一种分离纯化甜菊糖单体的方法技术

本发明专利技术提供了一种分离纯化甜菊糖单体的方法，属于分离提纯技术领域，具体包括：将甜菊糖样品与乙腈水溶液混合得到甜菊糖样品液，以氨基填料为固定相，乙腈水溶液为流动相，将样品液经过三区带模拟移动床色谱分离体系进行分离得到甜菊苷和莱胞迪苷A。本发明专利技术运用三区带模拟移动床色谱分离系统，从甜菊糖中离出的甜菊苷和莱胞迪苷A纯度高，且分离工艺简单，流程连续且自动化，产率高，溶剂消耗低且可以重复利用，实现了清洁生产。

A method for separation and purification of stevioside monomers

The invention provides a method for separation and purification of stevia sugar monomer, which belongs to the technical field of separation and purification. It includes: mixing stevioside sample and acetonitrile solution to get the stevioside sample liquid, using amino packing as fixed phase, acetonitrile aqueous solution as mobile phase, and simulating mobile bed chromatographic separation body through three zones. The strains of stevioside and lycyside A were isolated and obtained. The invention uses three zone simulated moving bed chromatographic separation system. The purity of stevioside and lycyside A isolated from stevioside is high, and the separation process is simple, the process is continuous and automatic, the yield is high, the solvent consumption is low and can be reused, and the cleaner production is realized.

【技术实现步骤摘要】
一种分离纯化甜菊糖单体的方法
本专利技术涉及分离提纯
，特别涉及一种分离纯化甜菊糖单体的方法。
技术介绍
甜菊糖是一种高甜度、低热量的天然甜味剂，甜菊糖拥有多种单体，鲍迪苷A(Rebaoudioside-A，RA)与甜菊苷(Stevioside，ST)是最常见的两种单体，其中莱鲍迪苷A的甜度是蔗糖的350～450倍，甜菊苷的甜度是蔗糖的250～300倍。同时甜菊糖具有耐热、防腐等稳定性能，也可作为甜味剂添加到食品、药品、化妆品等中来增加其保存期。另外，根据大量毒性学研究表明，甜菊糖在人体内很容易被消化排出，同时也有另外的研究显示他还可以降血压、血糖、胆固醇以及调节免疫功能等特殊的生理活性，使它也成为了一种优质的保健品。现有的甜菊糖分离提纯的方法主要有高速逆流色谱(HSCCC)、制备色谱法和大孔吸附树脂吸附法。ZhenbinChen等人利用大孔吸附树脂对甜菊糖进行提纯，采用LZ-1+LZ-20+LZ-30+LZ-37+LZ-36的混合树脂，混合比例为m(LZ-1):m(LZ-20):m(LZ-30):m(LZ-37):m(LZ-36)＝2:3:1:3:2，其他操作参数设置为C0＝0.416mg/mL,V＝50mL,pH＝7,T＝65℃,E＝85％,ta＝90min,td＝120min，采用大孔吸附树脂生产，提取纯度较低，不能实现连续性生产(《PreparativeseparationofRebaudianaAfromcommercializedsteviolglycosidesbymacroporousadsorptionresinsmixedbed》[J],ZhenbinChen等,SeparationandPurificationTechnology,2012,89:22～30)。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术目的目的是在于提供一种分离纯化甜菊糖单体的方法，利用三区带模拟移动床色谱分离系统，从甜菊糖中离出的甜菊苷和莱胞迪苷A纯度高，流程连续且自动化。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供一种分离纯化甜菊糖单体的方法，包括以下步骤：1)将甜菊糖样品与乙腈水溶液混合得到甜菊糖样品液，所述甜菊糖样品包括甜菊苷和莱胞迪苷A；2)将所述甜菊糖样品液经过三区带模拟移动床色谱分离体系进行分离，得到单一组分的甜菊苷和莱胞迪苷A；所述三区带模拟移动床色谱分离体系的固定相为氨基填料，流动相为乙腈水溶液。优选地，所述步骤1)中乙腈水溶液中乙腈的体积分数为60％～80％。优选地，所述步骤1)中甜菊糖样品液中甜菊糖的质量浓度为0.1～50g/L。优选地，所述步骤2)中氨基填料的粒径为5～100μm。优选地，所述步骤2)中乙腈水溶液中乙腈的体积分数为60％～80％。优选地，所述流动相的流速为0.1～10mL/min，所述甜菊糖样品液的流速为0.1～2mL/min；所述三区带模拟移动床色谱分离体系的萃取液流速为0.1～2mL/min、萃余液流速为0.1～10mL/min、切换时间为1～100min。优选地，所述流动相的流速为0.5～5mL/min，样品液的流速为0.5～1.5mL/min；所述三区带模拟移动床色谱分离体系的萃取液流速为0.5～1.5mL/min、萃余液流速为0.5～5mL/min切换时间为5～50min。优选地，所述三区带模拟移动床色谱分离体系的操作温度为10～40℃。优选地，三区带模拟移动床色谱分离体系的色谱系统包括I区、II区和III区，所述Ⅰ区、Ⅱ区独立地包括1～6根色谱柱，所述Ⅲ区包括2～12根色谱柱。有益技术效果：本专利技术采用三区带模拟移动床色谱分离系统对甜菊糖进行分离，从甜菊糖中离出的甜菊苷和莱胞迪苷A纯度高且分离工艺简单，流程连续且自动化，产率高，溶剂消耗低且可以重复利用，实现了清洁生产。实施例的数据表明，本专利技术提供的分离纯化甜菊糖单体的方法得到的莱鲍迪苷A(RA)的纯度为99.4％，回收率为96.6％，每公斤固定相每天生产量为3.62kg；甜菊苷(ST)的纯度为96.5％，回收率为99.4％，每公斤固定相每天生产量为3.72kg。附图说明图1为三区带模拟移动床色谱分离系统装置的示意图；11-进样液泵，12-洗脱液泵，41-进样液阀，42-洗脱液阀，2-色谱柱系统，6-单向阀，5-四通，44-萃余液阀，43萃取液阀，13-萃取液泵，3-反压阀；图2为实施例1中萃取液和萃余液的色谱分析图。具体实施方式本专利技术提供一种分离纯化甜菊糖单体的方法，包括以下步骤：1)将甜菊糖样品与乙腈水溶液混合得到甜菊糖样品液，所述甜菊糖样品包括甜菊苷和莱胞迪苷A；2)将所述甜菊糖样品液经过三区带模拟移动床色谱分离体系进行分离，得到单一组分的甜菊苷和莱胞迪苷A；所述三区带模拟移动床色谱分离体系的固定相为氨基填料，流动相为乙腈水溶液。本专利技术将甜菊糖样品与乙腈水溶液混合得到甜菊糖样品液，所述甜菊糖样品包括甜菊苷和莱胞迪苷A。在本专利技术中，所述甜菊苷和莱胞迪苷A的比例优选为1：1。在本专利技术中，用于溶解所述甜菊糖样品的乙腈水溶液的体积分数优选为60％～80％，更优选为70％；所述甜菊糖样品液中甜菊糖的质量浓度优选为0.1～50g/L；更优选为5～25g/L。本专利技术对所述混合的方式没有特殊限定，选用本领域技术人员熟知的混合方式即可。得到甜菊糖样品液后，本专利技术将得到的甜菊糖样品液经过三区带模拟移动床色谱分离体系进行分离，得到单一组分的甜菊苷和莱胞迪苷A。本专利技术将甜菊糖样品液经过三区带模拟移动床色谱分离体系进行分离得到萃取液和萃余液；所述萃取液中含有甜菊苷，所述萃余液中含有莱胞迪苷A。在本专利技术中，所述三区带模拟移动床色谱分离体系的固定相为氨基填料，流动相为乙腈水溶液。在本专利技术中，所述氨基填料的粒径优选为5～100μm，更优选为10～75μm，最优选为25～50μm；所述氨基填料优选为氨基键合硅胶填料6010-NH2作为流动相的所述乙腈水溶液的体积分数优选为60～80％，更优选为70％。在本专利技术中，所述流动相的流速优选为0.1～10mL/min，更优选为0.5～5mL/min；所述甜菊糖样品液的流速优选为0.1～2mL/min，更优选为0.5～1.5mL/min；在本专利技术中，进样量为连续进样；在本专利技术中，所述萃取液流速优选为0.1～2mL/min，更优选为0.5～1.5mL/min；所述萃余液流速为0.1～10mL/min，更优选为0.5～5mL/min。在本专利技术中，所述三区带模拟移动床色谱分离体系的切换时间优选为1～100min，更优选为5～50min。在本专利技术中，所述三区带模拟移动床色谱分离体系的操作温度优选为10～40℃，更优选为20～30℃。在本专利技术中，所述三区带模拟移动床色谱分离体系包括三个恒流泵(进样液泵11、洗脱液泵12、萃取液泵13)、四个切换阀(进样液阀41、洗脱液阀42、萃取液阀43、萃余液阀44)、一个反压阀3和和色谱柱系统2，所述色谱柱系统包括N根色谱柱、N个单向阀6、2*N个四通5。所述进样液A和洗脱液B分别是由进样液泵11和洗脱液泵12输送到进样液阀41和洗脱液阀42，所述进样液阀41和洗脱液阀42均为1进N出的切换阀，任一时刻只有一个出口和进口连通；N根色谱柱2相互串联在一起，每根色谱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离纯化甜菊糖单体的方法，包括以下步骤：1)将甜菊糖样品与乙腈水溶液混合得到甜菊糖样品液，所述甜菊糖样品中包括甜菊苷和莱胞迪苷A；2)将所述甜菊糖样品液经过三区带模拟移动床色谱分离体系进行分离，得到单一组分的甜菊苷和莱胞迪苷A；所述三区带模拟移动床色谱分离体系的固定相为氨基填料，流动相为乙腈水溶液。

【技术特征摘要】
1.一种分离纯化甜菊糖单体的方法，包括以下步骤：1)将甜菊糖样品与乙腈水溶液混合得到甜菊糖样品液，所述甜菊糖样品中包括甜菊苷和莱胞迪苷A；2)将所述甜菊糖样品液经过三区带模拟移动床色谱分离体系进行分离，得到单一组分的甜菊苷和莱胞迪苷A；所述三区带模拟移动床色谱分离体系的固定相为氨基填料，流动相为乙腈水溶液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中乙腈水溶液中乙腈的体积分数为60％～80％。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中甜菊糖样品液中甜菊糖的质量浓度为0.1～50g/L。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中氨基填料的粒径为5～100μm。5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中乙腈水溶液中乙腈的体积分数为60％～80％。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁阳平，姚传义，卢英华，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建,35