一种缬沙坦烃化物中异构体的检测方法技术

本发明专利技术提供一种缬沙坦烃化物中异构体的检测方法，所述的检测方法对缬沙坦烃化物中异构体的色谱峰分离度高、具有较高的系统适用性，同时在精密度、定量限、检测限、重复性、线性和范围和稳定性都符合标准。本发明专利技术首次提出了缬沙坦烃化物中异构体的检测方法，具有系统适用性好、精密度高和稳定性好等特点，同时本发明专利技术的测定方法操作简单，所用时间比较短，成本低，耗时短。

【技术实现步骤摘要】
一种缬沙坦烃化物中异构体的检测方法
本专利技术涉及一种HPLC法测定缬沙坦烃化物中异构体的检测方法，属于药物分析

技术介绍
缬沙坦（valsartan），化学名为：N-戊酰基-N-[[2'-(1H-四氮唑-5-基)[1,1'-联苯]-4-基]甲基]-L-缬氨酸，是一款血管紧张素II受体拮抗剂抗高血压类药物，该药物是起到使血管紧张素Ⅱ的I型(AT1)受体封闭，血管紧张素Ⅱ血浆水平升高，刺激未封闭的AT2受体，同时抗衡AT1受体的作用，从而达到扩张血管降低血压的效果。缬沙坦烃化物的化学名为N-[(2'-氰基-1,1'-联苯-4-基)甲基]-L-缬氨酸甲酯盐酸盐，是合成缬沙坦的关键中间体，缬沙坦的化学名为N-戊酰基-N-[[2'-(1H-四氮唑-5-基)[1,1'-联苯]-4-基]甲基]-L-缬氨酸，缬沙坦是L型的构型，D构型是其中含有的杂质，而缬沙坦烃化物中D构型异构体的含量会严重影响缬沙坦中异构体的含量，因此精确控制缬沙坦烃化物中的异构体杂质含量是合成高质量的缬沙坦原料药的重要步骤。目前还没有文献报道缬沙坦烃化物中异构体的检测方法。本专利技术首次提出了一种缬沙坦烃化物中异构体的检测方法，该方法具有精密度好、准确度高、重现性好等优点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种缬沙坦烃化物中异构体的检测方法，使其在系统适用性、精密度、定量限、检测限、线性范围和准确度等方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于缬沙坦原料药的质量控制。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种缬沙坦烃化物中异构体的检测方法，包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、定位溶液、对照溶液和供试品溶液；所述空白溶液为流动相溶液，所述定位溶液由缬沙坦烃化物异构体对照品和流动相溶液配制，所述对照溶液由缬沙坦烃化物对照品和流动相溶液配制，所述供试品溶液由缬沙坦烃化物样品和流动相溶液配制。（2）测定方法：所述流动相包括正己烷、异丙醇、三氟乙酸和二甲胺；优选的，所述流动相中正己烷：异丙醇：三氟乙酸：二甲胺的体积比为70:30:0.1:0.1。色谱条件：OD色谱柱，流速：0.6±0.2mL/min；柱温：30±2℃；进样量：10±2μl，运行时间：30±2min，检测波长：222±5nm。有益效果由以上技术方案可知，本专利技术所述的检测方法对缬沙坦烃化物中异构体的色谱峰分离度高、具有较高的系统适用性，同时在精密度、定量限、检测限、重复性、线性和范围和稳定性都符合标准。本专利技术首次提出了缬沙坦烃化物中异构体的检测方法，具有系统适用性好、精密度高和稳定性好等特点，同时本专利技术的测定方法操作简单，所用时间比较短，成本低，耗时短。附图说明图1为缬沙坦烃化物异构体检测空白溶液的液相色谱图；图2为缬沙坦烃化物异构体检测对映异构体定位溶液的液相色谱图；图3为缬沙坦烃化物异构体检测对照溶液的液相色谱图；图4为缬沙坦烃化物异构体检测供试品溶液的液相色谱图；图5为缬沙坦烃化物异构体检测系统适用性的液相色谱图；图6为缬沙坦烃化物异构体的线性关系图；图7为对比例1缬沙坦烃化物异构体检测系统适用性的液相色谱图；图8为对比例2缬沙坦烃化物异构体检测系统适用性的液相色谱图。具体实施方式下面用具体实施例来进一步解释和说明本专利技术，但并不以任何方式限制本专利技术的范围。实施例11)实验材料与仪器条件高效液相色谱仪：岛津LC-15C；色谱柱：5μm,4.6×250mm，OD柱；色谱条件：流速：0.6mL/min；柱温：30℃；进样量：10μl；运行时间：30min；检测波长：222nm；流动相：正己烷：异丙醇：三氟乙酸：二甲胺的体积比为70:30:0.1:0.1。2）实验步骤配制空白溶液：流动相。配制对映异构体定位溶液：精密称取缬沙坦烃化物异构体对照品5.29mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。配制对照溶液：精密称取缬沙坦烃化物对照品12.51mg，置25ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。配制供试品溶液：取缬沙坦烃化物样品12.84mg，置25ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。测定方法：精密量取空白溶液、对映异构体定位溶液、对照溶液和供试品溶液各10µl；注入液相色谱仪，记录色谱图，如图1、图2、图3和图4。按峰面积外标法计算得到缬沙坦烃化物中对映异构体的含量为0.08%，符合《中国药典》中关于药品质量标准规定的异构体的杂质应不大于0.20%的规定。实施例2本专利技术所述检测方法系统适用性试验如实施例1所述配制空白溶液、对映异构体定位溶液、对照溶液和供试品溶液，再将对映异构体定位溶液稀释100倍，再精密量取2mL，稀释10mL，作为系统适用性溶液。待系统平衡后，分别进上述各溶液，记录色谱图，得系统适用性图谱如图5所示，所得系统适应性结果如表1所示。表1-系统适用性试验结果实施例3本专利技术所述检测方法限度试验配制定量限溶液：取所述实施例1配制的对映异构体定位溶液1mL，用流动相稀释100倍，再精密量取3mL加流动相稀释至25mL量瓶中，再精密量取1mL加流动相稀释至10mL，制得。配制检测限溶液：精密量取定量限溶液3mL，再用流动相稀释至10mL，制得。测定方法及结果，如实施例1所述色谱条件测定，得到结果如表2所示。表2-限度试验结果实施例4本专利技术所述检测方法线性关系考察取缬沙坦烃化物异构体对照品5.29mg，精密称定，加流动相稀释制成浓度分别为0.06348μg/ml、0.5290μg/ml、0.7935μg/ml、1.0580μg/ml、1.5870μg/ml、2.1160μg/ml的溶液，精密量取上述溶液各10µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积和浓度做线性回归。线性方程y=58816x+742.37；г=0.9999(R2=0.9999)，x为样品浓度，г为相关系数。试验结果：在异构体浓度为0.06348μg/ml~2.1160μg/ml范围内，其浓度与峰面积呈良好的线性关系。线性关系图如图6所示，结果见表3。表3-线性关系考察结果实施例5本专利技术所述检测方法中间精密度试验取缬沙坦烃化物异构体对照品5.29mg，精密称定，加流动相稀释制成浓度为1.0580μg/ml的溶液，重复进样6次，分别于第二日再重复测定6次。试验结果：在该测定方法条件下，各被测样品有关物质项下精密度符合要求。结果见表4。表4-精密度测定结果实施例6本专利技术所述溶液的稳定性试验精密称取缬沙坦烃化物样品12.61mg，置25ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。分别于0、2、4、8小时进样，记录色谱图。试验结果：样品溶液在8小时内较稳定，对映异构体检测结果无明显变化。结果见表5。表5-溶液稳定性考察结果实施例7本专利技术所述检测方法的重复性试验精密称取缬沙坦烃化物样品约12.5mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释成0.5mg/ml的溶液，摇匀，作为样品溶液。精密量取10µl注入液相色谱仪，记录色谱图。重复测定6次。试验结果：在该测定方法条件下，各被测样品对映异构体项下重复性符合要求，结果见表6。表6-重复性考察结果对比例1（1）溶液配制：将实施例1中的流动相调整为正己烷：异丙醇：三氟乙酸按体积比为70:30:0.1，利用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种缬沙坦烃化物中异构体的检测方法，包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、定位溶液、对照溶液和供试品溶液；所述空白溶液为流动相溶液，所述定位溶液由缬沙坦烃化物异构体对照品和流动相溶液配制，所述对照溶液由缬沙坦烃化物对照品和流动相溶液配制，所述供试品溶液由缬沙坦烃化物样品和流动相溶液配制；（2）测定方法：采用高效液相色谱仪，OD色谱柱，色谱条件：流速：0.6±0.2mL/min；柱温：30±2℃；进样量：10±2μl，运行时间：30±2min，检测波长：222±5nm，所述流动相包括正己烷、异丙醇、三氟乙酸和二甲胺。

【技术特征摘要】
1.一种缬沙坦烃化物中异构体的检测方法，包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、定位溶液、对照溶液和供试品溶液；所述空白溶液为流动相溶液，所述定位溶液由缬沙坦烃化物异构体对照品和流动相溶液配制，所述对照溶液由缬沙坦烃化物对照品和流动相溶液配制，所述供试品溶液由缬沙坦烃化物样品和流动相溶液配制；（2）测定方法：采用高效液相色谱仪，OD色谱柱，色谱条件：流速：0.6±0.2mL/min；柱温：30±2℃；进样量：10±2μl，...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜春来，唐志娟，祁红林，张志新，谢斌，陈新民，
申请(专利权)人：珠海润都制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44