【技术实现步骤摘要】
一种DNA聚合酶的相对酶活的测定方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种新的DNA聚合酶的相对酶活的测定方法。
技术介绍
聚合酶链式反应(PCR)是一种体外快速扩增特定DNA片段的技术，是在由DNA模板、引物、dNTP、适当缓冲液等组成的反应混合物中，由DNA聚合酶催化，对一对寡核苷酸所界定的DNA片段进行扩增的反应。在此过程中，DNA聚合酶起着关键性的作用。因此该酶广泛应用于生命科学的研究领域和分子诊断领域。但是，由于因DNA聚合酶的生产工艺较为复杂，生产时细微不同都会导致批次间酶活出现差异。且在运输过程和保存过程中，酶活也会出现减弱或衰减，进而直接影响PCR反应时引物与模板的结合效率和扩增效率。酶活差异将导致结果出现假阳性或假阴性，降低实验的可比性和重复性，也为DNA聚合酶应用于分子诊断试剂盒的批量化生产带来较大的批次间差异，制约了DNA聚合酶在分子诊断领域的大规模应用。提高批次间酶活的稳定性固然重要，但由于DNA聚合酶工艺的复杂程度、运输过程的不稳定因素等客观原因，难以从根本上解决酶活批间差异的问题。因此，从厂家购买DNA聚合酶的科研单位、诊断试剂盒制...
【技术保护点】
1.一种DNA聚合酶的相对酶活的测定方法，其特征在于，包括：将待测的DNA聚合酶与对照酶在相同的实时荧光定量PCR反应体系中分别同时进行扩增反应，反应结束后以待测组和对照组得到的CT值进行一阶曲线拟合，根据拟合曲线的K值判定是否需要调节待测酶在反应体系中的工作浓度并再次进行实时荧光定量PCR反应，直到K值满足预先设定值要求、且曲线相关系数R2满足相关性要求时，依据此次待测酶和对照酶在反应体系中的工作浓度，计算待测酶相比于对照酶的相对酶活。
【技术特征摘要】
1.一种DNA聚合酶的相对酶活的测定方法，其特征在于，包括：将待测的DNA聚合酶与对照酶在相同的实时荧光定量PCR反应体系中分别同时进行扩增反应，反应结束后以待测组和对照组得到的CT值进行一阶曲线拟合，根据拟合曲线的K值判定是否需要调节待测酶在反应体系中的工作浓度并再次进行实时荧光定量PCR反应，直到K值满足预先设定值要求、且曲线相关系数R2满足相关性要求时，依据此次待测酶和对照酶在反应体系中的工作浓度，计算待测酶相比于对照酶的相对酶活。2.根据权利要求1所述的DNA聚合酶的相对酶活的测定方法，其特征在于，所述调节待测酶在反应体系中的工作浓度并再次进行实时荧光定量PCR反应，包括：当拟合曲线的K值大于预先设定值时，减少待测组的DNA聚合酶工作浓度；当拟合曲线的K值小于预先设定值时，增加待测组的DNA聚合酶工作浓度。3.根据权利要求1所述的DNA聚合酶的相对酶活的测定方法，其特征在于，所述K值的预先设定值为0.96<K<1.04。4.根据权利要求1所述的DNA聚合酶的相对酶活的测定方法，其特征在于，所述反应体系包括引物、探针、dATP、dGTP、dCTP、dUTP和晶芯缓冲液。5.根据权利要求1～4任意一项所述的DNA聚合酶的相对酶活...
【专利技术属性】
技术研发人员：牟禹，张冠斌，陆波，王科，安爽，
申请(专利权)人：成都博奥晶芯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51
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