RNA结合蛋白的预处理方法和分离方法技术

本公开提供了一种RNA结合蛋白的预处理方法和分离方法，涉及生物医学领域。该预处理方法包括：获取胞浆提取物；将胞浆提取物超声破碎，对所得混合物进行离心以获取上清液；用快速蛋白液相层析法(FPLC)处理上述离心步骤所得的上清液，以获得包含靶RNA结合蛋白的流分；从所述FPLC所得流分中分离与靶RNA分子特异性结合的RNA结合蛋白(即，靶RNA结合蛋白)。通过采用该预处理方法处理细胞，提高了从细胞分离RNA结合蛋白过程中的特异性蛋白筛选效率，降低了非特异性蛋白的存在量。低了非特异性蛋白的存在量。低了非特异性蛋白的存在量。

【技术实现步骤摘要】
RNA结合蛋白的预处理方法和分离方法


[0001]本公开涉及生物医学领域，更具体地，涉及一种RNA结合蛋白的预处理方法和分离方法。
[0002]背景领域
[0003]RNA结合蛋白(RNA binding proteins，RBPs)是指细胞中能够与双链或单链RNA结合并形成RNA
‑
蛋白复合机器的一大类蛋白。通过识别并结合RNA，RBPs可调控RNA稳定性、选择性剪接、成熟转运乃至功能，进而影响相关生理与病理过程。
[0004]中国科学院广州生物医药与健康研究院的Miguel A.Esteban等人设计了RICK(Newly Transcribed RNA interactome using click chemistry)技术，利用核酸标记技术，巧妙地将新合成的RNA标记上生物素，通过链霉亲和素偶联的磁珠，分离得到相应被标记RNA分子和与其相结合的蛋白分子。
[0005]CN106093436A公开了一种简便检测RNA与蛋白互作的试剂盒及其使用方法，该试剂盒包括标记有生物素的UTP、ATP、CTP、GTP混本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种RNA结合蛋白的预处理方法，其特征在于，所述方法包括：获取不含细胞核的胞浆提取物；和超声破碎和/或反复冻融所得胞浆提取物，任选地，所述预处理方法包括对超声破碎和/或反复冻融所得胞浆提取物进行蛋白层析(例如，快速蛋白液相层析)并收集含有RNA结合蛋白的流分，进一步任选地，所述预处理方法包括从含有RNA结合蛋白的流分中去除细胞骨架蛋白的步骤。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括：获取胞浆提取物；将所述胞浆提取物超声破碎，对所得混合物进行离心以获取上清液；用快速蛋白液相层析法(FPLC)处理离心所得的上清液，以获得包含靶RNA结合蛋白的流分共混物，其中，所述靶RNA结合蛋白是与靶RNA分子特异性结合的RNA结合蛋白；从所述FPLC所得流分中分离所述靶RNA结合蛋白。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述获取胞浆提取物的步骤包括：收集细胞；用胰酶消化所述细胞，然后进行离心，弃上清；加入含有蛋白酶抑制剂的HEPES缓冲液，冰上孵育，而后加入NP
‑
40；离心，保留上清液以获得所述胞浆提取物。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述获取胞浆提取物的步骤之后，所述方法还包括：将所获取的胞浆提取物于
‑
80℃下反复冻融3
‑
5次。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将所述胞浆提取物超声破碎，对所得混合物进行离心以获取上清液的步骤包括：以3
‑
8秒的间隔和3
‑
8秒的超声持续时间，对所述胞浆提取物进行超声破碎4
‑
6分钟；在4℃下，以10,000
‑
12,000rpm的速度对所得混合物进行离心5
‑
20分钟，保留上清液。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：王文恭，吴崇阳，易霞，唐颢，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：