The invention discloses the use of spoIIIJ protein as anchoring protein in Bacillus surface display system. The invention also provides a surface display system for Bacillus, which includes prokaryotic shuttle expression vector containing fusion gene and host bacteria; the fusion gene is fused by anchoring protein coding gene and foreign target protein coding gene; the anchoring protein is spoIIIJ protein, and the host bacteria are Bacillus. The invention further provides a method for efficiently displaying and expressing foreign target protein genes on the spore surface of Bacillus spp. The surface display system of Bacillus subtilis provided by the invention can efficiently display the target protein with large molecular weight on the spore surface, and can be applied in many fields, including preparation of immobilized enzyme, production of antigen, high throughput screening of polypeptide, biosorption of heavy metals and construction of biosensors.
【技术实现步骤摘要】
spoIIIJ蛋白作为芽孢杆菌表面展示系统中锚定蛋白的用途
本专利技术涉及spoIIIJ蛋白的新用途,尤其涉及spoIIIJ作为芽孢杆菌表面展示系统中锚定蛋白的用途,属于芽胞杆菌表面展示系统构建及应用领域。
技术介绍
枯草芽胞杆菌表面展示技术是将外源目的基因与含有自身启动子的芽胞外套蛋白基因融合,构建融合基因表达载体,然后将这种载体转化到芽孢杆菌宿主菌中,外源目的基因就会在外套蛋白基因启动子的启动下表达,并通过与外套蛋白偶联的作用将外源蛋白展示在菌体的表面。枯草芽孢杆菌表面展示系统作为一种最常见的表面展示系统,其优势包括:(1)外源目的蛋白在表面展示的过程中无需穿膜过程,因此提高了外源目的蛋白的展示效率;(2)可展示分子量较大的外源蛋白;(3)可展示多聚体外源蛋白;(4)芽孢特有的抗逆性增大了可供展示的外源目的蛋白的应用范围。枯草芽孢杆菌表面展示技术可展示大分子量的目的蛋白且目的蛋白无需跨膜,因此应用范围极为广泛,包括:生产抗原,固定化酶、多肽的高通量筛选、重金属的生物吸附以及构建生物传感器等。枯草芽孢杆菌表面展示系统的成功构建取决于三个要素,即:锚定蛋白、目的蛋 ...
【技术保护点】
1.spoIIIJ蛋白作为芽孢杆菌表面展示系统中锚定蛋白的用途。
【技术特征摘要】
1.spoIIIJ蛋白作为芽孢杆菌表面展示系统中锚定蛋白的用途。2.按照权利要求1所述的用途,其特征在于,包括:将spoIIIJ蛋白编码基因与待表达的外源目的蛋白编码基因融合得到融合基因;将该融合基因与原核穿梭载体可操作的连接在一起得到重组质粒;将重组质粒转化芽孢杆菌得到重组菌株;将重组菌株在LB培养基中进行诱导表达,使外源目的蛋白在芽孢杆菌的菌体表面进行展示表达。3.按照权利要求2所述的用途,其特征在于:所述的芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。4.按照权利要求1所述的用途,其特征在于:所述spoIIIJ蛋白的编码基因的核苷酸序列为SEQIDNo.1所示。5.一种芽胞杆菌表面展示系统,包括:含有融合基因的原核穿梭表达载体以及宿主菌;所述的融合基因由锚定蛋白编码基因和外源目的蛋白编码基因连接在一起得到;其中,所述的锚定蛋白是spoIIIJ蛋白,其编码基因的核苷酸序列为SEQIDNo.1所示。6.按照权利要求5所述的芽胞杆菌表面展示系统,其特征在于:所述的融合基因由锚定蛋白编码基因和外源目的蛋白编码基因通过一个连...
【专利技术属性】
技术研发人员:关菲菲,田健,伍宁丰,丁尊丹,余小霞,刘晓青,初晓宇,
申请(专利权)人:中国农业科学院生物技术研究所,
类型:发明
国别省市:北京,11
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