一种检测AChR阻断型抗体的试剂盒、检测方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种检测AChR阻断型抗体的试剂盒、检测方法与应用，属于医学检测技术领域，本发明专利技术提供了可代替α

【技术实现步骤摘要】
一种检测AChR阻断型抗体的试剂盒、检测方法与应用
[0001]本申请是申请日为2022年10月19日、申请号为202211280761.8、专利技术名称为《一种检测AChR阻断型抗体的试剂盒、检测方法与应用》的分案申请。


[0002]本专利技术属于医学检测
，尤其涉及一种检测AChR阻断型抗体的试剂盒、检测方法与应用。

技术介绍

[0003]重症肌无力(Myasthenia Gravis，MG)是一种由自身抗体介导的获得性神经－肌肉传递障碍的自身免疫性疾病，临床主要表现为部分或全身骨骼肌无力、易疲劳，活动后症状加重，经休息后症状减轻。乙酰胆碱受体(AChR)抗体是MG最主要的致病性抗体，根据以往文献报道，AChR抗体根据其不同的效应机制可以分为三种类型：结合型(binding)、阻断型(blocking)和调节型(modulating)。AChRbinding抗体可与受体结合的同时激活补体系统，在神经肌肉接头处(NMJ)的突触后膜形成膜攻击复合物，导致严重的终板膜损伤，从而引起受体和受体相关蛋白结构破坏；modulating抗体的交联作用，可以使结合的受体发生内化并使其加速降解，导致AChR表达缺失；blocking抗体可以直接结合在受体上的乙酰胆碱结合位点，从而阻断受体与乙酰胆碱的结合，引起乙酰胆碱结合位点的功能性阻断，导致肌肉收缩不良。
[0004]在MG患者中，约50％～60％的眼肌型MG、85％～90％的全身型MG血清中可检测到AChR抗体，有研究称AChRbinding和blocking抗体双阳，基本出现于全身型MG，且抗体双阳的患者预后更差，胸腺瘤风险增大。然而在眼肌型和轻度全身型MG患者中发现的更多的是仅blocking或binding抗体单阳，此外，仅有blocking抗体的患者均出现于眼肌型，所以检测blocking AChR抗体在辅助诊断眼肌型和全身型MG、尤其是binding AChR抗体阴性的患者中具有重要的实用价值。而MG患者中儿童及青少年高达50％，且以眼肌型为主，很少向全身型转化，总体来说眼肌型MG患病率较高，因此检测AChR阻断型抗体对MG患者的诊断和预后具有重要的意义。
[0005]α
‑
银环蛇毒素(alpha
‑
bungarotoxin，α
‑
BGT)是从银环蛇毒液中提取的一种肽类，由于α
‑
BGT可高度选择性地与AchR的α
‑
亚单位结合，因此广泛应用于AchR抗体的检测。目前，AChR阻断型抗体血清学检测应用最广泛的检测方法是放射免疫沉淀法(radioimmunoprecipitation，RIPA)，即先使样本中的AChR阻断型抗体与AChR结合，再加入125I放射标记的α
‑
银环蛇毒素(125I
‑
α
‑
bungarotoxin，125I
‑
α
‑
BGT)与受体上的剩余结合位点结合，受体随Sepharose
‑
ConA沉淀，离心后，沉淀中含有125I
‑
α
‑
BGT，通过测定沉淀的放射性得到125I
‑
α
‑
BGT的含量，与原始样本中AChR
‑
blocking抗体的浓度成反比。
[0006]但现有技术仍存在以下缺陷和不足：
[0007]1)α
‑
BGT是一种毒素，具有一定毒性，且不易获得；
[0008]2)RIPA检测AChR阻断型抗体时不仅要用到α
‑
BGT，还需要用放射性同位素125I标
记，放射性碘的制造和处理都是昂贵的，对环境的影响更大，对实验人员也具有一定的危害性，不仅如此还需对接触放射性物质的实验室人员进行相关的培训以及安全监测；
[0009]3)RIPA检测AChR阻断型抗体，要先使样本中的AChR阻断型抗体与AChR结合，这个过程约2h，有的甚至更长需要过夜，之后再加入125I
‑
α
‑
BGT与AChR上的剩余结合位点结合，整个实验过程比较耗时。

技术实现思路

[0010]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种检测AChR阻断型抗体的试剂盒、检测方法与应用，利用顺苯磺阿曲库铵检测AChR阻断型抗体的安全性更高，且上述化合物成本更低、容易得到。
[0011]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0012]本专利技术提供了一种化合物在制备检测AChR阻断型抗体试剂中的应用，所述化合物包括顺苯磺阿曲库铵。
[0013]优选的，所述顺苯磺阿曲库铵溶液的浓度为0.05mg/mL～50mg/mL。
[0014]本专利技术提供了一种检测AChR阻断型抗体的试剂盒，所述试剂盒包括工作液、阻断试剂、AChR细胞爬片和pcDNA3.1细胞爬片，所述阻断试剂为上述的化合物溶液。
[0015]优选的，所述工作液为PBST或PBS，更优选为PBST。
[0016]所述阻断试剂为上述化合物溶液，所述化合物溶液(如氯化乙酰胆碱溶液、溴化乙酰胆碱溶液、卡巴胆碱溶液或顺苯磺阿曲库铵溶液等)由工作液配得。
[0017]优选的，所述试剂盒还包括洗涤液，所述洗涤液为磷酸盐缓冲液。
[0018]本专利技术提供了一种基于CBA法检测AChR阻断型抗体的方法，包括以下步骤：
[0019]将上述的工作液稀释的血清作为未阻断组一抗，将上述的阻断试剂稀释的血清作为阻断组一抗，分别与加样区的细胞爬片反应，洗涤后，再将荧光标记的二抗与处理的细胞爬片孵育，通过对比阻断组与未阻断组荧光信号的变化情况判断血清中的AChR抗体是否为阻断型。
[0020]优选的，所述反应的时间为2～3h。
[0021]相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
[0022](1)本专利技术提供了可代替α
‑
BGT检测AChR阻断型抗体的化合物，所述化合物与α
‑
BGT相比，没有毒性，且价格便宜，容易得到，高温处理后仍然可以检出AChR阻断型抗体；
[0023](2)本专利技术还提供了检测AChR阻断型抗体方法，本专利技术所述的化合物无需放射性碘或其它物质标记，减少成本的同时，也避免了放射性物质对环境的影响以及对实验人员的危害，绿色环保；
[0024](3)本专利技术提供了检测AChR阻断型抗体方法，本专利技术所述的化合物可以与血清样本同时孵育，缩短了检测时间，提高了检测效率。
附图说明
[0025]图1为贴有AChR细胞爬片和pcDNA3.1细胞爬片的载玻片；
[0026]图2为表2中的阻断试剂对5号血清的阻断结果；
[0027]图3为表2中的阻断试剂对8号血清的阻断结果；
[0028]图4为表2中的阻断试剂对19号血清的阻断结果；
[0029]图5为表2中的阻断试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化合物在制备检测AChR阻断型抗体试剂中的应用，其特征在于，所述化合物包括顺苯磺阿曲库铵。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述顺苯磺阿曲库铵溶液的浓度为0.05mg/mL～50mg/mL。3.一种检测AChR阻断型抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括工作液、阻断试剂、AChR细胞爬片和pcDNA3.1细胞爬片，所述阻断试剂为权利要求1或2所述的化合物溶液。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述工作液为PBST或PBS。5.根据权利要求3所述的试...

【专利技术属性】
技术研发人员：李科，闫亚平，赵子越，郝文斌，黄秀丽，
申请(专利权)人：陕西脉元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：