一种斑点杂交检测方法技术

技术编号:8797640 阅读:266 留言:0更新日期:2013-06-13 03:47
本发明专利技术适用于病毒检测领域,提供了一种斑点杂交检测方法,所述方法包括:将含有DNA样品的杂交膜封入杂交袋中并加入杂交溶液,封闭杂交膜上多余的非特异性DNA结合位点;将所述杂交膜置于烧杯,加入冲洗溶液于摇床中洗膜,洗去未结合的探针并封闭所述杂交膜上非特异性的蛋白质结合位点;取出所述杂交膜置于平皿中,加入含有抗地高辛抗体的马来酸缓冲液中,使酶联抗体与地高辛相结合并洗去未结合的酶联抗体;将所述杂交膜置于显色液中显色,使用无酶水终止反应。本发明专利技术可同时检测多个样品,操作方便,节省时间,无需特殊仪器设备,阳性信号清晰,试剂成本较低,可做半定量分析并可检测出病毒载量低的病毒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于病毒检测领域,尤其涉及。
技术介绍
绵羊肺腺瘤病是由一种反转录病毒引起,在世界范围内发生。主要呈地方性散发,在英国、德国、法国、荷兰、意大利、南斯拉夫、希腊、以色列、保加利亚、土耳其、俄罗斯、南非、秘鲁、印度及中国内蒙古和新疆等地均有绵羊肺腺瘤病发病报道,特别是在苏格兰绵羊肺腺瘤病呈顽固的地方性散发,年发病率为20%左右,死亡率很高,可达100%。苏格兰的黑脸皮绵羊易感性最强,多呈单独感染(而在有些国家如南非、美国绵羊肺腺瘤病多与绵羊进行性肺炎及巴氏杆菌引起的肺炎混合感染)。绵羊肺腺瘤病主要感染绵羊,山羊有一定的抵抗力。各品种和年龄的绵羊均能发病,本病的潜伏期长,多为2-4岁成年绵羊。在苏格兰,绵羊肺腺瘤病的发病率有时在一牧群中最高可达20%左右,潜伏期也大大缩短,绵羊肺腺瘤病在一个地区或一个牧场一旦发生,很难彻底消灭。本病一般都以死亡而告终。目前也有关于绵羊肺腺瘤病毒的分子生物学技术检测的报道,但因检测样品的选择容易造成污染和假阳性出现等原因而没有推广。绵羊肺腺瘤病的病原是外源性绵羊肺腺瘤反转录病毒,但在所有已研究过的正常绵羊基因组内都含有27拷贝与外源性绵羊肺腺瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种斑点杂交检测方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:将含有DNA样品的杂交膜封入杂交袋中并加入杂交溶液,封闭杂交膜上多余的非特异性DNA结合位点;将所述杂交膜置于烧杯,加入冲洗溶液于摇床中洗膜,洗去未结合的探针并封闭所述杂交膜上非特异性的蛋白质结合位点;取出所述杂交膜置于平皿中,加入含有抗地高辛抗体的马来酸缓冲液中,使酶联抗体与地高辛相结合并洗去未结合的酶联抗体;将所述杂交膜置于显色液中显色,使用无酶水终止反应。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:刘淑英赵泽赟齐景伟梁化春王宇
申请(专利权)人:内蒙古农业大学
类型:发明
国别省市:

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