本发明专利技术公开了一对杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞对包括独立存放的第一杂交瘤细胞株和第二杂交瘤细胞株；所述第一杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC No.13482；所述第二杂交瘤细胞株的保藏编号为：CGMCC No.13481本发明专利技术还提供了由这2株杂交瘤细胞分泌的一对配对的单克隆抗体和它们在检测GR79‑EPSPS蛋白中的用途；此外，还公开了一种免疫胶体金试纸条。本发明专利技术通过免疫胶体金试纸条能够对转基因植物中存在的GR79‑EPSPS蛋白进行定性定量检测，具有特异性强、灵敏度高、简单快速等优点。
GR79-EPSPS monoclonal antibody test paper and its application
The present invention discloses a pair of hybridoma cell lines, which include the first hybridoma cell line and second hybridoma cell line of the second hybridoma cell line, and the preservation number of the first hybridoma cell line is numbered No.13482; the second hybridoma cell line is preserved numbered as CGMCC No.13481. A pair of paired monoclonal antibodies secreted by these 2 hybridoma cells and their use in the detection of GR79 EPSPS protein; in addition, an immuno colloid gold strip is also published. The invention can detect the GR79 protein EPSPS protein in transgenic plants by immuno colloid gold strip, which has the advantages of high specificity, high sensitivity, simple and rapid, and so on.
【技术实现步骤摘要】
GR79-EPSPS的单克隆抗体试纸条及其应用
本专利技术属于转基因植物检测
，具体涉及一种杂交瘤细胞对和相应的单克隆抗体对，还涉及一种单克隆抗体胶体金试纸条。
技术介绍
草甘膦(英文名：Glyphosate；商品名为：农达(Roundup))是美国孟山都公司开发的一种广谱灭生性、内吸传导型除草剂，其毒性机制主要是竞争性抑制莽草酸途径中的EPSP合酶，导致莽草酸途径中断，芳香族氨基酸合成受阻，从而扰乱生物体的正常氮代谢，最终导致生物体死亡。草甘膦具有结构简单、生产成本低、除草效果好、低毒无残留等特点，是目前世界上使用面积最广的除草剂品种。但作为一种非选择性除草剂，它对农作物同样具有灭生性作用，这大大限制了草甘膦在农业生产中的应用范围。培育具有草甘膦抗性或降解性质的农作物，成为农业生产中应用草甘膦的前提。抗草甘膦基因为某些特定物种中天然存在的拮抗草甘膦的基因，该基因编码抗草甘膦酶(5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶，EPSPS)，从而使草甘膦丧失对含有该类基因的菌类或植物的毒害作用。利用基因工程等手段，将抗草甘膦的Epsps基因转入植物体内培育抗草甘膦植物，是控制杂草的有效方法。抗草甘膦的基因主要有草甘膦乙酰基转移酶GAT基因、GR79-EPSPS和CP4-EPSPS基因等；其中GR79-EPSPS是中国农业科学院生物技术研究所发现的一种新的抗草甘膦基因(CN103981199A)。目前，我国已有多个抗草甘膦转基因棉花品系进入环境释放和生产试验阶段，如转CP4-EPSPS抗草甘磷棉花、转GR79EPSPS-GAT抗草甘磷棉花等。对转基因植物的检测是对转基因植物进行有效监管的基础。对转基因植物的鉴定检测方法主要有：(1)蛋白免疫印迹检测；(2)整合位点侧翼序列PCR检测；(3)外源基因特异引物PCR检测；(4)Southernblot分子杂交检测等，其中利用免疫学原理对目的蛋白特异性进行定性定量鉴定的蛋白免疫印迹检测方法，是目前转基因植物最精准的鉴定方法之一。利用外源蛋白抗体可以通过westernblot和ELISA方法进行定性定量分析，检测转基因植物中目的蛋白在不同组织器官和不同环境条件下的表达水平(Joarrne等，1987；Nilogu等，1987；Nelson等，1988)。胶体金试纸法将特异的抗体交联到试纸条上,利用胶体金试纸条技术制备的单克隆抗体试纸条，可以对转基因幼苗或者种子进行快速的检测鉴定(Lipton等,2000)。
技术实现思路
为了对GR79-EPSPS抗除草剂转基因植物进行有效监管和对转基因后代进行快速检测，本专利技术主要目的在于提供对转GR79-EPSPS基因植物中GR79-EPSPS蛋白的快速灵敏的检测方法。本专利技术目的在于提供一种杂交瘤细胞对。本专利技术另一目的在于提供一种单克隆抗体对。本专利技术第三目的在于提供上述杂交瘤细胞对在检测GR79-EPSPS转基因植物上的用途。本专利技术第四目的在于提供上述单克隆抗体对在检测GR79-EPSPS转基因植物上的用途。本专利技术第五目的在于提供一种单克隆抗体试纸条。为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：一方面，本专利技术提供一种杂交瘤细胞对，该杂交瘤细胞对包括独立存放的第一杂交瘤细胞株(命名为：Anti-GR79-1-9E6)和第二杂交瘤细胞株(命名为：Anti-GR79-1-10D5)；所述第一杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNo.13482；所述第二杂交瘤细胞株的保藏编号为：CGMCCNo.13481。再一方面，本专利技术还提供了一种单克隆抗体对，该单克隆抗体对包括独立存放的第一单克隆抗体和第二单克隆抗体；所述的第一单克隆抗体由第一杂交瘤细胞株产生；所述的第二单克隆抗体由第二杂交瘤细胞株产生；所述第一杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNo.13482；所述第二杂交瘤细胞株的保藏编号为：CGMCCNo.13481。再一方面，本专利技术还提供了上述杂交瘤细胞对在检测GR79-EPSPS转基因植物上的应用。再一方面，本专利技术还提供了上述单克隆抗体对在检测GR79-EPSPS转基因植物上的应用。上述应用中所述的植物是指棉花、玉米、水稻、小麦、大豆或向日葵等。再一方面，本专利技术还提供了一种免疫胶体金试纸条，该免疫胶体金试纸条包括依次相连接的吸水垫、基膜、金标垫和样品垫；所述的基膜上设置有C线和T线，所述C线上包被有羊抗鼠IgG的抗体，所述T线上包被有第一单克隆抗体，所述的金标垫中含有胶体金标记的第二单克隆抗体，所述第一单克隆抗体和第二单克隆抗体构成单克隆抗体对，其中，所述单克隆抗体对为如上所述的单克隆抗体对。上述免疫胶体金试纸条中所述的基膜是指硝酸纤维素膜等。上述免疫胶体金试纸条在检测GR79-EPSPS蛋白上的应用。上述免疫胶体金试纸条在检测GR79-EPSPS转基因植物上的应用。上述应用中所述的植物是指棉花、玉米、水稻、小麦、大豆或向日葵等。本专利技术具有的优点和有益效果：(1)本专利技术单克隆抗体对GR79-EPSPS蛋白检测的特异性强，鉴定结果准确、可靠；(2)本专利技术单克隆抗体灵敏度高，能对GR79-EPSPS转基因植物中不同组织器官中GR79-EPSPS蛋白的表达进行精确的定量检测；(3)用本专利技术免疫胶体金试纸条检测GR79-EPSPS转基因棉花方法简单、高效，适用于对GR79-EPSPS抗除草剂基因转育过程中获得的中间材料或者杂交后代的选育进行大规模的筛选鉴定；(4)本专利技术检测方法可以对棉花种子、幼苗及其各个组织器官进行抗除草剂蛋白免疫检测，能够缩短育种进程，加快育种速度，降低育种成本，为GR79-EPSPS抗除草剂转基因棉花新品种培育和推广应用奠定了基础。生物保藏本专利技术的第一杂交瘤细胞株是本专利技术的专利技术人自行融合筛选得到的，命名为Anti-GR79-1-9E6，其保藏编号为CGMCCNo.13482，保藏日期为2016年12月22日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为抗GR79单克隆抗体杂交瘤细胞株。本专利技术的第二杂交瘤细胞株是本专利技术的专利技术人自行融合筛选得到的，命名为Anti-GR79-1-10D5，其保藏编号为CGMCCNo.13481，保藏日期为2016年12月22日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为抗GR79单克隆抗体杂交瘤细胞株。附图说明图1.GR79-3的杂交瘤细胞上清(抗体)针对棉花种子的Westernblot检测图谱；其中Marker为分子量标准，6E4、9E6、12F7、17F9和19D12为GR79-3肽段免疫获得的不同杂交瘤细胞。图2.GR79-4的杂交瘤细胞上清(抗体)针对棉花种子的Westernblot检测图谱；其中Marker为分子量标准，2D2、9C4、10D5和16C7为GR79-4肽段免疫获得的不同杂交瘤细胞。图3.胶体金试纸条检测转GR79-EPSPS基因棉花和非转基因棉花图谱；其中14表示第14号转GR79-EPSPS基因棉花材料不同单株检测结果，非转基因棉花为不含有GR79-EPSPS基因的野生型棉花材料。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种杂交瘤细胞对，其特征在于该杂交瘤细胞对包括独立存放的第一杂交瘤细胞株和第二杂交瘤细胞株；所述第一杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC No.13482；所述第二杂交瘤细胞株的保藏编号为：CGMCC No.13481。
【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞对，其特征在于该杂交瘤细胞对包括独立存放的第一杂交瘤细胞株和第二杂交瘤细胞株；所述第一杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNo.13482；所述第二杂交瘤细胞株的保藏编号为：CGMCCNo.13481。2.一种单克隆抗体对，其特征在于该单克隆抗体对包括独立存放的第一单克隆抗体和第二单克隆抗体；所述的第一单克隆抗体由第一杂交瘤细胞株产生；所述的第二单克隆抗体由第二杂交瘤细胞株产生；所述第一杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNo.13482；所述第二杂交瘤细胞株的保藏编号为：CGMCCNo.13481。3.权利要求1所述的杂交瘤细胞对在检测GR79-EPSPS转基因植物上的应用。4.权利要求2所述的单克隆抗体对在检测GR79-EPSPS转基因植物上的应用。5.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭三堆，张锐，孟志刚，梁成真，王远，孙国清，朱涛，林敏，陆伟，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，郭三堆，
类型：发明
国别省市：北京,11
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