精神分裂症易感基因检测方法及易感基因和用途技术

一种检测精神分裂症易感基因的方法，该方法为通过聚合酶链式反应－直接测序法和／或聚合酶链式反应－限制性片断长度多态性分析方法体外检测ＮＲＧ１基因序列，其中有位于ＮＲＧ１基因第二个外显子第１２位的ｒｓ３９２４９９９多态性位点和／或位于第五个内含子的ｒｓ２９５４０４１多态性位点。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及精神分裂症易感基因检测方法，体外检测试验者精神分裂症易感性的方法以及精神分裂症易感基因和用途，具体的说，本专利技术涉及精神分裂症易感基因NRG1基因多态性位点的检测方法，体外检测试验者精神分裂症易感性的方法以及精神分裂症易感基因NRG1基因和用途。
技术介绍
据1999年底，我国卫生部的统计资料显示按伤残所调整的生命年限指标，评价各类疾病在我国疾病社会负担中所占的比例，精神疾患约占疾病总负担的1/5，已超过心血管、呼吸系统及恶性肿瘤等疾患，排名居首位。精神分裂症发病率仅次于抑郁症，占整个精神疾患的第二位。精神分裂症的症状包括思维紊乱、狂想以及情绪与行动改变等。一个世纪以来，人们对精神疾病的生理、生化、影像、药物治疗以及社会家庭、环境等方面的观察，对精神疾病的发病机理作出了各种假说和推断。随着科技的进步，人们越来越认识到基因缺陷是许多严重精神疾病产生的重要原因，人在遇到心理和社会环境压力时，那些携带疾病易感基因的人比不携带疾病易感基因的人更可能罹患精神卫生疾患。遗传因素还基本上得到家系、双生子及寄养子的流行病学调查结果的支持，80年代后期，对精神疾病遗传流行病学的大规模调查，更充分显示了精神疾病的遗传基础。在科技日益发展的今天如何对精神疾患，尤其是精神分裂症，如何从遗传角度检测易感基因以及个体的疾病易感性，以至于进行进一步风险预测和诊断治疗，成为广大科技人员和医疗卫生人员面临的严峻问题。尽管国内外疾病易感基因研究开展多年，但尚未取得突破性进展，鲜有价值的研究结果。对于怎样鉴定遗传易感基因以及鉴定试验者的遗传易感性，本领域一直缺乏全面、系统、有效的识别方法，对于精神分裂症易感性的研究成果更少。最近基因组扫描结果提示，8p22-21是精神分裂症的易感区域之一。neu基因调节剂1基因(Neuregulin 1，NRG1)，基因定位于8p21，genbank登记号GI22048149，全长216361bp，已知在神经发育、分化、营养和突触可塑性调节及学习记忆中占有重要的作用，为一种多功能因子。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供一种检测精神分裂症易感基因的方法，从而，满足了本领域对于正确识别精神分裂症易感基因的需求，为精神分裂症的深入研究和防治，甚至诊断治疗提供了新的思路。本专利技术同时提供了一种体外检测试验者精神分裂症易感性的方法。本专利技术还提供了按照本专利技术的方法制备而成的试剂盒。另一方面，本专利技术进一步提供了一种精神分裂症易感基因。本专利技术提供的体外检测精神分裂症易感基因的方法还可以用于精神分裂症的预防、诊断和治疗。本专利技术提供的体外检测试验者精神分裂症易感性的方法可以用于精神分裂症的患病风险预测、诊断和治疗。本专利技术提供的本专利技术的精神分裂症易感基因可以用于精神分裂症的预防、诊断和治疗。本专利技术通过大样本的统计分析，研究了NRG1基因序列第二个外显子第12位的rs3924999多态性位点和第五个内含子的rs2954041多态性位点在精神分裂症核心家系的等位基因频率，并根据父母基因型在患病子女中的传递情况，进行传递不平衡检验(TDT)和单体型分析。结果发现，全部样本的基因型分布和等位基因频率均符合Hardy-Weinburg平衡；经过Bonferroni法矫正后，两个多态性位点的TDT分析仍然有显著的统计学显著性；单个单体型的分析也显示在患者中AG单体型传递过多，差异有显著型；从而以试验证明了NRG1基因序列的rs3924999多态性位点和/或rs2954041多态性位点影响精神分裂症的易感性，其中NRG1基因序列中rs3924999多态性位点和/或rs2954041多态性位点为精神分裂症易感基因。因此，本专利技术提供了一种检测精神分裂症易感基因的方法，该方法为通过聚合酶链式反应-直接测序法和/或聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性分析方法体外检测NRG1基因序列，其中有位于NRG1基因第二个外显子第12位的rs3924999多态性位点和/或位于第五个内含子的rs2954041多态性位点。所谓“基因多态性”指的是在人群中，各个体基因的核苷酸序列存在的差异。本领域普通技术人员已知，本专利技术所述的多态性位点为单核苷酸多态性(SNP)位点，即基因组序列中单个核苷酸发生改变；核苷酸序列的差异可以体现在DNA水平上或者RNA水平上，所以，可以通过检测DNA、RNA检测多态性，优选DNA，更优选基因组DNA。本领域技术人员已知，可以用多种技术在DNA水平上体外检测NRG1基因序列的多态性位点。可以经与用放射性标记的反义RNA或DNA探针与扩增后的DNA序列杂交，以鉴别点多态性。也可以基于已知的核苷酸顺序的改变，合成正常的和多态性的PCR引物，在聚合酶链式反应(PCR反应)的底物中加入荧光标记的核苷酸，根据反应产物中有无荧光出现，确定在扩增所用的引物中有无碱基变化，从而检测多态性。通过DNA直接测序可以直接揭示对照基因和携带多态性基因之间的序列差异。当与PCR结合使用时，这种方法的灵敏性大大提高。例如，将测序引物和双链PCR产物或者不对称扩增法产生的单链模板分子一起使用。各种DNA及DNA片段的核苷酸序列的测定也可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger等人，PNAS，1977，745463-5467)。此外，核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒或自动测序仪等。常规的自动测序法用放射性标记或荧光标记来确定核酸序列。由于基因多态性，导致限制性内切酶酶切位点改变、消失或产生新的位点，若用某种限制性内切酶酶切基因组DNA，则酶切后产生与正常基因组不同长度的DNA片段，经用适当的探针杂交检测，就可检测这些条带的位置和大小。聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性分析(PCR-RFLP)方法的原理为在设计PCR扩增实验时，引物位于基因多态性部位的两侧，现将目的基因扩增，使其易于检测，由于多态性引起已有的限制性内切酶位点改变，则可先用相应的限制性内切酶酶切扩增产物，再进行琼脂糖凝胶电泳观察，根据产物片断大小或数量与正常对照作出判断。本专利技术优选采用聚合酶链式反应-直接测序法，聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性分析方法。更优选聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性分析方法。在本专利技术的一个实施方式中，利用聚合酶链式反应-限制生片断长度多态性分析方法检测精神分裂症易感基因的方法，所述多态性分析方法包括A提取DNA，在rs3924999多态性位点和/或rs2954041多态性位点附近设计PCR引物，进行PCR反应；B针对上述多态性位点，利用限制性内切酶进行酶切；C凝胶电泳分离与鉴定酶切结果；其中，rs3924999多态性位点和/或rs2954041多态性位点为精神分裂症易感性等位基因。本专利技术所述的检测精神分裂症易感基因的方法，可以进一步包括在多态性分析之后，利用传递不平衡检验分析NRG1基因的等位基因的传递频率和单体型传递频率，具有显著性差异为精神分裂症易感基因。如实施例1所述，本专利技术对246个家系(每例都含有血缘关系的父母双亲和1个患病子/女)中的2个单核苷酸多态性位点进行了单体型频率分析。结果得出，经过Bonferroni法矫正后，两个多态性位点的TDT分析仍然有统计学显著性(rs3924999X2＝9.0905，P＝0.005168；rs29本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张岱，杨建中，
申请(专利权)人：张岱，北京大学精神卫生研究所，
类型：发明
国别省市：