用于治疗突触核蛋白病的组合物和方法技术

公开了一类新型融合蛋白来募集细胞的先天分子伴侣机制，特别是Hsp70介导的系统，以特异性地减少α

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗突触核蛋白病的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据35 U.S.C.
§
119(e)要求于2020年6月5日提交的美国临时专利申请63/035,297的优先权。上述申请的全部内容在此通过引用以其整体并入。
[0003]序列表
[0004]本申请通过引用以其整体并入名称为“269548
‑
493385_ST25.txt”(68KB)的序列表，所述序列表于2021年6月4日下午1:09创建，并且随同以电子方式提交。


[0005]描述并请求保护包含一个或多个J结构域、α
‑
突触核蛋白结合结构域、接头、靶向试剂、表位、细胞穿透剂及其组合的新的融合蛋白。另外，本公开内容描述了这些新型融合蛋白的用途，并且同样描述并请求保护其对先天性分子伴侣机制，例如Hsp70介导的系统的募集，以特异性减少α
‑
突触核蛋白介导的蛋白质聚集和相关的蛋白病。

技术介绍

[0006]细胞内表达的所有蛋白质都需要正确折叠成其预期结构，以便正常发挥功能。越来越多的疾病和病症显示出与蛋白质的不适当折叠和/或蛋白质和脂蛋白以及传染性蛋白质物质的不适当沉积和聚集相关。也被称为构象疾病或蛋白质构象病的由错误折叠引起的疾病的实例包括阿尔茨海默氏病(AD)、肌萎缩侧索硬化(ALS)和额颞叶痴呆(FTLD)。突变蛋白在细胞中聚集，导致典型的细胞毒性细胞包涵体。
[0007]各种各样的神经退行性疾病在病理学上被表征为由淀粉样原纤维构成的细胞内或细胞外蛋白质聚集物的积累(Forman等人，(2004)Nat Med.10:1055
‑
1063)。例如，阿尔茨海默氏病(AD)的病理学通过分别由β
‑
淀粉样蛋白和微管相关蛋白tau构成的老年斑块和神经原纤维缠结来定义。
[0008]帕金森氏病(PD)是仅次于阿尔茨海默氏病(AD)的第二大常见神经退行性病症。超过1％的60岁以上的人患有该疾病，仅在美国就具有超过100万患者。PD患者经历运动迟缓、僵直、震颤、平衡困难和约40％ PD患者中不同的痴呆表现，其中一些人在疾病的后期发展AD样痴呆。PD的主要病理特征是黑质中的多巴胺能神经元的丧失和异常蛋白质聚集物的存在，所述蛋白质聚集物在神经元细胞质中形成丝状包涵体，在PD脑中被称为路易体(LB)或路易神经突(神经纤维)(LN)(Galvin等人，(2001)Arch Neurol 58,186
‑
190；Lang和Lozano，(1998)N Engl J Med 339,1044
‑
1053；Lang和Lozano，(1998)N Engl J Med 339,1130
‑
1143)。大多数PD是散发性的。家族形式PD的占所有病例的约10％，并且可以是常染色体隐性遗传或常染色体显性遗传，提示了该病症的复杂病因学(Lang和Lozano综述的)(Lang和Lozano，(1998)N Engl J Med 339,1044
‑
1053；Lang和Lozano，(1998)N Engl J Med 339，1130
‑
1143)。另外，环境因素也在PD的发展中起重要作用(由Di Monte，2003综述的)(Di Monte等人，(2003)Lancet Neurol 2，531
‑
538)。
[0009]PD与几个基因座的遗传连锁的发现提供了鉴定促成该疾病的发病机制的遗传因
素的希望。对源于意大利南部的一个家族中的患有罕见的、显性遗传的PD变体的患者的研究将该病症与染色体4q21
‑
23上的基因座(park 1)相联系，先前鉴定的被称为α
‑
突触核蛋白(SNCA)的基因定位于所述基因座中(Jakes等人，(1994)FEBS Lett 345,27
‑
32；Shibazaki等人，(1995)Cytogenet Cell Genet 71,54
‑
55；Polymeropoulos等人，(1996)Science 274,1197
‑
1199)。关于α
‑
突触核蛋白参与家族性PD的直接证据通过鉴定基因中的错义突变来提供，所述错义突变导致在这个意大利裔美国家族和其后三个不相关的希腊家族中的氨基酸53处的A
‑
T取代(Polymeropoulos等人，(1997)Science 276，2045
‑
2047)。随后，在一个德国家族中鉴定了在α
‑
突触核蛋白基因的位置30处将丙氨酸变为脯氨酸的第二种突变(Kruger等人，(1998)Nat Genet 18,106
‑
108)。LB的免疫组织化学检查显示了LB含有许多不同的蛋白质。最一致地被描述的蛋白质是神经丝、泛素和alpha
‑
突触核蛋白(α
‑
突触核蛋白)(Takeda等人，(1998)Am J Pathol 152,367
‑
372；Gai等人，Brain 118(Pt 6),1447
‑
1459)。错误折叠的α
‑
突触核蛋白的大型近核聚集物占优势地存在于PD脑的路易体以及营养不良性路易神经突(LN)中(Dickson,(2012)Cold Spring Harb Perspect Med 2；Stefanis,(2012)Cold Spring Harb Perspect Med 2，a009399；Lashuel等人，(2013)Nat Rev Neurosci 14，38
‑
48)，提示了α
‑
突触核蛋白的错误折叠作为与聚集的α
‑
突触核蛋白累积相关的神经退行性疾病的发病机制的罪魁祸首(Baba等人，(1998)Am J Pathol 152,879
‑
884；Kalia等人，(2013)Ann Neurol 73,155
‑
169)。
[0010]α
‑
突触核蛋白基因编码～19kDa的140个氨基酸的蛋白质。虽然α
‑
突触核蛋白的功能尚未完全明确，但存在提示α
‑
突触核蛋白在神经递质释放中具有作用的证据(Liu等人，(2004)EMBO J 23,4506
‑
4516；Chandra等人，(2005)Cell 123,383
‑
396；Fortin等人，(2005)J Neurosci 25,10913
‑
10921)。α
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突触核蛋白在哺乳动物脑各处高度表达，但在与膜和囊泡结构相关的突触前神经末梢中富集。小鼠具有α
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突触核蛋白的功能本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.因此，在第一个方面，本文公开的是分离的融合蛋白，其包含J蛋白的J结构域和α
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突触核蛋白结合结构域。2.权利要求1的融合蛋白，其中所述J蛋白的J结构域是真核起源的。3.权利要求1或权利要求2中任何一项的融合蛋白，其中所述J蛋白的J结构域是人起源的。4.权利要求1
‑
3中任何一项的融合蛋白，其中所述J蛋白的J结构域是胞质定位的。5.权利要求1
‑
4中任何一项的融合蛋白，其中所述J蛋白的J结构域选自SEQ ID No:1
‑
50。6.权利要求1
‑
5中任何一项的融合蛋白，其中所述J结构域包含选自SEQ ID NO:1、5、6、10、16、24、25、31和49的序列。7.权利要求1
‑
6中任何一项的融合蛋白，其中所述J结构域包含SEQ ID NO:5的序列。8.权利要求1
‑
6中任何一项的融合蛋白，其中所述J结构域包含SEQ ID NO:10的序列。9.权利要求1
‑
6中任何一项的融合蛋白，其中所述J结构域包含SEQ ID NO:16的序列。10.权利要求1
‑
6中任何一项的融合蛋白，其中所述J结构域包含SEQ ID NO:25的序列。11.权利要求1
‑
6中任何一项的融合蛋白，其中所述J结构域包含SEQ ID NO:31的序列。12.权利要求1
‑
11中任何一项的融合蛋白，其中当使用ELISA测定进行测量时，所述α
‑
突触核蛋白结合结构域对于α
‑
突触核蛋白具有1μM或更小，例如300nM或更小、100nM或更小、30nM或更小、10nM或更小的K
D
。13.权利要求1
‑
12中任何一项的融合蛋白，其中所述α
‑
突触核蛋白结合结构域包含选自SEQ ID NO:51
‑
64的序列。14.权利要求1
‑
13中任何一项的融合蛋白，其中所述α
‑
突触核蛋白结合结构域包含SEQ ID NO:51的序列。15.权利要求1
‑
13中任何一项的融合蛋白，其中所述α
‑
突触核蛋白结合结构域包含SEQ ID NO:52的序列。16.权利要求1
‑
13中任何一项的融合蛋白，其中所述α
‑
突触核蛋白结合结构域包含SEQ ID NO:63的序列。17.权利要求1
‑
13中任何一项的融合蛋白，其中所述α
‑
突触核蛋白结合结构域包含SEQ ID NO:64的序列。18.权利要求1
‑
17中任何一项的融合蛋白，其包含多个α
‑
突触核蛋白结合结构域。19.权利要求1
‑
18中任何一项的融合蛋白，其由两个α
‑
突触核蛋白结合结构域组成。20.权利要求1
‑
19中任何一项的融合蛋白，其由三个α
‑
突触核蛋白结合结构域组成。21.权利要求1
‑
20中任何一项的融合蛋白，其包含以下构建体之一：i.DNAJ
‑
X
‑
S，ii.DNAJ
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S，iii.DNAJ
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S，iv.S
‑
X
‑
DNAJ，v.S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
DNAJ，vi.S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
DNAJ，vii.S
‑
X
‑
DNAJ
‑
X
‑
S，
viii.S
‑
X
‑
DNAJ
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S，ix.S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
DNAJ
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S，x.S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
DNAJ
‑
X
‑
S，xi.S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
DNAJ
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S，xii.S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
DNAJ
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S，xiii.DnaJ
‑
X
‑
DnaJ
‑
X
‑
S
‑
X
‑
S，xiv.S
‑
X
‑
DnaJ
‑
X
‑
DnaJ，和xv.S
‑
X
‑
S
‑
X
‑
DnaJ
‑
X
‑
DnaJ，其中，S是α
‑
突触核蛋白结合结构域，DNAJ是J蛋白的J结构域，和X是任选的接头。22.权利要求1
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21中任何一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:5的J结构域序列和SEQ ID NO:51的α
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突触核蛋白结合结构域序列。23.权利要求1
‑
22中任何一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:5的J结构域序列和SEQ ID NO:51的α
‑
突触核蛋白结合结构域序列的两个拷贝。24.权利要求1
‑
23中任何一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含选自SEQ ID NO:88、90
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96、98
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100的序列。25.权利要求1
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24中任何一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:88的序列。26.权利要求1
‑
24中任何一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:90的序列。27.权利要求1
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24中任何一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白包...

【专利技术属性】
技术研发人员：菱谷彰德，圭三古屋，
申请(专利权)人：索拉生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：