本发明专利技术公开了一个与原发性高血压易感性相关的单核苷酸位点，并公开了一种检测原发性高血压相关基因-线粒体融合基因2（Mfn2）/增殖抑制基因（HSG）单核苷酸多态性的方法，它包括检测个体的线粒体融合基因2（Mfn2）/增殖抑制基因（HSG）5’端非编码区-945bp至-946bp之间碱基的基因型。本发明专利技术还公开了相应的检测试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学和医学领域。更具体地说，涉及人线粒体融合基因2（Mitofusin 2,Mfn2 gene）的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点5’端非编码区-945bp至-946bp之间序列的检测。本专利技术还涉及检测这个SNP位点的试剂盒。
技术介绍
原发性高血压（essential hypertension, EH）是一种常见而多发的、由环境与遗传因素共同致病的多因素、多基因疾，对人类健康造成了极大的影响。随着分子医学的发展，目前已经发现的高血压相关基因已经有150余种，但是EH的发病机制仍然不完全清楚，高血压的早期诊断和预防问题仍然未能完全解决。EH是遗传因子和环境共同作用的结果，血压的变化30%-60%归因于遗传。对遗传危险因素的认识不足在一定程度上严重影响着对高血压发病、诊断和治疗。因此对高血压遗传学的研究十分必要（王佐广，温绍君，吴兆苏.高血压、易感基因与单核苷酸多态性[J].高血压杂志，2001，9：259-264）。近二十余年来，有关高血压治疗的研究更多地集中在对血压的控制和对靶器官的保护，并已取得突飞猛进的发展。但是，这些手段并不能从根本上控制血压，目前对人类内源性抗高血压基因的研究还很少。因此，研究内源性抗高血压机制是今后高血压防治研究的主要方向之一，具有重要的研究价值和应用前景，如果通过调节内源性抗高血压机制治疗高血压病，将会促进我国生物医疗技术的发展，并为我国每年节省巨大的医疗费用。目前所发现的高血压相关基因，归结起来可以概括为促高血压基因和抗高血压基因,Mfn2属于后者。Mfn2的前身是我国学者陈光慧等[Chen GH, Zhang CH, Zhu YQ, et al. Expression of a novel gene related to hypertension[J]. Natl Med J China, 1997, 77: 823-828.]于1997年对培养的自发性高血压大鼠（SHR）和正常Wistar Kyoto（WKY）大鼠的血管平滑肌细胞进行差异显示，克隆出一个新基因—增殖抑制基因（hyperplasia suppressor gene,HSG）。它包含有4160bp的碱基对，共编码661个氨基酸（NM_014874, GeneBank Access U41803）。后经一系列体内、体外实验发现[Chen KH, Guo XM, Dalong Ma, et al. Dysregulation of HSG triggers vascular proliferative disorders[J]. Nature Cell Biol, 2004, 6, 872-883.]，HSG可以明显地抑制Ras-Raf蛋白-丝裂素活化蛋白激酶基因表达，并且可以激活抗癌基因的表达，有效地阻遏细胞周期和抑制多种细胞的增殖，且这种抑制作用是通过细胞凋亡的方式实现的。因此HSG基因是原发性高血压的候选基因之一，后经基因功能研究表明，HSG基因参与线粒体融合,因此正式命名为线粒体融合基因2(mitofusin 2, Mfn2)。 由于Mfn2基因在原发性高血压患者和自发性高血压大鼠血管和白细胞中主要的特点是出现表达下降，这应该是其表达调控出现了异常，但是目前对Mfn2基因转录调控方面的研究较少。5’端非编码区是处于基因转录起始位点上游，2000bp以内是启动子和主要转录因子存在部位，5’端非编码区-945bp至-946bp（从起始密码子的“A”起向上第945bp至946bp之间的位置，在SEQ ID NO: 1中为第29与30位核苷酸之间）CA插入变异正好处于这个位置。而且我们在进行序列的生物信息学分析时发现该位点位于Mfn2基因5’端非编码区转录起点2000bp内，且该变异位点正好位于一个启动子内，且处于相对保守的区域。另外，该变异位点是一个非常重要的转录调控因子-cap的结合部位，从基因转录调控角度而言，具有非常重要的价值，因而可能具有非常重要的意义。综上所述，为了最终实现根治原发性高血压，本领域迫切需要深入研究原发性高血压的发病机制，寻找原发性高血压易感基因，筛选出具有高风险的原发性高血压患者，开发检测原发性高血压易感基因的方法、试剂盒，以及相关的治疗药物等。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测高血压易感基因Mfn2多态性位点的方法及检测试剂盒。本专利技术提供了一种可以通过高血压易感性基因的检测预测高血压发病风险的方法，即检测Mfn2基因5’端非编码区-945bp至-946bp之间位点的基因型。5’端非编码区-945bp至-946bp之间有CA碱基插入的基因型的个体其高血压的发病风险远高于普通人群。所述的5’端非编码区-945bp至-946bp之间位点，位于Mfn2的5’端非编码区中（1p36.22：NC_000001.10位置11979236至11979237 -/CA）。其中，脱氧核糖核酸（DNA）序列编号：5’端非编码区-945bp至-946bp之间的位置基于SEQ ID NO：1；引物1基于SEQ ID NO：2；引物2基于SEQ ID NO：3；扩增产物基于SEQ ID NO：4。具体而言，该方法包括步骤：（a）抽提样品的基因组DNA，扩增获得 Mfn2基因5’端非编码区；（b）通过特异性的引物扩增获得 Mfn2基因包含5’端非编码区-945bp至-946bp之间的位点的区域，扩增产物为SEQ ID NO：4；（c）检测步骤（b）产物中单核苷酸多态性位点5’端非编码区-945bp至-946bp之间的基因型。所述的扩增Mfn2基因5’端非编码区的引物序列如SEQ ID NO 2 和SEQ ID NO 3所示。上述方法中涉及的测序、扩增、抽提基因组DNA等技术均可采用本领域的常规操作方法。本专利技术提供了一种检测高血压易感基因的试剂盒，它含有可以包括特异性扩增 Mfn2基因5’端非编码区中包含5’端非编码区-945bp至-946bp之间碱基的区域的引物。在本专利技术的一个实施例中，与特异性扩增 Mfn2基因5’端非编码区中包含5’端非编码区-945bp至-946bp之间的位点的区域，引物的序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。 本专利技术经研究显示，首次证明了Mfn2基因单核苷酸多态性位点5’端非编码区-945bp至-946bp之间（位于Mfn2 5’端非编码区中，1p36.22：NC_000001.10位置11979236至11979237 -/CA）与高血压密切相关，而且发现了它的新功能：Mfn2基因单核苷酸多态性位点5’端非编码区-945bp至-946bp之间的变异碱基位于Mfn2，5’端非编码区中（1p36.22：NC_000001.10位置11979236至11979237 -/CA）基因型的改变将导致高血压的发病风险升高。其中关联研究结果显示，在Mfn2基因5’端非编码区-945bp至-946bp之间的CA碱基插本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种与原发性高血压密切相关的DNA片段，其特征在于所述DNA片段包含如SEQ ID NO. 1所示的序列。
【技术特征摘要】
1.一种与原发性高血压密切相关的DNA片段，其特征在于所述DNA片段包含如SEQ ID NO. 1所示的序列。
2.线粒体融合基因2（ Mfn2）5’端非编码区-945bp至-946bp位点多态性在制备检测高血压易感性的试剂中的用途。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于所述Mfn2基因5’端非编码区-945bp至-946bp位点位于1p36.22：NC_000001.10位置11979236至11979237 -/CA。
4.如权利要求2或3所述的用途，其特征在于所述Mfn2基因5’端非编码区-945bp至-946bp位点的CA插入突变增加原发性高血压的患病风险。
5.一种用于检测高血压易感性的试剂盒，其特征在于所述试剂盒中包括能够特异性扩增Mfn2基因包含5’端非编码区-945bp至-946bp位点的区域的引物。
6.如权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：王佐广，彭晓云，刘雅，马晓海，曾容，魏永祥，张蓓，李闯，李梅，商建峰，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京安贞医院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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