中药制剂中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种中药制剂中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，该方法采用高效液相色谱法检测消渴灵片和消渴灵胶囊中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，为检查企业是否存在不投料或少投料、劣药材投料的行为提供有效依据。本发明专利技术根据中国药典2015年版四部通则0512，对检测的条件进行改进，优化溶液制备方法，使检测的方法更加高效、准确，检测方法具有专属性，阴性对照无干扰。

【技术实现步骤摘要】
中药制剂中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法
本专利技术涉及一种中药制剂的检测方法，具体是消渴灵片和消渴灵胶囊中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法。
技术介绍
消渴灵片由地黄、五味子、麦冬、黄芪、枸杞子等五味药材加水煎煮后，与牡丹皮、黄连、茯苓、红参、天花粉、石膏等的细粉混合制备而成，具益气养阴，清热泻火，生津止渴之功效，临床用于气阴两虚所致的消渴病。该药品的现行标准主要有《中国药典》2015年版一部及国家食品药品监督管理局标准YBZ06282004。除了性状、通则项外，《中国药典》收载了显微和薄层色谱鉴别来控制方中的茯苓、石膏、黄连、枸杞子等药材投料，但无含量测定项；而国家局标准YBZ06282004则在药典基础上，增加了天花粉、黄连、红参的显微鉴别、黄芪甲苷的薄层鉴别以及盐酸小檗碱的含量测定。消渴灵片处方中药材多达十一味，现行标准仅能反映药材投料的部分情况，难以反映投料药材的优劣。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种中药制剂中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，采用高效液相色谱法检测消渴灵片和消渴灵胶囊中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，为检查企业是否存在不投料或少投料、劣药材投料的行为提供有效依据。本专利技术所述中药制剂消渴灵片和消渴灵胶囊中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法包括以下步骤：（1）色谱条件与系统适用性试验：HICHROMALLtimaC18(250mm×4.6mm，5μm)，以乙腈为流动相A，0.01mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调PH至3）为流动相B，按表1进行梯度洗脱；检测波长为240nm（芍药苷）、260nm（毛蕊异黄酮葡萄糖苷）。理论板数按芍药苷峰计算应不低于10000。表1梯度洗脱表（2）对照品溶液的制备：取芍药苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含芍药苷30μg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷5μg的溶液，即得。（3）供试品溶液的制备：取样品适量，研细，取约3g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇100mL，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液50mL，减压浓缩至干，用90%甲醇定容至10mL，摇匀，滤过，即得。（4）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。（5）进行方法考察：分别进行线性关系考察、重复性考察、精密度考察、稳定性考察、专属性考察和回收率试验。样品每片含牡丹皮以芍药苷（C23H28O11）计，不得少于65μg。本专利技术的有益效果是：本专利技术根据中国药典2015年版四部通则0512，对检测的条件进行改进，优化溶液制备方法，使检测的方法更加高效、准确，检测方法具有专属性，阴性对照无干扰。本专利技术采用高效液相色谱法检测消渴灵片和消渴灵胶囊中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，重复性和稳定性好、精密度和回收率高，为检查企业是否存在不投料或少投料、劣药材投料的行为提供有效依据。附图说明图1为芍药苷对照品色谱图；图2为毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品色谱图；图3为B公司消渴灵片样品（批号：16032651）色谱图；图4为C公司消渴灵片样品（批号：161102）色谱图；图5为D公司消渴灵片样品（批号：170201）色谱图；图6为E公司消渴灵片样品（批号：20160201）色谱图；图7为F公司消渴灵片样品（批号：20150402）色谱图；图8为G公司消渴灵片样品（批号：20160201）色谱图；图9为H公司消渴灵片样品（批号：47120160503）色谱图；图10为I公司消渴灵片样品（批号：151101）色谱图；图11为J公司消渴灵片样品（批号：20150302）色谱图；图12为K公司消渴灵片样品（批号：160315）色谱图；图13为L公司消渴灵片样品（批号：20160401）色谱图；图14为A公司消渴灵片样品（批号：ZFA1604）色谱图；图15为M公司消渴灵片样品（批号：20160502）色谱图；图16为N公司消渴灵胶囊样品（批号：160301）色谱图；图17为芍药苷的标准曲线图；图18为毛蕊异黄酮葡萄糖苷的标准曲线图；图19为缺牡丹皮阴性样品图谱；图20为缺黄芪阴性样品图谱。具体实施方式为了更加详细的介绍本专利技术，下面结合实施例，对本专利技术做进一步说明。实施例1中药制剂消渴灵片和消渴灵胶囊中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，包括以下内容：仪器与试药：安捷伦1260高效液相色谱仪，配DAD检测器；ML204型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司），Hei-VAP型旋转蒸发仪（德国HeidoLph公司）。芍药苷（中国食品药品检定研究院提供，批号：110736-201741，含量95.7%）；毛蕊异黄酮葡萄糖苷（中国食品药品检定研究院提供，批号：111920-201203，含量97.3%）；乙腈、磷酸二氢钾试剂为色谱纯，其他试剂均为分析纯；消渴灵片、消渴灵胶囊均为2017年国家评价性抽验的样品，样品每片含牡丹皮以芍药苷（C23H28O11）计，不得少于65μg。方法考察所用消渴灵片为A公司，批号：ZKA1603。检测方法包括以下步骤：（1）色谱条件与系统适用性试验：HICHROMALLtimaC18(250mm×4.6mm，5μm)，以乙腈为流动相A，0.01mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调PH至3）为流动相B，按表1进行梯度洗脱；检测波长为240nm（芍药苷）、260nm（毛蕊异黄酮葡萄糖苷）。理论板数按芍药苷峰计算应不低于10000。表1梯度洗脱表（2）对照品溶液的制备：取芍药苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含芍药苷30μg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷5μg的溶液，即得。（3）供试品溶液的制备：取样品适量，研细，取约3g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇100mL，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液50mL，减压浓缩至干，用90%甲醇定容至10mL，摇匀，滤过，即得。（4）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。对不同厂家的消渴灵片和消渴灵胶囊进行检测，各个厂家样品典型色谱图见图1～16。方法考察包括以下内容：（1）线性关系考察称取芍药苷对照品10.82mg（纯度95.7%），置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得芍药苷储备液（207.09μg/mL）。精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品10.87mg（纯度97.3%），置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得毛蕊异黄酮葡萄糖苷储备液（105.77μg/mL）。分别精密吸取芍药苷储备液3mL、毛蕊异黄酮葡萄糖苷储备液1mL，置同一20mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得芍药苷浓度为31.06μg/mL、毛蕊异黄酮葡萄糖苷浓度为5.29μg/mL的混合对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积，以各浓度对照品的进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表2，图17～18。表2线性关系表（2）重复性考察取样品适量，研细，取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共取6份，按检测方法步骤（3）中供本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.中药制剂中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，所述方法是采用高效液相色谱法检测消渴灵片和消渴灵胶囊中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量的方法，测定方法包括以下步骤：（1）色谱条件与系统适用性试验：HICHROM ALLtima C18，以乙腈为流动相A，0.01mol/L磷酸二氢钾为流动相B，进行梯度洗脱57min；在波长为240nm处检测芍药苷，在波长为260nm处检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷；（2）对照品溶液的制备：取芍药苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含芍药苷30μg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷5μg的溶液，即得；（3）供试品溶液的制备：取样品适量，研细，取约3g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇100mL，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液50mL，减压浓缩至干，用90%甲醇定容至10mL，摇匀，滤过，即得；（4）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；（5）进行方法考察：分别进行线性关系考察、重复性考察、精密度考察、稳定性考察、专属性考察和回收率试验。...

【技术特征摘要】
1.中药制剂中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，所述方法是采用高效液相色谱法检测消渴灵片和消渴灵胶囊中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量的方法，测定方法包括以下步骤：（1）色谱条件与系统适用性试验：HICHROMALLtimaC18，以乙腈为流动相A，0.01mol/L磷酸二氢钾为流动相B，进行梯度洗脱57min；在波长为240nm处检测芍药苷，在波长为260nm处检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷；（2）对照品溶液的制备：取芍药苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含芍药苷30μg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷5μg的溶液，即得；（3）供试...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗轶，张涛，张颖婷，林燕翔，张慧，黄博，姚力，朱雪妍，
申请(专利权)人：广西壮族自治区食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45