一类用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体、细胞爬片、试剂盒和应用制造技术

本发明专利技术公开了一类用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体、细胞爬片、试剂盒和应用，本发明专利技术构建了多个GFAP重组突变体，通过实验发现当缺失从GFAP核苷酸序列5

【技术实现步骤摘要】
一类用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体、细胞爬片、试剂盒和应用


[0001]本专利技术属于抗体检测
，具体涉及一类用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体、细胞爬片、试剂盒和应用。

技术介绍

[0002]自身免疫性胶质纤维酸性蛋白星形胶质细胞病(autoimmune glial fibrillary acidic protein astrocytopathy)是2016年由美国Mayo Clinic的Flanagan等首先命名的一种可治疗的中枢神经系统自身免疫性炎性疾病，该病主要累及脑膜、脑、脊髓和视神经等，主要临床表现包括发热、头痛、不自主运动、脊髓炎、视神经异常、共济失调、精神情绪异常、癫痫、自主神经功能障异常和其他脑膜
‑
脑的症状与体征等，该病对类固醇激素治疗敏感。针对星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)抗体，也称为GFAP免疫球蛋白G(GFAP immunoglobulin G，GFAP
‑
IgG)，被认为是该病的特异性生物标志物(Flanagan E,Hinson S,Lennon V,et al.GFAP
‑
IgG as biomarker of autoimmune astrocytopathy:analysis of 102patients:autoimmune GFAP Astrocytopathy[J].Ann Neurol,2017,81)。
[0003]对于GFAP自身抗体的检测，目前推荐的方法是细胞转染法(cell
‑
based assay，CBA)和(或)组织转染法(tissue
‑
based assay，TBA)。GFAP有至少8种异构体，而GFAPα异构体在成人星形胶质细胞中最常见，且既往研究也发现在此类病当中，患者中GFAPα异构体抗体更多见，故通过CBA法主要检测的是GFAPα异构体抗体(章殷希等.自身免疫性胶质纤维酸性蛋白星形胶质细胞病[J].中华神经科杂志,2020,53:317
‑
320)。但是，在实验过程中科研人员发现过表达GFAPα蛋白的细胞在进行血清染色时会有长突起的信号，这些长突起的信号使阳性染色细胞的图像模糊，或者可能与GFAP自身抗体的阳性细胞混淆，从而导致检测人员误判，给出假阳性或假阴性的结果。

技术实现思路

[0004]为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一类用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体、细胞爬片、试剂盒和应用，以解决现有的GFAP自身抗体检测方法中由于背景信号存在导致的染色图像模糊从而造成检测结果出现假阳性或假阴性的技术问题。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0006]本专利技术公开了一类用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体，该缺失突变体为缺失从GFAP核苷酸序列5
’
端第1位核苷酸起至186
‑
309位中的任意以3的倍数位置的核苷酸的重组突变体。
[0007]优选地，所述缺失突变体能够识别GFAP的自身抗体且样本染色无长突起信号。
[0008]优选地，所述缺失突变体选自下列突变体中的任意一种：
[0009]缺失如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列中第1
‑
186位的GFAP
△1‑
186缺失突变体
(序列如SEQ ID NO:2所示)；缺失如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列中第1
‑
210位的GFAP
△1‑
210缺失突变体(序列如SEQ ID NO:3所示)；缺失如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列中第1
‑
240位的GFAP
△1‑
240缺失突变体(序列如SEQ ID NO:4所示)；缺失如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列中第1
‑
270位的GFAP
△1‑
270缺失突变体(序列如SEQ ID NO:5所示)；缺失如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列中第1
‑
309位的GFAP
△1‑
309缺失突变体(序列如SEQ ID NO:6所示)。
[0010]本专利技术还公开了一种用于检测GFAP自身抗体的细胞爬片，由上述的用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体转染至表达细胞中制成细胞爬片。
[0011]优选地，将所述用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体使用转染试剂转染至铺好细胞的爬片上，转染36～72h，固定细胞，制得细胞爬片。
[0012]进一步优选地，转染试剂采用PEI、lipofectamin2000、lipofectamin3000、lipo6000或lipo8000；固定细胞采用甲醛、丙酮、甲醇、乙醇或多聚甲醛。
[0013]本专利技术还公开了一种用于检测GFAP自身抗体的试剂盒，由上述的用于检测GFAP自身抗体的细胞爬片、标记抗体，并添加洗涤液制成。
[0014]优选地，所述标记抗体为FITC标记的抗体或Alexa Fluor染料标记的抗体；所述洗涤液为PBS或PBST。
[0015]本专利技术还公开了上述的用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体在制备诊断自身免疫性疾病的试剂中的应用。
[0016]优选地，所述自身免疫性疾病为胶质瘤、脑膜脑脊髓炎。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0018]本专利技术通过基因工程的方法，构建了多个GFAP重组突变载体，通过实验发现当缺失从GFAP核苷酸序列5
’
端第1位核苷酸起至186
‑
309位中的任意以3的倍数位置的核苷酸时，将这些缺失突变体转入表达细胞中制备成GFAP突变体细胞爬片，使用GFAP突变体细胞爬片对患者的血清和脑脊液进行检测，发现长突起信号消失，从而解决了检测GFAP自身抗体时出现的长突起信号的问题，有效的解决了检测过程中遇到的背景信号问题，因此提高了GFAP自身抗体诊断的可靠性，尤其是提高了检测的特异度，能够有效解决现有的GFAP自身抗体检测方法中由于背景信号存在导致的染色图像模糊从而造成检测结果出现假阳性或假阴性的技术问题。
附图说明
[0019]图1为全长及可识别GFAP自身抗体，但有长突起信号的突变体的染色结果图；其中，A
‑
F为GFAP的全长核酸序列以及GFAP的全长核酸序列缺失第1
‑
30、第1
‑
60、第1
‑
90、第1
‑
120、第1
‑
150位核苷酸的染色结果；
[0020]图2为可识别自身抗体且无长突起的突变体的染色结果图；其中，A
‑
E分别为GFAP的全长核酸序列缺失第1
‑
186、第1
‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一类用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体，其特征在于，该缺失突变体为缺失从GFAP核苷酸序列5
’
端第1位核苷酸起至186
‑
309位中的任意以3的倍数位置的核苷酸的重组突变体。2.根据权利要求1所述的用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体，其特征在于，所述缺失突变体能够识别GFAP的自身抗体且样本染色无长突起信号。3.根据权利要求1所述的用于GFAP自身抗体检测的缺失突变体，其特征在于，所述缺失突变体选自下列突变体中的任意一种：缺失如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列中第1
‑
186位的GFAP
△1‑
186缺失突变体；缺失如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列中第1
‑
210位的GFAP
△1‑
210缺失突变体；缺失如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列中第1
‑
240位的GFAP
△1‑
240缺失突变体；缺失如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列中第1
‑
270位的GFAP
△1‑
270缺失突变体；缺失如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列中第1
‑
309位的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李科，闫亚平，张君利，郝文斌，赵子越，封雪，
申请(专利权)人：陕西脉元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：