一种用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒及其应用，目前已有的诊断都效果不理想，可重复性差，诊断准确性和诊断速度都不高的技术问题，正是为解决目前的技术问题，本发明专利技术提供了一种用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒及其应用，利用血液样本作为诊断材料，可以通过试剂盒检测病人血清中LAMP‑2和LAMP‑2抗体含量，来对血管炎性高血压进行诊断，其检测方法简便、周期短、特异性好、灵敏度高等优点，诊断准确性达到了100%，在血管炎性高血压的诊断及治疗领域具有广泛的适用性。

A test kit for the diagnosis of angioinflammatory hypertension and its application

【技术实现步骤摘要】
一种用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒及其应用
本专利技术涉及医疗
，具体说，本专利技术具体涉及一种医疗试剂盒的

技术介绍
系统性血管炎(Systemicvasculitis，SV)是一组以累及不同类型血管及伴多个器官系统受损为主要特征的自身免疫疾病，常引起肾性高血压，甚至为恶性高血压，不及时治疗，致残率、致死率很高。有研究表明：系统性血管炎是恶性高血压最常见的病因之一。随着近年研究的不断深入，由于SV的临床表现较为多样化且缺乏特异性生物标记物，血管炎性高血压疾病临床的诊断及评估具有极大的挑战性。临床急需寻找血管炎性高血压疾病的血清学指标用于诊断及病情活动评估，以便于早期诊断，早期治疗，改善预后。人溶酶体相关膜蛋白2(hLAMP-2)是一种糖基化的1型糖蛋白，表达于中性粒细胞、内皮细胞等不同细胞溶酶体膜上，hLAMP-2免疫表位与大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的黏附蛋白-Ⅰ型菌毛蛋白H(FimH)有高度一致性。1995年，Kain等在AAV(血管炎)患者血清中首先鉴定出抗hLAMP-2抗体的存在，AAV肾损害是较常见的继发性肾脏疾病，预后较差，病情容易反复，发病机制目前并不明确，近年来抗LAMP-2抗体在AAV中发现是研究的重大进展。当前存在AAV患者血清中的抗hLAMP-2抗体绝对阳性率及其与疾病活动性的关系尚存在争议，多因检测方法及入选病例偏差造成的，尽管现有技术对于LAMP-2和LAMP-2抗体应用到系统性血管炎单独都一些的披露，但是，根据公众所知常识，两个单体具有某种属性，不见得两者连用就必然具有这种属性，甚至现有技术常见的两者连用不具有或者更有甚者具有相反的作用，如何探讨将LAMP-2和LAMP-2联合抗体联用应用到系统性血管炎中诊断具有重要的现实意义。
技术实现思路
针对现有技术中将LAMP-2及LAMP-2单独抗体应用到系统性血管炎的诊断中鲜有报道，且已有的诊断都效果不理想，可重复性差，诊断准确性和诊断速度都不高的技术问题，本专利技术提供了一种用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒及其应用，利用血液样本作为诊断材料，可以通过试剂盒检测病人血清中LAMP-2和LAMP-2抗体含量，来对血管炎性高血压进行诊断，其检测方法简便、周期短、特异性好、灵敏度高等优点，诊断准确性达到了100％，在血管炎性高血压的诊断及治疗领域具有广泛的适用性。本专利技术提供了一种用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒，所述用于诊断血管炎性高血压的蛋白包括LAMP-2和LAMP-2联合抗体，所述的检测试剂盒包含检测血清中LAMP-2和LAMP-2抗体的含量的试剂，具体含有LAMP-2标准品、LAMP-2抗体标准品、标准品稀释液、PBS、检测溶液A、检测溶液B、TMB底物溶液、洗涤液、终止溶液、96孔板。本专利技术中，所述的LAMP-2和LAMP-2联合抗体从血清中检测。同时，本专利技术提供一种用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：(1)加样：分别设标准品稀释孔、待测样品孔、空白孔，标准品稀释孔设7孔，依次加入100μL的稀释后标准品，空白孔加入100μL标准品稀释液，待测样品孔加入100μL稀释血清样本，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时后，弃去液体，甩干，不洗涤；(2)在步骤(1)制备的酶标板孔中，分别加入100μL检测溶液A工作液，酶标板覆膜，37℃温育1小时后，弃去孔内液体，重复洗板3次；(3)在步骤(2)制备的酶标板孔中，每孔加100μL检测溶液B工作液，酶标板覆膜，37℃温育30分钟后，弃去孔内液体，甩干，重复洗板5次；(4)在步骤(3)制备的酶标板孔中，每孔加TMB底物溶液90μL，酶标板覆膜，37℃避光显色；(5)在步骤(4)制备的酶标板孔中，每孔加终止溶液50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色，如出现颜色不匀一，请轻轻晃动酶标板以使溶液混合均匀；(6)在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后，立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度值，通过标准曲线计算样品中LAMP-2和LAMP-2抗体浓度。本专利技术，所述标准品为LAMP-2标准品和LAMP-2抗体标准品。本专利技术，所述标准品稀释液为含有BSA的PBS溶液，pH＝7.2-7.4。本专利技术，所述稀释后标准品，通过添加标准品稀释液依次倍比稀释成4000pg/mL、2000pg/mL、1000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL、125pg/mL、62.5pg/mL。本专利技术，所述血清样本，采用5ml促凝管采集外周静脉血，经4℃离心机3000g/min离心15min后，收集血清，分装冻存，-80℃冰箱备用。本专利技术，所述稀释血清样本，向血清样本中加入PBS，配成500倍稀释的血清。本专利技术，所述检测溶液A为检测抗体。本专利技术，所述检测溶液B为IgG-HRP酶标抗体。本专利技术，所述检测溶液A和检测溶液B临用前配制，在使用前短暂离心处理，以使黏附在管壁或瓶盖的液体沉积到管底。本专利技术，所述检测溶液A工作液，对检测溶液A稀释200倍，充分混匀。本专利技术，所述检测溶液B工作液，对检测溶液B稀释200倍，充分混匀。本专利技术，所述洗涤液为含Tween-20的PBS溶液，PH＝7.2-7.4。本专利技术，所述稀释后的洗涤液，580mL蒸馏水或去离子水加入20mL洗涤液至600mL，进行30倍稀释。本专利技术，所述洗板，每孔用350μL的稀释后的洗涤液浸泡1-2分钟，弃去，洗涤后将酶标板放在吸水纸上轻拍，来移除孔内所有液体，此过程也可采用喷射瓶，多道移液器或自动洗板机来完成。本专利技术，所述避光显色，反应时间控制在10-20分钟，不要超过30分钟。当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止。本专利技术中，所述的试剂盒通过检测血清中LAMP-2和LAMP-2抗体的含量用于诊断血管炎性高血压中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒，可以通过检测病人血清中LAMP-2和LAMP-2抗体含量，来对血管炎性高血压进行诊断。其检测方法简便、周期短、特异性好、灵敏度高等优点。经检测血清中LAMP-2和LAMP-2抗体含量，LAMP-2的最佳截止值为0.56ug/mL，敏感性和特异性分别为54.3％和87.5％，抗LAMP-2抗体的最佳截止值为109.80ng/mL，敏感性和特异性分别为74.3％和62.5％，而且试验52例患者中无一例误诊或者漏诊，诊断准确性达到了100％，在血管炎性高血压的诊断及治疗领域具有广泛的适用性。附图说明图1所示为SV、EH和HC三组间血清中LAMP-2水平比较图。图2所示为活动期和非活动期组中血清LAMP-2水平比较图。图3所示为SV肾损伤和非肾损伤组中血清LAMP-2水平比较图。图4所示为血清中LAMP-2与BVAS、Hs-CRP、Scr和24小时蛋白尿的相关性分析图，其中，A表示血清中LAMP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒，其特征在于，所述包括LAMP-2标准品、LAMP-2抗体标准品、标准品稀释液、PBS、检测溶液A、检测溶液B、TMB底物溶液、洗涤液、终止溶液、96孔板，用于诊断血管炎性高血压的蛋白包括LAMP-2和LAMP-2抗体，所述LAMP-2和LAMP-2抗体从血清中检测。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒，其特征在于，所述包括LAMP-2标准品、LAMP-2抗体标准品、标准品稀释液、PBS、检测溶液A、检测溶液B、TMB底物溶液、洗涤液、终止溶液、96孔板，用于诊断血管炎性高血压的蛋白包括LAMP-2和LAMP-2抗体，所述LAMP-2和LAMP-2抗体从血清中检测。


2.如权利要求1所述的用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒通过检测血清中LAMP-2和LAMP-2抗体的含量诊断血管炎性高血压。


3.如权利要求1所述的用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包含检测血清中LAMP-2和LAMP-2抗体的含量的试剂。


4.如权利要求1至3任意一项所述的用于诊断血管炎性高血压的检测试剂盒的检测方法，其特征在于，具体检测方法包括如下步骤：
（1）加样：分别设标准品稀释孔、待测样品孔、空白孔，标准品稀释孔设7孔，依次加入100μL的稀释后标准品，空白孔加入100μL标准品稀释液，待测样品孔加入100μL稀释血清样本，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时后，弃去液体，甩干，不洗涤；
（2）在步骤（1）制备的酶标板孔中，分别加入100μL检测溶液A工作液，酶标板覆膜，37℃温育1小时后，弃去孔内液体，重复洗板3次；
（3）在步骤（2）制备的酶标板孔中，每孔加100μL检测溶液B工作液，酶标板覆膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：李南方，朱晴，周克明，张玮玮，古丽努尔·堆依木汗，洪静，张德莲，姚晓光，王国亮，岳娜，
申请(专利权)人：新疆维吾尔自治区人民医院，
类型：发明
国别省市：新疆;65