本发明专利技术公开了一种测定氨基酸螯合物螯合率的检测方法，其主要原理是：氨基酸螯合物试样经加热溶解、离心分离，分成沉淀态螯合元素、可溶性螯合元素及游离态金属离子；可溶性螯合元素及游离态金属离子经过凝胶色谱，在规定条件下洗脱，实现可溶性螯合态金属元素及游离态金属离子的分离，用原子吸收光谱法分别测定沉淀态螯合元素、可溶性螯合元素及游离态金属离子的含量，即可计算出相应的氨基酸螯合物的螯合率。本发明专利技术方法操作简单，可用于测定各种金属离子（如钙、镁、锌、铜、锰、钒）氨基酸螯合物的螯合率，节约生产成本。
【技术实现步骤摘要】
一种测定氨基酸螯合物螯合率的检测方法
本专利技术涉及一种检测方法，更具体地说，尤其涉及一种测定氨基酸螯合物螯合率的检测方法。
技术介绍
氨基酸螯合物是由1个或多个氨基酸基团与金属离子发生配合反应形成的具有环状结构的化合物，它具有稳定性好、吸收率高、生物效价高、毒性小等优点，目前已经广泛地运用于生产和和活的各个方面，特别是作为一种新型的营养补充剂在药品和保健食品上应用，取得了很好的效果。氨基酸螯合物螯合率的高低是反映氨基酸螯合物品质的一个重要指标。中国专利CN101368903A公开了一种测定氨基酸微量元素螯合物螯合率的检测方法，其主要原理是基于未发生螯合反应的离子态金属离子如（硫酸盐，氯化盐等）与螯合态的金属离子在紫外可见光区的最大吸收峰的波长不同，可以区别开游离态的金属离子与螯合态的金属离子，在此基础上再测定螯合态金属离子的浓度，进而计算出螯合率。但专利CN101368903A公开的检测方法适用于甘氨酸微量元素螯合物（含有可以溶于乙醇或难溶于乙醇的原料）的螯合率的测定，对于其它氨基酸常量元素螯合物，并未做进一步说明。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种测定氨基酸螯合物螯合率的检测方法，用于测定各种金属离子氨基酸螯合物的螯合率，其操作简便、节约生产成本。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种测定氨基酸螯合物螯合率的检测方法，其测定步骤如下：1）试样预处理称取待测的氨基酸螯合物试样1.0g，置于50mL离心管中，加入30mL水，于60℃水浴中，加热30min，不断搅拌，使试样充分溶解，于2500r/min离心10min；将上清液移入50mL容量瓶中，沉淀用60℃热水洗涤三次，离心，上清液一并移入50mL容量瓶中，定容，得可溶性螯合态金属元素溶液，称为A液；沉淀用10mL1︰10盐酸溶液溶解后，转入50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，得沉淀态螯合态金属元素溶液，称为B液；2）凝胶色谱柱的制备称取10g葡聚糖凝胶，加入200mL水配制成粘稠的悬浮液，静置3h，搅拌，沿玻璃棒将排尽气泡的凝胶悬浮液一次倾入色谱柱内，待凝胶全部倾入柱内后，开启柱下面的出口开关，流出液体，使凝胶自然沉降，控制凝胶部分长度为20cm；用50mLPH7.0的洗脱液洗涤凝胶色谱柱，排出洗脱液至凝胶表面近于流干，关闭出口开关；3）上样用移液管移取0.2mL溶液A，使之均匀渗入凝胶床表面；打开出口开关，使样品液流入凝胶床，用少量洗脱液洗涤柱壁周围及残留在床表面的样品液；注入洗脱液，测定钙、铜、镁、锌的螯合物时，用PH9.0的洗脱液，测定锰和钒的螯合物时，用PH10.0的洗脱液；4）洗脱分离用相应PH值的洗脱液洗脱，流速为0.7mL/min，收集洗出组分，定容至100mL，得可溶性螯合金属元素溶液，称为C液；可溶性螯合金属元素溶液收集完成后，在凝胶柱顶端用吸管移入4mL浓度为0.1mol/L的EDTA溶液，用PH7.0的洗脱液继续洗脱，合并所有洗出组分，定容至100mL，得游离态金属离子溶液，称为D液；5）螯合率测定取上述A、B、C、D溶液各10mL，按GB/T13885用原子吸收光谱法，分别测定各溶液中金属离子的含量，按下列公式计算氨基酸螯合物中金属离子的螯合率：螯合率（%）＝〔×+〕×100%式中：Ma、Mb、Mc、Md分别为A、B、C、D溶液中金属离子的含量（μg/mL）；Va、Vb、Vc、Vd分别为A、B、C、D溶液的体积（mL）。本专利技术的主要原理是：氨基酸螯合物试样经加热溶解、离心分离，分成沉淀态螯合元素、可溶性螯合元素及游离态金属离子；可溶性螯合元素及游离态金属离子经过凝胶色谱，在规定条件下洗脱，实现可溶性螯合态金属元素及游离态金属离子的分离，用原子吸收光谱法分别测定沉淀态螯合元素、可溶性螯合元素及游离态金属离子的含量，即可计算出相应的氨基酸螯合物的螯合率。本专利技术方法操作简单，可用于测定各种金属离子（如钙、镁、锌、铜、锰、钒）氨基酸螯合物的螯合率，节约生产成本。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的详细说明，但并不构成对本专利技术的任何限制。材料氨基酸螯合钙；氨基酸螯合镁；氨基酸螯合锌；氨基酸螯合铜；氨基酸螯合锰；氨基酸螯合钒（以上氨基酸螯合物均由武汉维奥制药有限公司提供）。乙醇；EDTA；葡聚糖凝胶；盐酸（1︰10）。实验用水应符合GB6682中二级用水的规格。洗脱液的配制（1）PH7.0的洗脱液：分别量取1.0mL氢氧化钠（0.1mol/L）、12.5mL硼酸（0.4mol/L）和12.5mL氯化钾（0.4mol/L）溶液，注入100mL容量瓶，稀释至刻度。（2）PH9.0的洗脱液：分别量取20.8mL氢氧化钠（0.1mol/L）、12.5mL硼酸（0.4mol/L）和12.5mL氯化钾（0.4mol/L）溶液，注入100mL容量瓶，稀释至刻度。（3）PH10.0的洗脱液：分别量取43.7mL氢氧化钠（0.1mol/L）、12.5mL硼酸（0.4mol/L）和12.5mL氯化钾（0.4mol/L）溶液，注入100mL容量瓶，稀释至刻度。乙二胺四乙酸二钠溶液（EDTA＝0.1mol/L）称取37.2g乙二胺四乙酸二钠加热溶于100mL水中。仪器恒温水浴锅；原子吸收分光光度计；色谱柱300mm×9mm；台式离心机。测定步骤1、试样预处理精确称取待测的氨基酸螯合物试样1.0g，置于50mL离心管中，加入30mL水，于60℃水浴中，加热30min，不断搅拌，使试样充分溶解，于2500r/min离心10min；将上清液移入50mL容量瓶中，沉淀用60℃热水洗涤三次，离心，上清液一并移入50mL容量瓶中，定容，得可溶性螯合态金属元素溶液，称为A液；沉淀用10mL盐酸溶液溶解后，转入50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，得沉淀态螯合态金属元素溶液，称为B液。2、凝胶色谱柱的制备称取10g葡聚糖凝胶，加入200mL水配制成粘稠的悬浮液，静置3h，搅拌，沿玻璃棒将排尽气泡的凝胶悬浮液一次倾入色谱柱内，待凝胶全部倾入柱内后，开启柱下面的出口开关，流出液体，使凝胶自然沉降，控制凝胶部分长度为20cm；用50mLPH7.0的洗脱液洗涤凝胶色谱柱，排出洗脱液至凝胶表面近于流干，关闭出口开关。3、上样用移液管移取0.2mL溶液A，使之均匀渗入凝胶床表面；打开出口开关，使样品液流入凝胶床，用少量洗脱液洗涤柱壁周围及残留在床表面的样品液；注入洗脱液，测定钙、铜、镁、锌的螯合物时，用PH9.0的洗脱液，测定锰和钒的螯合物时，用PH10.0的洗脱液。4、洗脱分离用相应PH值的洗脱液洗脱，流速为0.7mL/min，收集洗出组分，定容至100mL，得可溶性螯合金属元素溶液，称为C液；可溶性螯合金属元素溶液收集完成后，在凝胶柱顶端用吸管移入4mL配制的EDTA溶液，用PH7.0的洗脱液继续洗脱，合并所有洗出组分，定容至100mL，得游离态金属离子溶液，称为D液。5、螯合率测定取上述A、B、C、D溶液各10mL，按GB/T13885用原子吸收光谱法，分别测定各溶液中金属离子的含量，按下列公式计算氨基酸螯合物中金属离子的螯合率：螯合率（%）＝〔×+〕×100%式中：Ma、Mb、Mc、Md分别为A、B、C、D溶液中金属离子的含量（μg/m本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种测定氨基酸螯合物螯合率的检测方法，其特征在于，测定步骤如下：1）试样预处理称取待测的氨基酸螯合物试样1.0g，置于50mL离心管中，加入30mL水，于60℃水浴中，加热30min，不断搅拌，使试样充分溶解，于2500r/min离心10min；将上清液移入50mL容量瓶中，沉淀用60℃热水洗涤三次，离心，上清液一并移入50mL容量瓶中，定容，得可溶性螯合态金属元素溶液，称为A液；沉淀用10mL1︰10盐酸溶液溶解后，转入50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，得沉淀态螯合态金属元素溶液，称为B液；2）凝胶色谱柱的制备称取10g葡聚糖凝胶，加入200mL水配制成粘稠的悬浮液，静置3h，搅拌，沿玻璃棒将排尽气泡的凝胶悬浮液一次倾入色谱柱内，待凝胶全部倾入柱内后，开启柱下面的出口开关，流出液体，使凝胶自然沉降，控制凝胶部分长度为20cm；用50mLPH7.0的洗脱液洗涤凝胶色谱柱，排出洗脱液至凝胶表面近于流干，关闭出口开关；3）上样用移液管移取0.2mL溶液A，使之均匀渗入凝胶床表面；打开出口开关，使样品液流入凝胶床，用少量洗脱液洗涤柱壁周围及残留在床表面的样品液；注入洗脱液，测定钙、铜、镁、锌的螯合物时，用PH9.0的洗脱液，测定锰和钒的螯合物时，用PH10.0的洗脱液；4）洗脱分离用相应PH值的洗脱液洗脱，流速为0.7mL/min，收集洗出组分，定容至100mL，得可溶性螯合金属元素溶液，称为C液；可溶性螯合金属元素溶液收集完成后，在凝胶柱顶端用吸管移入4mL浓度为0.1mol/L 的EDTA溶液，用PH7.0的洗脱液继续洗脱，合并所有洗出组分，定容至100 mL，得游离态金属离子溶液，称为D液；5）螯合率测定取上述A、B、C、D溶液各10mL，按GB/T13885用原子吸收光谱法，分别测定各溶液中金属离子的含量，按下列公式计算氨基酸螯合物中金属离子的螯合率：螯合率（%）＝〔...
【技术特征摘要】
1.一种测定氨基酸螯合物螯合率的检测方法，其特征在于，测定步骤如下：1）试样预处理称取待测的氨基酸螯合物试样1.0g，置于50mL离心管中，加入30mL水，于60℃水浴中，加热30min，不断搅拌，使试样充分溶解，于2500r/min离心10min；将上清液移入50mL容量瓶中，沉淀用60℃热水洗涤三次，离心，上清液一并移入50mL容量瓶中，定容，得可溶性螯合态金属元素溶液，称为A液；沉淀用10mL1︰10盐酸溶液溶解后，转入50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，得沉淀态螯合态金属元素溶液，称为B液；2）凝胶色谱柱的制备称取10g葡聚糖凝胶，加入200mL水配制成粘稠的悬浮液，静置3h，搅拌，沿玻璃棒将排尽气泡的凝胶悬浮液一次倾入色谱柱内，待凝胶全部倾入柱内后，开启柱下面的出口开关，流出液体，使凝胶自然沉降，控制凝胶部分长度为20cm；用50mLPH7.0的洗脱液洗涤凝胶色谱柱，排出洗脱液至凝胶表面近于流干，关闭出口开关；3）上样用移液管移取0.2mL溶液A，使之均匀渗入凝胶床表面；打开出口开关，使样品液流入凝胶床，用少量洗脱液洗涤柱壁周围及残留在床表面的样品液；注入洗脱液，测定钙、铜、镁、锌的螯合物时，用PH9.0的洗脱液，测定锰和钒的螯合物时，用PH10.0的洗脱液；4）洗脱分离用相应PH值的洗脱液洗脱，流速为0.7mL/min，收集洗出组分，定容至100mL，得可溶性螯合金属元素溶液，称为C液；可溶性螯合金属元素溶液收集完成后，在凝胶柱顶端用吸管移入4mL浓度为0.1mol/L的EDTA溶液，用...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭卫平，吕东升，
申请(专利权)人：武汉维奥制药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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