常见恶性肿瘤易感基因检测芯片制造技术

本发明专利技术公开了常见恶性肿瘤易感基因检测芯片，包括步骤：1）提取受检者样本DNA；2）对样本DNA进行目的基因的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记；3）荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测目的基因的SNP位点；4）根据步骤3）得到的基因分型结果，分析受检者对乳腺癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、胰腺癌、膀胱癌、肝癌、白血病、食管癌、结直肠癌的易感性。通过相关基因分型，可以对受检者进行常见恶性肿瘤的易感性评估，从而制订最科学的个性化保健计划，以避免、延缓甚或避免恶性肿瘤的发生。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了常见恶性肿瘤易感基因检测芯片，包括步骤：1）提取受检者样本DNA；2）对样本DNA进行目的基因的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记；3）荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测目的基因的SNP位点；4）根据步骤3）得到的基因分型结果，分析受检者对乳腺癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、胰腺癌、膀胱癌、肝癌、白血病、食管癌、结直肠癌的易感性。通过相关基因分型，可以对受检者进行常见恶性肿瘤的易感性评估，从而制订最科学的个性化保健计划，以避免、延缓甚或避免恶性肿瘤的发生。【专利说明】常见恶性肿瘤易感基因检测芯片
本专利技术涉及一常 见恶性肿瘤易感基因检测芯片，特别是涉及一种恶性肿瘤易感性测评及套组方法。
技术介绍
2008年，全球有1270万人患癌，死亡人数高达760万。世界范围内因恶性肿瘤死亡的人数，比艾滋病、疟疾和结核病加起来还要多。如果不采取有效措施，预计到2030年，每年将出现2600万新增恶性肿瘤病例，恶性肿瘤死亡人数将达到1700万，中低收入国家将成为恶性肿瘤肆虐的“重灾区”。近几年肿瘤的发病率和死亡率居高不下，就我国而言，恶性肿瘤已成为居民的第二位死因，城市居民的首位死因。在全球范围内，我国的恶性肿瘤发病率与美国、英国、法国接近，高于多数亚洲国家。肺癌、肝癌、结直肠癌、乳腺癌、膀胱癌死亡率及其构成呈明显上升趋势，其中肺癌和乳腺癌上升幅度最大，肺癌已代替肝癌成为我国首位恶性肿瘤死亡原因(占全部恶性肿瘤死亡的22.7%)。已经掌握了关于恶性肿瘤病因及预防和管理恶性肿瘤的干预措施的大量知识。通过实施以证据为基础的恶性肿瘤预防、早期发现和恶性肿瘤患者管理战略，可使恶性肿瘤得以减少和控制。烟草使用、饮酒、不健康的饮食以及缺乏运动是全世界恶性肿瘤的主要危险因素。同时遗传因素也是恶性肿瘤一个重要危险因素。因外部环境我们可以掌控，而内部因素一遗传因素(易感基因)我们是无法掌控。因此要从根本上预防恶性肿瘤的发生、延缓恶性肿瘤的发展和制订合理的疾病治疗措施，就必须检测这些疾病的易感基因。基因检测的积极意义体现在癌症发生之前就可以发现潜在的风险，从而提起人们对自身健康与疾病的关注，进而通过“个性化健康管理”指导受检者采取有效的方法预防。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供常见恶性肿瘤易感基因检测芯片，通过对这些基因中的关键性基因遗传位点进行检测，判断具体基因型，能够评估个体患上恶性肿瘤的风险几率，从而对加强恶性肿瘤防治起到积极作用。为解决上述技术问题，本专利技术的常见恶性肿瘤易感基因检测芯片，包括步骤:1)提取受检者样本DNA ；2)对样本DNA进行遗传变异的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记，所述遗传变异包括:rs505922、rs2294008、rs2279744、rs738409、rs2274223、rs667282、rs6983267 和rs223114203)荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测遗传变异，所述遗传变异包括:rs505922、 rs2294008、 rs2279744、 rs738409、 rs2274223、 rs667282、 rs6983267 和rs223114204)根据步骤3)得到的基因分型结果，分析受检者肿瘤个性化治疗的疗效。所述步骤2)中的rs505922的引物是SEQ ID NO:1~2所示序列的引物、rs2294008的引物是SEQ ID N0:3~4所示序列的引物、rs2279744的引物是SEQ ID N0:5~6所示序列的引物、rs738409的引物是SEQ ID N0:7~8所示序列的引物、rs2274223的引物是SEQ ID N0:9~10所示序列的引物、rs667282的引物是SEQ ID NO: 11~12所示序列的引物、rs6983267的引物是SEQ ID NO: 13~14所示序列的引物、rs2231142的引物是SEQ IDNO: 15~16所示序列的引物。所述步骤2)中的片段化是将纯化的PCR产物经测定浓度后，用DNase I进行片段化；所述荧光素标记是将片段化PCR产物利用脱氧核苷酸转移酶在3’末端进行荧光素标记。所述步骤3)基因芯片的制备是将预先设计并合成好的探针通过接触式点样或喷墨式点样点载到玻片或硅片材质的固相载体片基上，其中，探针是SEQ ID N0:17~SEQ IDNO: 32所示序列的DNA探针。本专利技术中的基因和SNP位点的理论依据:rs505922与人体的ABO血型相关，而人体ABO血型与胰腺癌相关。rs2294008是PTSA基因上的多态性位点，PTSA是前列腺癌标志性基因。今年来的研究发现这个基因也与其它多种肿瘤的发生相关。rs2279744是MDM2基因上的一个多态性位点。MDM2是P53抑癌基因调控网络中一员，其功能异常几乎与所有癌症发生发展相关。rs738409是PNPLA3基因上的一个多态性位点。PNPLA3功能异常与肝硬化和肝癌相关。rs2274223是PLCEl基因上的一个多态位点。PLCEl可以调节细胞生长，分化，凋亡和血管发生，其功能异常与多种肿瘤相关。rs667282与吸烟成瘾相关，而吸烟是肺癌最主要的危险因素。rs6983267位于MYC增强子中，影响其表达。MYC是癌基因，与很多肿瘤的发生发展相关。rs2231142是ABCG2基因上的一个多态位点。ABCG2与癌症耐药相关，但近年来研究发现，该基因也参与肿瘤形成。本专利技术的有益效果:通过相关基因分型，可以对受检者乳腺癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、胰腺癌、膀胱癌、肝癌、白血病、食管癌、结直肠癌等常见恶性肿瘤的易感性进行预估，从而制订最科学个体化保健养生方案，以避免、延缓甚或避免恶性肿瘤的发生。【专利附图】【附图说明】下面结合附图与【具体实施方式】对本专利技术作进一步详细的说明:图1是多重PCR扩增后的电泳检测结果图；图2是PCR产物片段化后的电泳检测结果图；图3是检测芯片杂交结果图；【具体实施方式】 实施例1:样本DNA的提取【具体实施方式】实施例1:样本DNA的提取采用FlexiGene DNA Kit (QIAGEN，Cat.N0.51206)试剂盒抽提人外周血中基因组 DNA。具体方法为:向300 μ I血液样本中加入750 μ I Buffer FG1，上下颠倒5次使其混匀。接着在12，000 rpm转速下离心I min。离心后倒掉上层清液,再加入150 μ IBuffer FG2&1.5 μ I蛋白酶溶液，立即振荡，直至沉淀完全溶解。接下来离心:3-5 S，然后65°C水浴5 min。当溶液从红色变为橄榄绿色后，加入150 μ I 100%异丙醇，上下充分颠倒离心管，使其混合，直至DNA析出，呈肉眼可见的线状或块状。然后在12，000 rpm转速下离心3 min。离心后倒掉上层清液，再加入150 μ I 70%乙醇，并振荡5 S。接着重新在12,000 rpm转速下离心3 min，离心后倒掉上层清液，自然风干沉淀，直至所有的液体都蒸发掉。最后向离心管中加入200 μ I Buffer FG3，振荡5 s，然后65°C水浴10 min，使DNA溶解。使用ND-1000核酸浓度分析仪对所抽提的DNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
常见恶性肿瘤易感基因检测芯片，包括步骤：1）提取受检者样本DNA；2）对样本DNA进行遗传变异的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记，所述遗传变异包括：rs505922、rs2294008、rs2279744、rs738409、rs2274223、rs667282、rs6983267和rs2231142；3）荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测目的基因的SNP位点；4）根据步骤3）得到的基因分型结果，分析受检者对抗肿瘤药物的疗效和毒副作用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郜恒骏，张可浩，张新，盛海辉，
申请(专利权)人：泰州医药城博奥邦科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32