【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达G
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肌聚糖的腺相关病毒载体的全身递送和肌营养不良症的治疗
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据35 U.S.C.
§
119(e)要求2020年9月8日提交的美国临时申请号63/075,697的权益，其内容通过引用整体并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请含有已经以ASCII格式电子递交的序列表，并且该序列表据此以引用方式整体并入。2021年8月24日创建的所述ASCII拷贝名为8186WO00_Sequence_Listing_ST25.txt且大小为23千字节。
[0005]本文描述了治疗载体，诸如表达γ
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肌聚糖的AAV载体，以及使用这些载体减少和预防患有肌营养不良症的受试者中的纤维化的方法。
技术介绍
[0006]2C型肢带型肌营养不良症(LGMD)(LGMD2C)是一种常染色体隐性病症，由编码γ
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肌聚糖(SGCG)的基因突变引起，从而导致功能蛋白的丧失。它表现为进行性肌营养不良症，开始于环带肌，然后扩展到下肢和上肢肌肉，并且也可出现在膈肌(DIA)和心脏(HRT)，从而导致特定患者的呼吸和心力衰竭。LGMD2C没有获得批准的疾病缓解疗法。因此，需要用于LGMD2C患者的有效疗法。
技术实现思路
[0007]本文描述了表达γ
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肌聚糖基因的基因治疗载体，例如AAV；以及将γ
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肌聚糖递送至肌肉，以减少和/或预防纤维化，和...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种治疗有需要的受试者的肌营养不良症的方法，其包括向所述受试者施用重组腺相关病毒(rAAV)scAAVrh74.MHCK7.hSGCG的步骤，其中所述rAAV使用全身施用途径并且以基于作为定量标准的线性化质粒为约2x 10
12
vg/kg至约5.0x 10
14
vg/kg的剂量来施用；其中与施用所述rAAV之前的血清肌酸激酶(CK)水平相比，在施用所述rAAV之后，所述受试者的所述血清CK水平降低。2.一种恢复有需要的受试者中的肌营养不良蛋白相关蛋白复合物的方法，其包括施用重组腺相关病毒(rAAV)scAAVrh74.MHCK7.hSGCG的步骤，所述rAAV使用全身施用途径并且以基于作为定量标准的线性化质粒为约2x 10
12
vg/kg至约5.0x 10
14
vg/kg的剂量来施用。3.如权利要求1或2所述的方法，其中与施用所述rAAV之前的γ
‑
肌聚糖基因表达水平相比，在施用所述rAAV之后，所述受试者的细胞中的所述γ
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肌聚糖基因表达水平增加；其中所治疗受试者的肌肉细胞中的平均rAAV拷贝数为每个细胞核至少0.01个拷贝；其中与施用所述rAAV之前的水平相比，所述经治疗受试者的肌肉中的中央核百分比和/或纤维化减少；其中与施用所述rAAV之前的所述受试者的运动功能相比，所述受试者的所述运动功能得到改善；其中与施用所述rAAV之前的所述受试者的NSAD相比，所述受试者的所述NSAD增加；和/或其中与施用所述rAAV之前的所述受试者的ALT和AST水平相比，所述受试者的所述ALT和AST水平降低。4.如权利要求3所述的方法，其中所述运动功能改善至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％或50％。5.如权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中所述rAAV使用静脉内途径施用。6.如权利要求1
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5中任一项所述的方法，其中所述rAAV基于作为定量标准的线性化质粒以4.63x 10
12
vg/kg、约1.85x 10
13
vg/kg或7.41x 10
13
vg/kg，或基于作为定量标准的超螺旋质粒以约1.25x 10
13
vg/kg、约5.0x10
13
vg/kg或约2.0x 10
14
vg/kg施用。7.如权利要求1
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6中任一项所述的方法，其中rAAV以约10mL/kg的浓度施用。8.如权利要求1
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7中任一项所述的方法，其中所述rAAV通过注射、输注或移植来施用。9.如权利要求1
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8中任一项所述的方法，其中所述rAAV通过输注经大约1至2小时施用。10.如权利要求1
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8中任一项所述的方法，其中所述rAAV经由外周肢体静脉通过静脉内途径施用。11.如权利要求1
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10中任一项所述的方法，其中所述rAAV包含SEQ ID NO:1的人γ
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肌聚糖核苷酸序列。12.如权利要求1
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11中任一项所述的方法，其中所述rAAV包含SEQ ID NO:2的MHCK7启动子序列。13.如权利要求1
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12中任一项所述的方法，其中所述rAAV是血清型AAVrh.74的。14.如权利要求1
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13中任一项所述的方法，其中所述rAAV包含与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7具有至少90％、95％或99％同一性的核苷酸序列。15.如权利要求1
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14中任一项所述的方法，其中所述rAAV包含SEQ ID NO:6的内含子序列。
16.如权利要求1
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15中任一项所述的方法，其中所述rAAV包含SEQ ID NO:5的polyA序列。17.如权利要求1
‑
16中任一项所述的方法，其中所述rAAV包含SEQ ID NO:3的5
’
反向末端重复(ITR)序列。18.如权利要求1
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17中任一项所述的方法，其中所述rAAV包含SEQ ID NO:4的3
’
反向末端重复(ITR)序列。19.如权利要求1
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18中任一项所述的方法，其中所述肌营养不良症为肢带型肌营养不良症。20.如权利要求1
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18中任一项所述的方法，其中所述肌营养不良症为2C型肢带型肌营养不良症。21.一种治疗有需要的受试者的肢带型肌营养不良症的方法，其包括以基于作为定量标准的线性化质粒为约4.63x 10
12
vg/kg、约1.85x 10
13
vg/kg或7.41x 10
13
vg/kg或基于作为定量标准的超螺旋质粒为约1.25x10
13
vg/kg、约5.0x 10
13
vg/kg或约2.0x 10
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vg/kg的剂量，通过静脉内输注经大约1至2小时向所述受试者施用rAAV，并且其中所述rAAV包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7的核苷酸序列。22.一种在受试者的细胞中表达γ
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肌聚糖基因的方法，其包括向所述受试者施用scAAVrh74.MHCK7.hSGCG构建体，所述构建体包含与SEQ ID NO:7具有至少90％、95％或99％同一性的核苷酸序列。23.一种增加受试者的肌肉组织中的γ
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肌聚糖阳性纤维和/或降低CK水平的方法，其包括向所述受试者施用与SEQ ID NO:7具有至少90％、95％或99％同一性的scAAVrh74.MHCK7.hSGCG构建体核苷酸序列。24.如权利要求22或23所述的方法，其中所述γ
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肌聚糖基因的表达或所述阳性γ
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肌聚糖阳性纤维数量通过在施用所述rAAV之前和之后通过蛋白质印迹测量肌肉活检中的所述γ
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肌聚糖蛋白水平来检测。25.如权利要求22所述的方法，其中在施用rAAV之后，γ
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肌聚糖蛋白表达增加至少30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％。26.如权利要求22
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25中任一项所述的方法，其中通过在施用所述rAAV之前和之后通过免疫组织化学测量肌肉活检中的所述γ
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肌聚糖蛋白水平来检测γ
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肌聚糖基因的表达或γ
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肌聚糖阳性肌肉纤维数量。27.如权利要求22所述的方法，其中在施用rAAV之后，γ
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肌聚糖蛋白表达增加至少39％。28.如权利要求23所述的方法，其中与施用所述rAAV之前的γ
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肌聚糖阳性纤维数量相比，在施用所述rAAV之后，所述受试者的肌肉组织中的所述γ
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肌聚糖阳性纤维数量增加至少40％、41％或42％。29.如权利要求22所述的方法，其中至少一个细胞具有多于一个AAV病毒拷贝数。30.如权利要求22
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29中任一项所述的方法，其中与施用所述rAAV之前的血清CK水平相比，在施用所述rAAV之后，所述受试者中的所述血清CK水平降低。31.如权利要求30所述的方法，其中与施用所述rAAV之前的所述血清CK水平相比，在施用所述rAAV后60天至90天、60天或90天，所述受试者中的所述血清CK水平降低至少82％、
83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％或90％。32.如权利要求1
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31中任一项所述的方法，其中与施用所述rAAV之前的α
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肌聚糖水平相比，在施用所述rAAV之后，所述受试者中的所述α
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肌聚糖和/或β
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肌聚糖水平增加。33.一种增加有需要的受试者中的α
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肌聚糖和/或β
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肌聚糖表达的方法，其包括向所述受试者施用包含scAAVrh74.MHCK7.hSGCG构建体的rAAV，所述构建体具有与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7具有至少90％、95％或99％同一性的核苷酸序列。34.一种增加有需要的受试者中的α
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肌聚糖和/或β
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肌聚糖在细胞膜上的定位的方法，其包括向所述受试者施用与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7具有至少90％、95％或99％同一性的scAAVrh74.MHCK7.hSGCG构建体核苷酸序列。35.如...
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