一株生防用解淀粉芽胞杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一株生防用解淀粉芽胞杆菌及其应用。本发明专利技术的解淀粉芽胞杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.12742。本发明专利技术的解淀粉芽胞杆菌可用于制备针对植物病原真菌和病原细菌的生防菌剂和微生物菌肥。本发明专利技术的解淀粉芽胞杆菌对植物病原真菌和病原细菌具有较强的抑菌活性，并且具有较宽的抑菌谱。

Bacillus cereus for biological prevention and its application

The present invention provides a biocontrol Bacillus cereus and its use. The invention of Bacillus amyloliquefaciens No.12742 CGMCC in the preservation number of bacterial Chinese microbe preservation management committee. The invention of Bacillus amyloliquefaciens can be used for preparing against plant pathogenic fungi and pathogenic bacteria biocontrol agent and microbial fertilizer. The Bacillus cereus of the present invention has strong antibacterial activity against plant pathogenic fungi and pathogenic bacteria, and has wide bacteriostasis spectrum.

【技术实现步骤摘要】
一株生防用解淀粉芽胞杆菌及其应用
本专利技术涉及一株生防用解淀粉芽胞杆菌及其应用。
技术介绍
近年来，化学农药的大量使用，造成3R问题(抗药性，农药残留和有害生物再猖獗)突出。特别是随着人们生活水平的提高，对农产品的品质要求越来越高，高毒的化学农药在农业生产中的应用也越来越受到限制。因此人们迫切需要一种绿色，安全，高效的防治植物病虫害的方式，而生物防治将是解决这一问题的重要途径。芽胞杆菌(Bacillussp.)是一种革兰氏阳性细菌。因其在生长过程中可以产生一系列能够抑制真菌和细菌生长的代谢物，又能够产生抗逆性强(如耐热、耐旱、抗紫外线等)的芽胞，成为了理想的生防菌筛选对象。研究表明，目前应用于防治植物病害的芽胞杆菌属细菌主要有解淀粉芽胞杆菌(B.amyloliquefaciens)、枯草芽胞杆菌(B.subtilis)、地衣芽胞杆菌(B.licheniformis)、蜡样芽胞杆菌(B.cereus)和多粘芽胞杆菌(B.polymyxa)等。其中，解淀粉芽胞杆菌是生防菌中研究最多的一类，其特点是在自然界中分布广泛，产生的次生代谢产物种类多，抑菌活性强、抑菌谱广等，在植物病害的田间防治中也得到了应用和重视。另外解淀粉芽孢杆菌还具有诱导植物产生抗性、促进植物生长的功能，生防潜力巨大。生防解淀粉芽孢杆菌资源丰富，但不同株系间的生防能力具有一定差异，需要深入挖掘和充分开发利用。
技术实现思路
本专利技术提供了一株生防用解淀粉芽胞杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)及其应用。本专利技术的解淀粉芽胞杆菌分离于北京市平谷区桃树根围土壤中，命名为X1-b，已于2016年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCCNo.12742。X1-b在NA培养基上培养48h后形成乳白色圆形菌落，不透明，边缘不整齐，菌落上褶皱状突起，内部呈环状凹陷。油镜下观察为杆状细胞，细胞为1.07～1.25μm×2.37～3.09μm。本专利技术的解淀粉芽胞杆菌具有针对植物病原真菌和植物病原细菌的抑菌活性。所述植物病原真菌为芸苔链格孢Alternariabrassicae、细极链格孢Alternariatenuissima、葡萄座腔菌Botryosphaeriadothidea、白腐盾壳霉菌Coniothyriumdiplodiella、大斑凸脐蠕孢Exserohilumturcicum、尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum、腐皮镰刀菌Fusariumsolani、围小丛壳菌Glomerellacingulata、棒形拟盘多毛孢Pestalotiopsisclavispora、瓜果腐霉Pythiumaphanidermatum、意大利青霉Penicilliumitalicum、胶孢炭疽菌Colletotrichumgloeosporioides、藤仓镰刀菌Fusariumfujikuroi、茎点霉属Phomasp.和苹果黑腐皮壳菌Valsamali；所述植物病原细菌为醋酸杆菌Acetobactermalorum、西瓜食酸菌Acidovoraxcitrulli、葡糖杆菌Gluconobacteroxydans、胡萝卜软腐果胶杆菌Pectobacteriumcarotovorum、丁香假单胞杆菌斑生致病变种Pseudomonassyringaepvmaculicola。本专利技术的解淀粉芽胞杆菌可用于制备针对植物病原真菌和植物病原细菌的生防菌剂或微生物菌肥。其中，所述植物病原真菌为芸苔链格孢Alternariabrassicae、细极链格孢Alternariatenuissima、葡萄座腔菌Botryosphaeriadothidea、白腐盾壳霉菌Coniothyriumdiplodiella、大斑凸脐蠕孢Exserohilumturcicum、尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum、腐皮镰刀菌Fusariumsolani、围小丛壳菌Glomerellacingulata、棒形拟盘多毛孢Pestalotiopsisclavispora、瓜果腐霉Pythiumaphanidermatum、意大利青霉Penicilliumitalicum、胶孢炭疽菌Colletotrichumgloeosporioides、藤仓镰刀菌Fusariumfujikuroi、茎点霉属Phomasp.和苹果黑腐皮壳菌Valsamali；所述植物病原细菌为醋酸杆菌Acetobactermalorum、西瓜食酸菌Acidovoraxcitrulli、葡糖杆菌Gluconobacteroxydans、胡萝卜软腐果胶杆菌Pectobacteriumcarotovorum、丁香假单胞杆菌斑生致病变种Pseudomonassyringaepvmaculicola。解淀粉芽胞杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)X1-bCGMCCNo.12742在制备抗生素中的应用也属于本专利技术的保护范围。所述抗生素为合成表面活性素(surfactin)、杆菌霉素(bacillomycin)、丰原素(fengycin)和/或抗霉枯草菌素(mycosubtilin)。本专利技术还提供了针对植物病原真菌和植物病原细菌的生防菌剂微生物菌肥，其中所述生防菌剂的活性成分为本专利技术的解淀粉芽胞杆菌。本专利技术的解淀粉芽胞杆菌具有对植物病原真菌和植物病原细菌的抑菌活性并且具有较宽的抑菌谱。附图说明图1为X1-b的革兰氏染色(图a)和芽胞染色结果(图b)(100倍油镜下观察)。图2为拮抗菌X1-b鞭毛染色。图3X1-b的16SrDNA扩增电泳图；图注：图中M为marker,1分别为X1-b。图4、细菌X1-bgyrB基因扩增电泳图图注：图中M为marker,1分别为X1-b。图5为生防菌液对黄瓜绵腐病的防治效果。图6为生防菌液对柑橘青霉病的防治效果。图7为解淀粉芽胞杆菌X1-b合成的4种抗菌肽基因簇示意图；图注：A：表面活性素；B：杆菌霉素；C：丰原素；D：抗霉枯草菌素。具体实施方式实施例1.拮抗细菌X1-b的分离及鉴定一、菌株X1-b的分离拮抗细菌X1-b菌株分离自北京市平谷区桃树根围土壤，分离方法：土壤溶液梯度稀释法称取0.5g桃树根围土壤溶于50mL的灭菌水中，用灭菌水梯度稀释，最后涂在NA(牛肉膏蛋白胨)培养基上。28℃培养2d(天)。用灭菌牙签挑取上诉培养的菌落，置于放有靶标病原真菌—苹果树皮腐烂病菌(Valsamali)的PDA培养基上。25℃培养3～5d，检查各细菌对病原真菌的抑菌带宽度。结果筛选到苹果树皮腐烂病菌有较强活性的生防菌命名为菌株X1-b。二、菌株X1-b的鉴定1、芽胞杆菌X1-b的形态观察及部分生理生化鉴定1)菌落形态观察将纯化的X1-b菌株划线接种于NA培养基(牛肉膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，琼脂条17g，蒸馏水1000mL，pH＝7.0，121℃高压灭菌15min。)上，28℃培养48h。观察平板菌落特征，包括色泽、平滑或有褶皱、致密或疏松、质地、边缘沟纹等形态。2)革兰氏染色A、染色试剂(1)草酸铵结晶紫染液甲液：结晶紫2.0g，乙醇(95％)20m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株解淀粉芽胞杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽胞杆菌的名称为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)X1‑b，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.12742。

【技术特征摘要】
1.一株解淀粉芽胞杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽胞杆菌的名称为解淀粉芽胞杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)X1-b，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.12742。2.根据权利要求1所述的解淀粉芽胞杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽胞杆菌具有针对植物病原真菌和植物病原细菌的抑菌活性。3.根据权利要求2所述的解淀粉芽胞杆菌，其特征在于，所述植物病原真菌为芸苔链格孢Alternariabrassicae、细极链格孢Alternariatenuissima、葡萄座腔菌Botryosphaeriadothidea、白腐盾壳霉菌Coniothyriumdiplodiella、大斑凸脐蠕孢Exserohilumturcicum、尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum、腐皮镰刀菌Fusariumsolani、围小丛壳菌Glomerellacingulata、棒形拟盘多毛孢Pestalotiopsisclavispora、瓜果腐霉Pythiumaphanidermatum、意大利青霉Penicilliumitalicum、胶孢炭疽菌Colletotrichumgloeosporioides、藤仓镰刀菌Fusariumfujikuroi、茎点霉属Phomasp.和苹果黑腐皮壳菌Valsamali；所述植物病原细菌为醋酸杆菌Acetobactermalorum、西瓜食酸菌Acidovoraxcitrulli、葡糖杆菌Gluconobacteroxydans、胡萝卜软腐果胶杆菌Pectobacteriumcarotovorum、丁香假单胞杆菌斑生致病变种Pseudomonassyringaepvmaculicola。4.解淀粉芽胞杆菌在防治植物病原真菌和植物病原细菌中的应用，其特征在于，所述解淀粉芽胞杆菌的名称为解淀粉芽胞杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)X1-b，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.12742。5.解淀粉芽胞杆菌在制备针对植物病原真菌和植物病原细菌的生防菌剂或微生物菌肥中的应用，其特征在于，所述解淀粉芽胞杆菌的名称为解淀粉芽胞杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)X1-b，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.12742。6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述植物病原真菌为芸苔链格孢Alternariabrassicae、细极链格孢Alternariatenuissima、葡萄座腔菌Botryosphaeriadothidea、白腐盾壳霉菌Coniothyriumdiplodiella、大斑凸脐蠕孢Exserohilumturcicum、尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum、腐皮镰刀菌Fusariums...

【专利技术属性】
技术研发人员：任争光，魏艳敏，陈勇，张伟，孔兵兵，赵晓燕，尚巧霞，李永强，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京,11