本发明专利技术公开一种检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片，包括固相载体、固定在固相载体上的用于检测2型糖尿病易感基因的特异性寡核苷酸探针，探针的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1～14所示，所述固相载体为硝酸纤维素膜或尼龙膜。本发明专利技术还公开该基因芯片的制作方法，以及包括该基因芯片的试剂盒。本发明专利技术的基因芯片可以快速系统地检测与糖尿病相关的基因突变，易于规模化使用；在利用本发明专利技术基因芯片检测时，操作简单，易于掌握，省时，成本低；本发明专利技术的基因芯片可适应不同层次医院的临床需求，具有很好的应用市场和经济效益。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因芯片检测领域，具体涉及一种快速检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片及其制作方法，以及包括该基因芯片的试剂盒，适用于低成本2型糖尿病易感基因关联分析。
技术介绍
糖尿病是一种由胰岛素分泌缺陷和/或胰岛素作用障碍所致的复杂代谢性疾病， 发病率逐年上升，我国的糖尿病发病人数位居世界第二，其中90%为2型糖尿病(简称 T2DM)，且发病年龄趋向年轻化。持续高血糖所引发的慢性并发症已成为肾功能衰竭、失明和心脑血管疾病的主要原因，给个人、社会和国家医疗保健带来了沉重的负担，成为全球性的社会卫生和经济问题。由于T2DM具有家族性特征，且不同种族间发病率存在明显差异， 另外同卵双生和异卵双生个体发病率和病情也不同，因此遗传成分在该病的发病中起重要作用。因此，通过连锁或关联分析确定糖尿病的易感或致病基因，对于从基因角度阐释糖尿病发病机制有重要意义。传统的糖尿病易感基因检测方法主要包括PCR-RFLP、AS_PCR和DNA测序方法等， 这些方法在基因突变检测中起了重要作用，但普遍存在着明显的不足，诸如检测基因位点有限、耗时长、操作繁琐等，不适用于大批量、系统检测，给糖尿病的临床诊断带来困难。其中，PCR-RFLP方法是经典的生物学方法，但由于限制性内切酶识别位点有限，难以实现同时检测多个位点，且耗时较长；AS-PCR方法虽能准确检测突变，但要求扩增条件非常优化，且引物要有高度的特异性，否则易出现假限性或假阳性结果；DNA测序虽是目前公认的检测新突变的金标准，但由于其对特殊结构DNA序列无法测序，而且只有异质性水平> 25%时才能检出，而临床常用标本外周血白细胞中异质性水平通常都达不到这个标准，因此很易漏检。因此，如何快速、准确地检测糖尿病基因突变是糖尿病临床诊断的主要难题之一。基因芯片是近年来兴起的一项重要生物技术，越来越多地应用于基因多态性分析和诊断。随着基因芯片技术的发展，到2007年用全基因组SNP基因芯片进行糖尿病易感基因筛查的研究迅速增多，Diabetes Gene Discovery Group, Finland-US Investigation of NIDDM Genetics(FUSION)，deCODE Genetics，DiaGen 等研究使用 Illumina 100K 或 Illumina 300KSNP 基因芯片，Diabetes Genetics Initiative, Wellcome Trust Case Control Consortium, Pima, Starr County, Texas, Old Order Amish, Framingham Health Study 等研究使用 Affymetrix 100K 或 Affymetrix 500K 芯片，Japanese multi-disease collaborative genome scan 使用 JSNP Genome Scan 100K SNP 芯片，BioBank Japan 使用定制的SNP芯片。这些研究中或使用昂贵的商品化SNP芯片，或使用数十万个SNP位点，大规模应用其成本过高。目前常用的SNaPshot和kquenom技术则需要购买昂贵的专门设备。因此，应用这些芯片虽然发现了多个2型糖尿病相关易感基因位点，但这些研究成果未能得到大规模关联分析的检验。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片，该基因芯片只需借助常规的实验器具即可进行检测，易规模化应用。基于此，本专利技术的另一个目的在于提供一种前述基因芯片的制作方法以及包括该基因芯片的试剂盒。为实现上述目的，本专利技术的技术方案是一种检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片，包括固相载体、固定在固相载体上的用于检测2型糖尿病易感基因的特异性寡核苷酸探针，探针的核苷酸序列如 SEQ ID No. 1 14所示，所述固相载体为硝酸纤维素膜或尼龙膜。本技术方案通过对2型糖尿病易感基因位点突变进行筛选，设计相关探针，经过反复试验筛选和验证，得到了一组杂交特异性高准确度好的探针，其核苷酸序列如SEQ ID No. 1 14所示，这些探针分为野生型探针和突变型探针，对下述SNP位点INS rs689、JAZFl rs864745、DCD rsll53188、 IGF2BP2 rsl470579、TCF7L2 rs7501939、TSPAN8，LGR5rs7961581 以及 rs9465871(具体如表1所示)。进而，本专利技术采用生物软件Primer Premier 5. 0 (PREMIER Biosoft International,CA)和 NCBI BLAST(http://www. ncbi. nlm. hi. gov/BLAST/)辅助设计和分析所需的引物和探针，使目的片段扩增和杂交反应能在同一条件下进行。本技术方案的基因芯片的固相载体还可以是其他任何不影响核酸杂交，且可稳定连接杂交探针的载体。优选地，所述基因芯片的点阵布控膜芯片为96个样点组成的6行X 16列的矩阵，包括质控系统和检测系统，其中，质控系统为(1)芯片阳性对照，为SEQ ID No. 1 14探针的等量混合的25uM溶液，作为设计布控于左上、右上、右下三个角，作为阳性对照样点，共12个阳性对照样点；(2)芯片平行对照，采用25uM的探针溶液点样，各探针平行点4个点，即每4个点检测一个等位基因型，上下共8个点，共同构成一个基因位点检测区；(3)芯片阴性对照，为5XSSC，共4个阴性对照样点，位于每个基因位点检测区之间。优选地，探针3’端具有15个多聚T，并经氨基基团修饰。本专利技术的一种检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片的制作方法，包括如下步骤1)对硝酸纤维素膜或尼龙膜进行预处理，形成固相载体；2)用芯片点样仪将稀释好的用于检测2型糖尿病易感基因的特异性寡核苷酸探针印点到固相载体上，探针的核苷酸序列如SEQ ID No. 1 14所示。优选地，步骤1)中的预处理为将硝酸纤维素膜或尼龙膜浸入灭菌双蒸水中浸泡 8min 12min，再浸入5 X SSC 24min 34min，而后取出并风干，4°C保存备用。优选地，探针采用如下方式制备合成探针，探针在合成时3’端合成15个多聚T， 并经氨基基团修饰，而后用20XSSC-Buffer作为稀释液稀释至终浓度为15μΜ。优选地，步骤幻具体为采用478Α芯片点样仪将所述用于检测2型糖尿病易感基因的特异性寡核苷酸探针点印于处理好的固相载体上，然后用紫外光照射8min，使之交联固定，4°C保存备用。优选地，探针印点到固相载体后，还包括对固定有探针的固相载体进行洗涤的步骤，具体为室温下含2XSSC-0. 1 % SDS洗涤溶液中振动洗涤5minX2次，含 0. 5XSSC-0. 1% SDS洗涤溶液中振动洗涤15min。本专利技术的一种试剂盒，包括检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片，该基因芯片包括固相载体、固定在固相载体上的用于检测2型糖尿病易感基因的特异性寡核苷酸探针，探针的核苷酸序列如SEQ ID No. 1 14所示，所述固相载体为硝酸纤维素膜或尼龙膜。优本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种检测２型糖尿病易感基因７个位点突变的基因芯片，其特征在于，包括固相载体、固定在固相载体上的用于检测２型糖尿病易感基因的特异性寡核苷酸探针，探针的核苷酸序列如ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～１４所示，所述固相载体为硝酸纤维素膜或尼龙膜。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邓冠华，谢焱，周新，刘松梅，马海波，郑璇，
申请(专利权)人：广州阳普医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：81
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