本发明专利技术公开了川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱的建立方法及其在检测川蛭通络胶囊质量的应用，包括对照品溶液制备、供试品溶液制备、HPLC测定、标准指纹图谱建立以及样品检测等步骤。本发明专利技术方法操作简便、稳定性高、重现性好，所得川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱，具有28个特征峰，能有效表征和控制川蛭通络胶囊的质量，有利于稳定产品质量，确保其内在质量的均一和稳定，保证临床用药的安全性和有效性。保证临床用药的安全性和有效性。
【技术实现步骤摘要】
川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱的建立方法及其应用
[0001]本专利技术涉及一种川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱的建立方法及其应用，属于中药制剂分析领域。
技术介绍
[0002]“川蛭通络胶囊(国药准字Z20090031，鲁南厚普制药有限公司生产)”由水蛭、川芎、黄芪、丹参四味中药原料制备而成，具有活血化瘀、益气通络之功效，用于治疗中风病经络(脑梗塞)恢复期血虚气虚证，症见半身不遂、口舌歪斜、语言蹇涩或不语、偏身麻木、气短乏力、口角流涎、手足肿胀、舌黯或有瘀斑、苔薄白。
[0003]目前，国家部颁标准YBZ00482009中关于川蛭通络胶囊的现行含量检查项目是阿魏酸含测，水蛭、川芎、丹参和黄芪的薄层鉴别，以及常规检测等项目。中药复方制剂成分复杂，仅用薄层色谱法进行成分的定性鉴别和常规检测项目不足以全面反映川蛭通络胶囊的质量优劣。中药指纹图谱作为一项质量控制技术，能够较为全面的控制药品的质量，具有系统性、整体性和稳定性特点。目前，以指纹图谱控制川蛭通络胶囊质量的研究已有报道，但一次区分出28个特征峰的川蛭通络胶囊HPLC指纹图谱建立方法尚未见报道。
[0004]本专利技术公开了一种川蛭通络胶囊的HPLC指纹图谱建立方法，以及用该方法制作的川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱。在使用相似度进行评价的情况下，可用该标准指纹图谱对川蛭通络胶囊的质量进行全面地评价和控制，从而保证产品质量的稳定及临床用药的安全有效。
技术实现思路
[0005]本专利技术的技术目的是提供一种川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱的建立方法及其在评价川蛭通络胶囊质量中的应用，以解决现有川蛭通络胶囊质量评价方法不能较全面反映和制剂质量的不足。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱的建立方法，包括供试品溶液制备、HPLC测定、标准指纹图谱建立；所述HPLC测定的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、以醋酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；
[0007]按所述HPLC色谱条件对多批次川蛭通络胶囊供试品溶液进行HPLC测定，对各供试品的指纹图谱进行分析，生成由样品共有特征峰构成的川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱。
[0008]所述梯度洗脱条件为：
[0009][0010]或
[0011][0012]或
[0013][0014]或
[0015][0016]或
[0017][0018][0019]中的任一种。
[0020]优选地，所述流动相B以体积百分含量为0.8％
‑
1.2％的醋酸溶液。
[0021]所述HPLC的紫外检测波长为254
‑
268nm；流速为1mL/min；柱温为25
‑
32℃；进样体积为5μL。
[0022]优选地，所述色谱柱为Agilent Eclipse XDB
‑
C
18
柱，紫外检测波长为268nm；柱温为30℃。
[0023]进一步优选地，色谱柱规格为4.6
×
150mm，3.5μm；最佳地，色谱柱规格为4.6
×
250mm，5μm。
[0024]本专利技术供试品溶液的制备方法为：取川蛭通络胶囊内容物，加入甲醇溶液摇匀，超声，定容，滤过，取续滤液，得供试品溶液。
[0025]优选地，供试品溶液的制备方法为：取川蛭通络胶囊内容物，加入体积百分含量为30％
‑
100％的甲醇摇匀，超声30min，稀释定容，滤过，取续滤液，得浓度为0.02kg/L的供试品溶液。
[0026]优选地，所述梯度洗脱条件为：
[0027][0028]在一种优选方案中，所述川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
[0029]Ⅰ.供试品溶液的制备
[0030]取川蛭通络胶囊内容物，研细，精密称定1g，置50mL容量瓶中，加入75％甲醇适量，超声30min，冷却，用75％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
[0031]Ⅱ.色谱条件
[0032]色谱柱：Agilent Eclipse XDB
‑
C
18
柱(4.6
×
250mm，5μm)；流动相：以乙腈为流动相A，以体积百分含量为1％醋酸水溶液为流动相B；梯度洗脱；检测波长：268nm；柱温：25
‑
32℃；进样体积：5μL；流速：1mL/min。
[0033]按下表进行梯度洗脱：
[0034][0035]Ⅲ.标准指纹图谱的建立
[0036]按所述HPLC色谱条件对多批次川蛭通络胶囊供试品溶液进行HPLC测定，采用软件(例如中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件)对各供试品的指纹图谱进行分析，生成由样品共有特征峰构成的川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱。
[0037]本专利技术的另一目的是提供由上述方法得到的川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱，所述HPLC标准指纹图谱由28个共有峰构成。
[0038]其中，3号峰为丹参素钠，9号峰为毛蕊异黄酮葡萄糖苷，10号峰为阿魏酸，14号峰为迷迭香酸，17号峰为参比峰丹酚酸B，24号峰为藁本内酯，27号峰为丹参酮IIA，28号峰为殴当归内酯A。
[0039]此外，2号峰、6号峰、8号峰、10号峰、11号峰、13号峰、15号峰、22号峰、23号峰、24号峰、25号峰、28号峰为川芎中的成分；9号峰、12号峰、18号峰、19号峰、21号峰为黄芪中的成分；3号峰、14号峰、16号峰、17号峰、26号峰、27号峰、28号峰为丹参中的成分，1号峰为水蛭、黄芪、丹参和川芎的共有成分，4号峰为丹参和川芎的共有成分，5号峰为水蛭、川芎和黄芪的共有成分。
[0040]以17号峰为参照峰，计算28个共有峰的相对保留时间依次为：0.073、0.079、0.084、0.106、0.111、0.120、0.182、0.205、0.319、0.373、0.562、0.680、0.721、0.733、0.777、0.823、1.000、1.113、1.166、1.443、1.583、1.804、1.907、2.318、2.382、2.872、3.361、3.393。
[0041]本专利技术的第三个目的是公开了按上述方法建立的HPLC标准指纹图谱在检测川蛭通络胶囊质量的应用。
[0042]所述应用包括以下步骤：按上述方法建立川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱；取川蛭通络胶囊待检样品，按上述HPLC测定同法操作，得到川蛭通络胶囊待检样品指纹图谱，采用软件《中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件》，对所得川蛭通络胶囊待检样品指纹图谱和上述HPLC标准指纹图谱进行相似度对比分析。可以根据相似度判断川蛭通络胶囊待检样品质量。本专利技术通过大量实验验证，相似度大于0.995可判断为待检样品合格。
[0043]在一种优选方案中，所述的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.川蛭通络胶囊HPLC指纹图谱的建立方法，包括供试品溶液制备、HPLC测定、标准指纹图谱建立，其特征在于，所述HPLC测定的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、醋酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；按所述HPLC色谱条件对多批次川蛭通络胶囊供试品溶液进行HPLC测定，对各供试品的指纹图谱进行分析，生成由样品共有特征峰构成的川蛭通络胶囊HPLC标准指纹图谱；所述梯度洗脱为：或或或
或中的任一种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相B以体积百分含量为0.8％
‑
1.2％的醋酸溶液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，紫外检测波长为254
‑
268nm；流速为1mL/min；柱温为25
‑
32℃；进样体积为5μL。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱柱为Agilent Eclipse XDB
‑
C
18
...
【专利技术属性】
技术研发人员：庄会芳，赵森森，高艳红，
申请(专利权)人：鲁南制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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