An indirect ELISA kit, including antibody diluent and enzyme label two, contains the following components of a mass fraction of 75 to 95% as the 1 * PBS buffer solution of the solvent system, 0.1 to 8% of bovine serum albumin, 0.01 to 0.5% of the sulphur mercury sodium, and 0.05 to 5%. Coagulants, 0.1 to 15% unconventional animal serum and 0.05 to 2% streptomycin double resistance; the dilution rate of the enzyme labeled two is 1: (500 10000). The invention also discloses an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The invention can reduce the negative background of the common enzyme-linked immunosorbent assay, improve the signal-to-noise ratio of the detection method and the sensitivity of the detection method. One
【技术实现步骤摘要】
一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒及检测方法
本专利技术涉及生物检测试剂
,更具体地说,涉及一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
酶联免疫吸附测定(ELISA)方法广泛用于测定抗体和抗原,其原理利用蛋白质或多肽与固体表面如ELISA板高度结合的亲合力。在用于血清学抗体测定的间接ELISA系统中,由于血清免疫球蛋白对固体表面的固有高结合亲和力,这种亲合力比任何目前使用的阻断剂高得多,此外,血清样品中的总体免疫球蛋白浓度高,为mg/ml,而抗原特异性抗体免疫球蛋白的浓度很低,为ng或μg/ml,非抗体免疫球蛋白会与抗原分子引起显著的非特异性相互作用。这些因素均会导致ELISA产生强烈的假阳性背景(BG)噪声反应。这种BG噪声反应始终是酶联免疫吸附测定方法所面临的技术瓶颈,一直以来该方法导致了众多不确定的结论和误解,为了防止进一步误用ELISA技术和误解血清学抗体测定数据,重要的是重新考虑免疫测定系统的原理和所有类型的非特异性反应。在ELISA检测中,影响检测灵敏度的最主要因素是信噪比,即方法中阳性对照与阴性对照的比值。为了提高灵敏度,可以通过增强抗原与抗体结合能力,对信号进行放大,对背景(噪音)进行降低等方法。现有检测方法中存在检测背景偏高,即建立的检测方法的敏感性过低,检测时间过长等问题。
技术实现思路
针对现有技术的上述缺陷,本专利技术的目的在于提供一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒,降低检测方法噪声,提高信噪比,增加检测灵敏度,提升检测试剂盒的性能。本专利技术的另一目的在于提供一种间接酶联免疫抗体检测方法;降低普通酶联免疫检测方法的阴性背景,提 ...
【技术保护点】
1.一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒,其特征在于,包括抗体稀释液和酶标二抗,所述
【技术特征摘要】
1.一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒,其特征在于,包括抗体稀释液和酶标二抗,所述抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分:75~95%作为溶剂体系的1×PBS缓冲液、0.1~8%的牛血清白蛋白、0.01~0.5%的硫柳汞钠、0.05~5%的抗凝剂、0.1~15%的非常规性饲养动物血清以及0.05~2%的青链霉素双抗;所述酶标二抗的稀释度为1:(500-10000)。2.如权利要求1所述的间接酶联免疫抗体检测试剂盒,其特征在于,所述酶标二抗为HRP过氧化氢酶或ALP碱性磷酸酶标记的羊抗猪、羊抗兔、羊抗鼠、兔抗猪、兔抗鼠中的一种。3.如权利要求1或2所述的间接酶联免疫抗体检测方法,其特征在于,所述抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分:85~92%作为溶剂体系的1×PBS缓冲液、0.1~5%的牛血清白蛋白、0.1~0.3%的硫柳汞钠、0.1~2%的抗凝剂、3~8%的非常规性饲养动物血清以及0.1~1%的青链霉素双抗。4.如权利要求1或2任一项所述的间接酶联免疫抗体检测方法,其特征在于,所述抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分:91%作为溶剂体系的pH7.2的1×PBS缓冲液、2.0%的牛血清白蛋白、0.2%的硫柳汞钠、1.0%的抗凝剂、5.0%的非常规性饲养动物血清以及0.8%的青链霉素双抗。5.如权利要求1或2任一项所述的间接酶联免疫抗体检测方法,其特征在于,所述抗凝剂为肝素或乙二胺四乙酸二钠;所述非常规性饲养动物血清为骆驼、驼鹿、羊驼、马、鸵鸟、鸽、牦牛等动物血清中的一种或两种混合。6.如权利要求1或2所述的间...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨洁,李其昌,陈善真,陈克宏,刘博奇,王贵平,
申请(专利权)人:广东海大畜牧兽医研究院有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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