【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制造双特异性抗体的方法，双特异性抗体和此类抗体的治疗用途序列表本申请包含按ASCII格式以电子方式提交并且特此通过引用以其全文并入的序列表。所述ASCII副本创建于2018年5月30日，名称为PAT057716-WO-PCT_SL.txt并且大小为68,498字节。
本专利技术涉及二价双特异性单克隆抗体(bbmAb)或其变体，以及通过在哺乳动物细胞系中共表达两种不同单克隆抗体的所说的杵臼结构(knob-into-hole)修饰的、FC突变的衍生物来制造此类抗体的方法。
技术介绍
双特异性抗体，即结合两个不同表位的抗体，是本领域众所周知的。产生双特异性抗体的一种方法是所说的杵臼结构(KiH)方法，例如Merchant等人,Nat.Biotechnol.[自然生物技术],16:677-681(1998)描述的，其中通过引入点突变如Y349C、T366S、L368A、Y407V来修饰第一重链IgG以显示臼样结构；并且通过引入点突变S354C、T366W(Merchant等人,Nat.Biotechnol.[...
【技术保护点】
1.一种适合在共同宿主细胞中共表达的双特异性抗体，其中所述抗体包含：/na.第一部分，所述第一部分是免疫球蛋白，所述免疫球蛋白具有λ野生型的第一可变轻链(VL1)和野生型的第一可变重链(VH1)以及带有杂二聚化修饰的第一恒定重链(CH1)，所述VH1特异性结合至第一靶标，以及/nb.第二部分，所述第二部分是免疫球蛋白，所述免疫球蛋白具有κ野生型的第二可变轻链(VL2)和野生型的第二可变重链(VH2)以及带有与所述第一恒定重链的杂二聚化修饰互补的杂二聚化修饰的第二恒定重链(CH2)，所述VH2与不同于所述第一靶标的第二靶标特异性结合，/n其中当所述第一部分和所述第二部分在共同...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170612 US 62/518,0901.一种适合在共同宿主细胞中共表达的双特异性抗体，其中所述抗体包含：
a.第一部分，所述第一部分是免疫球蛋白，所述免疫球蛋白具有λ野生型的第一可变轻链(VL1)和野生型的第一可变重链(VH1)以及带有杂二聚化修饰的第一恒定重链(CH1)，所述VH1特异性结合至第一靶标，以及
b.第二部分，所述第二部分是免疫球蛋白，所述免疫球蛋白具有κ野生型的第二可变轻链(VL2)和野生型的第二可变重链(VH2)以及带有与所述第一恒定重链的杂二聚化修饰互补的杂二聚化修饰的第二恒定重链(CH2)，所述VH2与不同于所述第一靶标的第二靶标特异性结合，
其中当所述第一部分和所述第二部分在共同宿主细胞中共表达时，形成双特异性抗体。
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中所述第一和第二恒定重链是人IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，优选IgD、IgE或IgG，例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，优选IgG1。
3.根据权利要求2所述的双特异性抗体，其中其中所述第一可变轻链是λ1型，并且所述第二可变轻链是κ6型。
4.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其中所述第一和第二恒定重链是IgG1，并且其中
a.所述第一恒定重链具有产生杵结构的点突变，并且所述第二恒定重链具有产生臼结构的点突变，或
b.所述第一恒定重链具有产生臼结构的点突变，并且所述第二恒定重链具有产生杵结构的点突变，并且任选地
c.所述第一和第二恒定重链具有导致二硫键的突变。
5.根据前述权利要求中任一项所述的双特异性抗体，其包含第一免疫球蛋白VH1结构域、第一免疫球蛋白VL1结构域、第二免疫球蛋白VH2结构域和第二免疫球蛋白VL2结构域，其中：
a.所述第一免疫球蛋白VH1结构域包含(例如依次)：
i.高变区CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1具有氨基酸序列SEQIDNO:76，所述CDR2具有氨基酸序列SEQIDNO:77，并且所述CDR3具有氨基酸序列SEQIDNO:78；或
ii.高变区CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1具有氨基酸序列SEQIDNO:79，所述CDR2具有氨基酸序列SEQIDNO:80，并且所述CDR3具有氨基酸序列SEQIDNO:81；和
b.所述第一免疫球蛋白VL1结构域包含(例如依次)：
i.高变区CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1具有氨基酸序列SEQIDNO:92，所述CDR2具有氨基酸序列SEQIDNO:93，并且所述CDR3具有氨基酸序列SEQIDNO:94或
ii.高变区CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1具有氨基酸序列SEQIDNO:95，所述CDR2具有氨基酸序列SEQIDNO:96，并且所述CDR3具有氨基酸序列SEQIDNO:97；和
c.所述第二免疫球蛋白VH2结构域包含(例如依次)：
i.高变区CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1具有氨基酸序列SEQIDNO:44，所述CDR2具有氨基酸序列SEQIDNO:45，并且所述CDR3具有氨基酸序列SEQIDNO:46；或
ii.高变区CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1具有氨基酸序列SEQIDNO:47，所述CDR2具有氨基酸序列SEQIDNO:48，并且所述CDR3具有氨基酸序列SEQIDNO:49；和
d.所述第二免疫球蛋白VL2结构域包含(例如依次)：
i.高变区CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1具有氨基酸序列SEQIDNO:60，所述CDR2具有氨基酸序列SEQIDNO:61，并且所述CDR3具有氨基酸序列SEQIDNO:62或
ii.高变区CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1具有氨基酸序列SEQIDNO:63，所述CDR2具有氨基酸序列SEQIDNO:64，并且所述CDR3具有氨基酸序列SEQIDNO:65。
6.根据前述权利要求中任一项所述的双特异性抗体，其包含第一免疫球蛋白VH1结构域、第一免疫球蛋白VL1结构域、第二免疫球蛋白VH2结构域和第二免疫球蛋白VL2结构域，其中：
a.所述第一免疫球蛋白VH1结构域包含氨基酸序列SEQIDNO:85，
b.所述第一免疫球蛋白VL1结构域包含氨基酸序列SEQIDNO:101，
c.所述第二免疫球蛋白VH2结构域包含氨基酸序列SEQIDNO:53，并且
d.所述第二免疫球蛋白VL2结构域包含氨基酸序列SEQIDNO:69。
7.根据前述权利要求中任一项所述的双特异性抗体，其包含第一免疫球蛋白重链、第一免疫球蛋白轻链、第二免疫球蛋白重链和第二免疫球蛋白轻链，其中：
a.所述第一条免疫球蛋白重链包含氨基酸序列SEQIDNO:87，
b.所述第一免疫球蛋白轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:103，
c.所述第二条免疫球蛋白重链包含氨基酸序列SEQIDNO:55，并且
d.所述第二免疫球蛋白轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:71。
8.一种用于选择根据权利要求1-7中任一项所述的双特异性抗体的方法，所述方法包括：
a.第一步骤：选择所述第一部分和所述第二部分；
b.第二步骤：在共同宿主细胞中共表达所述第一部分和所述第二部分，产生包含所述第一部分和所述第二部分的双特异性抗体；
c.第三步骤：通过从正确匹配的双特异性抗体中去除错配的片段来纯化所述双特异性抗体。
9.根据权利要求8所述的方法，其中第三步骤纯化产生双特异性抗体，所述双特异性抗体是至少60％(质量)、70％(质量)、80％(质量)、85％(质量)纯，例如至少90％(质量)纯、95％(质量)、96％(质量)、97％(质量)、98％(质量)或99％(质量)纯。
10.一种用于通过在共同宿主细胞中共表达来制造根据权利要求1-7中任一项所述的双特异性抗体的方法，所述方法包括
a.第一步骤：产生至少一个编码所述第一部分和所述第二部分的载体；
b.第二步骤：将所述至少一个载体引入所述共同宿主细胞；
c.第三步骤：选择特异性表达所述双特异性抗体的细胞；
d.第四步骤：在细胞表达所述双特异性抗体的条件下培养所选细胞；和
e.第五步骤：纯化所述双特异性抗体，所述双特异性抗体是至少60％(质量)、70％(质量)、80％(质量)、或85％(质量)纯，例如至少90％(质量)纯、95％(质量)、96％(质量)、97％(质量)、98％(质量)或99％(质量)纯。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一步骤包括产生编码所述第一部分的第一载体和编码所述第二部分的第二载体。
12.一种表达系统，所述表达系统包含至少一个载体和选择标志物，所述至少一个载体包含编码根据权利要求1-7中任一项所述的双特异性抗体的第一部分或第二部分的多核苷酸。
13.根据权利要求12所述的表达系统，所述表达系统包含：
a.编码第一选择标志物(smI)的多核苷酸；
b.编码第二选择标志物(smII)的多核苷酸，所述smII不同于所述第一选择标志物(smI)。
14.根据权利要求12或13所述的表达系统，其中所述第一选择标志物(smI)是叶酸转运蛋白或编码突变的叶酸受体的多核苷酸，其中与野生型叶酸受体相比所述突变的叶酸受体具有降低的叶酸结合亲和力...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·O·巴尔多夫，T·布赫，C·格拉夫，D·海特曼，T·约斯多克，HP·科诺普夫，R·科勒，J·科瓦里克，S·J·奥利弗，D·帕特尔，M·沃伊塞特施雷格尔，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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