸序列中13 22个连续的核苷酸互补的序列5’-UCAGG⑶CAGUCCCXUCCCGAU-3’。2.如权利要求I所述的反义寡聚核苷酸，其特征在于，所述反义寡聚核苷酸序列为.5， -AUCGGGAGGGGACUGAGCCUGA-3，。3.如权利要求I所述的反义寡聚核苷酸，其特征在于，所述反义寡聚核苷酸为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸与脱氧核糖核苷酸的嵌合体。4.如权利要求I 3中任一项所述的反义寡聚核苷酸，其特征在于，所述反义寡聚核苷酸进一步被修饰。5.如权利要求4所述的反义寡聚核苷酸，其特征在于，所述修饰选自核糖修饰、碱...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁侃，张佩琢，李捷，沈孝坤，
申请(专利权)人：中国科学院上海药物研究所，苏州吉玛基因药物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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