一种N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的分析检测方法技术

本发明专利技术涉及一种N‑芴甲氧羰基‑L‑丙氨酸的分析检测方法，用于N‑芴甲氧羰基‑L‑丙氨酸的质量控制，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱(C18，4.6×250mm，5μm)，以三氟乙酸、乙腈和水混合溶液体系为流动相，以检测波长为220nm，进行高效液相色谱法分析检测。本发明专利技术的分析检测方法可以有效的将N‑芴甲氧羰基‑L‑丙氨酸及其杂质分开，而且该方法具有线性关系良好，操作简单，重复性及耐用性好，结果稳定可靠的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的分析检测方法
本专利技术涉及一种高效液相色谱分析方法，尤其是一种N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的分析检测方法。
技术介绍
胸腺法新是化学合成的由28个氨基酸组成的多肽，主要用于治疗慢性乙肝、丙肝，也可与其他药物联用治疗肿瘤及免疫缺陷等疾病。N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸是合成胸腺法新的重要起始物料，其结构式如下：到目前为止，USP、EP、BP、JP以及中国药典和文献中均没有记载N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的分析检测方法，但N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的分析检测对胸腺法新反应控制和收率提高有着重要的作用，同时也直接影响着终产品的质量，所以建立一种稳定有效的分析检测方法对N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸进行质量控制是非常必要的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色谱分析检测方法，用于N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的质量控制。为了实现本专利技术的目的，专利技术人通过大量试验，最终获得如下技术方案：一种N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的分析检测方法，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱(C18，4.6×250mm，5μm)，以水-三氟乙酸(1000:1)为流动相A，以乙腈-三氟乙酸(1000:1)为流动相B，梯度洗脱，以检测波长为220nm，进行高效液相色谱法分析检测。所述的梯度洗脱设置如下：进一步地，优选的梯度洗脱设置如下：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)05050200100250100305050355050本专利技术所述的分析检测方法，可通过以下步骤实现：A、取N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸样品适量，用乙腈溶解，配制成每1ml含胸腺法新起始物料0.1～0.6mg的样品溶液；B、设置流动相流速为0.9～1.1ml/min，检测波长220nm，柱温为20～30℃；C、取A的样品溶液10μl注入液相色谱仪，完成N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的分析检测；高效液相色谱仪：Waterse2695液相色谱系统；色谱柱：依利特，SinoChromODS-BPC18；4.6×250mm，5μm；流动相：以水-三氟乙酸(1000:1)为流动相A，以乙腈-三氟乙酸(1000:1)为流动相B，梯度洗脱设置如下：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)05050200100250100305050355050检测波长：220nm；柱温：25℃；流速：1.0ml/min。本专利技术涉及的分析检测方法，可以有效的将N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸及其杂质分开，而且该方法线性关系良好，操作简单，重复性及耐用性好，结果稳定可靠，从而可用于N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。附图说明图1实施例1的N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸HPLC图谱。图2实施例2的N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸HPLC图谱。图3实施例3的N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸HPLC图谱。图4实施例6的N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸线性工作曲线。具体实施方式以下是本专利技术的具体实施例，对本专利技术的技术方案做进一步作描述，但是本专利技术的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本专利技术构思的改变或等同替代均包括在本专利技术的保护范围之内。实施例1仪器与条件：Waterse2695液相色谱系统，Waters2489紫外/可见光检测器，色谱柱：依利特，SinoChromODS-BPC18；4.6×250mm，5μm；检测波长：220nm；柱温为25℃；流速1.0ml/min；流动相：以水-三氟乙酸(1000:1)为流动相A，以乙腈-三氟乙酸(1000:1)为流动相B，梯度洗脱设置如下：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)05050200100250100305050355050实验步骤：将N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸用乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中含N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1。附图1表明，在该色谱条件下，N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸及其杂质峰可以完全分离，且N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的保留时间在8.368min左右。实施例2仪器与条件：Waterse2695液相色谱系统，Waters2489紫外/可见光检测器，色谱柱：依利特，SinoChromODS-BPC18；4.6×250mm，5μm；检测波长：220nm；柱温为20℃；流速0.9ml/min；流动相：以水-三氟乙酸(1000:1)为流动相A，以乙腈-三氟乙酸(1000:1)为流动相B，梯度洗脱设置如下：实验步骤：将N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸用乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中含N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图2。附图2表明，在该色谱条件下，N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸及其杂质峰可以完全分离，且N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的保留时间在9.078min左右。实施例3仪器与条件：Waterse2695液相色谱系统，Waters2489紫外/可见光检测器，色谱柱：依利特，SinoChromODS-BPC18；4.6×250mm，5μm；检测波长：220nm；柱温为30℃；流速1.1ml/min；流动相：以水-三氟乙酸(1000:1)为流动相A，以乙腈-三氟乙酸(1000:1)为流动相B，梯度洗脱设置如下：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)04060200100250100304060354060实验步骤：将N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸用乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中含N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图3。附图3表明，在该色谱条件下，N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸及其杂质峰可以完全分离，且N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的保留时间在7.755min左右。实施例4重复性实验仪器与条件：同实施例1。实验步骤：取本品适量，精密称定，加乙腈溶解并稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为供试品溶液，同法配制6份供试品溶液。取供试品溶液，连续进样六次，按面积归一化法计算N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸含量，并计算其相对标准偏差，实验结果见表1。表1N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸重复性实验结果由表1可知，各供试品溶液中N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的含量没有明显差异，相对标准偏差为0.008％，可见本分析检测方法的重复性良好。实施例5耐用性实验仪器与条件：Waterse2695液相色谱系统，Waters2489紫外/可见光检测器；检测波长：220nm；流动相：以水-三氟乙酸(1000:1)为流动相A，以乙腈-三氟乙酸(1000:1)为流动相B，梯度洗脱设置如下：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)05050200100250100305050355050实验步骤：取本品适量，精密称定，加乙腈溶解并稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。分别通过改变柱温、流速和色谱柱，记录N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸有关物质和含量的变化情况，实验结果见表2。表2N本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种N‑芴甲氧羰基‑L‑丙氨酸的分析检测方法，采用高效液相色谱法进行分析检测，其特征在于包括以下步骤：A、取N‑芴甲氧羰基‑L‑丙氨酸样品适量，用乙腈溶解，配制成每1ml含胸腺法新起始物料0.1～0.6mg的样品溶液；B、设置流动相流速为0.9～1.1ml/min，检测波长220nm，柱温为20～30℃；C、取A的样品溶液10μl注入液相色谱仪，完成N‑芴甲氧羰基‑L‑丙氨酸的分析检测；其中，色谱柱：C18，4.6×250mm，5μm；流动相：以水‑三氟乙酸(1000:1)为流动相A，以乙腈‑三氟乙酸(1000:1)为流动相B，梯度洗脱设置如下：

【技术特征摘要】
1.一种N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的分析检测方法，采用高效液相色谱法进行分析检测，其特征在于包括以下步骤：A、取N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸样品适量，用乙腈溶解，配制成每1ml含胸腺法新起始物料0.1～0.6mg的样品溶液；B、设置流动相流速为0.9～1.1ml/min，检测波长220nm，柱温为20～30℃；C、取A的样品溶液10μl注入液相色谱仪，完成N-芴甲氧羰基-L-丙氨酸的分析检测；其中，色谱柱...

【专利技术属性】
技术研发人员：张贵民，刘思光，李庆振，赵亮亮，
申请(专利权)人：鲁南制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37