Homer1单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了Homer1单克隆抗体及其应用。本发明专利技术提供两株能稳定分泌特异性识别Homer1蛋白的单克隆抗体Homer1 1B1及Homer1 1B3的杂交瘤细胞株，其保藏编号分别为CCTCC NO：C2017191和CCTCC NO：C2017190。利用本发明专利技术提供的单克隆抗体制备了用于检测Homer1蛋白的免疫检测工具，含Homer1 1B1及Homer1 1B3的免疫组化试剂盒，以及制备用于诊断Homer1蛋白相关性肿瘤的试剂盒。本发明专利技术所述单克隆抗体Homer1 1B1及Homer1 1B3可与Homer1蛋白特异性结合，而与细胞内其他蛋白无交叉反应，显著提高了Homer1蛋白免疫检测的特异性和敏感性。

Homer1 monoclonal antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
Homer1单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及Homer1的单克隆抗体，产生该抗体的杂交瘤细胞株，以及该抗体的免疫检测用途。
技术介绍
Homer蛋白是在细胞内信号转导过程中非常重要的一种骨架蛋白，它参与了许多神经细胞的活动，包括调节钙离子的平衡及学习与记忆过程中突触重塑的细胞骨架的构成等。Homer蛋白家族包括了三个成员，Homer1、Homer2和Homer3，他们通过外显子不同的剪接，有形成了多种亚型。所有的亚型都含有N-端的EVH1区域，该区域可以和mGluR、IP3R、TRPC等富含脯氨酸蛋白结合，长型Homer蛋白在C-端存在CC区域，通过CC区域Homer蛋白之间可以形成同源或异源二聚体，而短型的Homer不存在CC-区域，则不能形成二聚体，但可以通过其EVH1区域与长型Homer竞争与富含脯氨酸的受体蛋白结合，从而来调节mGluR、IP3R、TRPC等受体的功能。Homer1蛋白是一种首先被发现于神经突触后密度的骨架蛋白，近年来，研究表明Homer1蛋白在心脏、肾脏、乳腺等组织中均有广泛的表达。Homer1蛋白包括Homer1a、Homer1b及Homer1c等成员，Homer1a是一种短片段的即早蛋白，其含有与受体蛋白结合的位点，但缺少长片段Homer蛋白之间形成同源二聚体或异源二聚体的C-端片段，其通过与Homer1b或Homer1c等长片段蛋白竞争与mGluR、IP3R、TRPC等受体蛋白结合，来调节相关通路的活性，从而来调节细胞的活动。本课题组前期工作证实乳腺癌细胞高表达跨膜型tmTNF-α从而抵抗凋亡。我们近期的研究还发现，在不同乳腺癌细胞株和乳腺癌患者的肿瘤组织切片中，Homer表达水平与tmTNF-α的表达呈负相关。通过抗tmTNF-α单克隆抗体处理后的乳腺癌组织中肿瘤细胞明显减少，tmTNF-α下降，而Homer1蛋白水平明显上升，且Homer1蛋白表达水平与乳腺癌细胞的侵袭能力有显著的关系。申请者前期已经制备Homer家族成员（Homer1、2、3）的多克隆抗体用于检测样本中Homer1、2、3的表达状况。鉴于多克隆抗体自身的局限性，其灵敏度和特异性均不高。因此，研制出一种结合特异性高的抗Homer1的单克隆抗体具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供两株能稳定分泌特异性识别Homer1蛋白的单克隆抗体Homer11B1及Homer11B3的杂交瘤细胞株以及该两种单克隆抗体在制备用于检测Homer1蛋白的免疫检测工具中的应用。本专利技术的单克隆抗体效价高、特异性强，尤其是单克隆抗体Homer11B1能成功识别Homer1a蛋白，因此具有更广泛的应用空间。为实现上述目的本专利技术提供以下技术方案：在本专利技术的第一方面，提供分泌Homer1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏编号为CCTCCNO：C2017191和CCTCCNO：C2017190，其中保藏编号为CCTCCNO：C2017191的杂交瘤细胞株是His-Homer1b免疫小鼠后至尾血效价检测达1:25600后，加强免疫后进行细胞融合，His-Homer1b（110-354aa）肽段筛选获得，Homer1b对应的氨基酸序列为SEQNO:1，Homer1b（110-354aa）的氨基酸序列对应SEQNO:1的第110aa-354aa；其中保藏编号为CCTCCNO：C2017190的杂交瘤细胞株是His-Homer1b免疫小鼠后至尾血效价检测达1:25600后，加强免疫后细胞融合，His-sumo-Homer1b（130-180aa）筛选获得，Homer1b（130-180aa）的氨基酸序列对应SEQNO:1的第130aa-180aa。在本专利技术的第二方面，提供一种Homer1单克隆抗体Homer11B3，由编号为CCTCCNO：C2017190的杂交瘤细胞株分泌。在本专利技术的第三方面，提供一种Homer1单克隆抗体Homer11B1，由编号为CCTCCNO：C2017191的杂交瘤细胞株分泌。在本专利技术第四方面，提供单克隆抗体Homer11B1和Homer11B3在制备用于检测Homer1蛋白的免疫检测工具中的应用。优选地，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸。优选地，所述试剂盒为定量检测Homer1蛋白含量的双抗夹心酶联免疫（ELISA）试剂盒，优选地，Homer11B3作为包被酶标板的抗体，Homer11B1作为检测抗体。本专利技术还提供了上述单克隆抗体在制备用于诊断Homer1相关性肿瘤的病理诊断试剂盒中的应用。具体地，所述Homer1相关性肿瘤为乳腺癌。本专利技术筛选获得的能够识别Homer1天然蛋白不同位点的抗体对，具有特异性强的特点；在间接ELISA实验中，本专利技术抗体的效价达到1：1*106，具有效价较高的特点；通过免疫组织化学的方法，可以观察到本专利技术的Homer1单克隆抗体识别皮质细胞浆内的Homer1蛋白。对比市场上存在的同类抗体，本专利技术的单克隆抗体还成功识别Homer1a蛋白。Homer1a作为即早蛋白，是一种短型的Homer蛋白，通过竞争调节长片段Homer蛋白与靶蛋白的结合，调节相关信号通路的活性，在多种生理病理过程中发挥了重要作用。本专利技术的双抗夹心ELISA方法批内变异系数为9.4%，且热稳定性良好，其最低检测浓度为34.17pg/ml。因此本专利技术的单克隆抗体具有更广泛的应用空间。保藏信息用于保藏的杂交瘤细胞株的科学描述为:保藏单位全称:中国典型培养物保藏中心；保藏单位简称：CCTCC；保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2017年9月20日培养物名称（分类命名）：杂交瘤细胞株Homer11B3，保藏编号：CCTCCNO：C2017190；和培养物名称（分类命名）：杂交瘤细胞株Homer11B1，保藏编号：CCTCCNO：C2017191。附图说明图1为westernblot结果验证本专利技术单克隆抗体能特异性识别Homer1亚型蛋白，包括Homer1a、Homer1b、Homer1c,同时不识别Homer2、Homer3等其他Homer家族蛋白。图2为westernblot验证His-Sumo-Homer1b（130-180aa）重组蛋白对本专利技术的Homer11B3单克隆抗体进行肽段阻断的效果。图3为免疫组织化学法验证本专利技术的单克隆抗体对人脑组织的石蜡切片中Homer1蛋白的识别。图4为双抗夹心ELISA法检测标准品蛋白，并绘制标准品曲线。图5为使用本专利技术研制的Homer1双抗夹心试剂盒检测小鼠不同组织中的Homer1蛋白含量。具体实施方式通过以下详细说明结合附图可以进一步理解本专利技术的特点和优点。所提供的实施例仅是对本专利技术方法的说明，而不以任何方式限制本专利技术揭示的其余内容。以下将提供实施例详细说明Homer1单克隆抗体、特异性阻断肽段及Homer1双抗夹心ELISA试剂盒的具体制备过程。但本专利技术并不限于下述实例。未注明来源的实验用品均为市售。【实施例1】抗Homer1单克隆抗体的制备一、His-Homer1b(Genebank:NM_004272.4)、His-Homer1b（110-354aa）及His-Homer1b（130-180aa）重组表达载本文档来自技高网...

【技术保护点】
分泌Homer1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏编号为CCTCC NO：C2017191和CCTCC NO：C2017190，其中保藏编号为CCTCC NO：C2017191的杂交瘤细胞株是His‑Homer1b免疫小鼠后至尾血效价检测达1:25600后，加强免疫后进行细胞融合，His‑Homer1b（110‑354aa）肽段筛选获得，Homer1b对应的氨基酸序列为SEQ NO:1，Homer1b（110‑354aa）的氨基酸序列对应SEQ NO:1的第110aa‑354aa；其中保藏编号为CCTCC NO：C2017190的杂交瘤细胞株是His‑Homer1b免疫小鼠后至尾血效价检测达1:25600后，加强免疫后细胞融合，His‑sumo‑Homer1b（130‑180aa）筛选获得，Homer1b（130‑180aa）的氨基酸序列对应SEQ NO:1的第130aa‑180aa。

【技术特征摘要】
1.分泌Homer1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏编号为CCTCCNO：C2017191和CCTCCNO：C2017190，其中保藏编号为CCTCCNO：C2017191的杂交瘤细胞株是His-Homer1b免疫小鼠后至尾血效价检测达1:25600后，加强免疫后进行细胞融合，His-Homer1b（110-354aa）肽段筛选获得，Homer1b对应的氨基酸序列为SEQNO:1，Homer1b（110-354aa）的氨基酸序列对应SEQNO:1的第110aa-354aa；其中保藏编号为CCTCCNO：C2017190的杂交瘤细胞株是His-Homer1b免疫小鼠后至尾血效价检测达1:25600后，加强免疫后细胞融合，His-sumo-Homer1b（130-180aa）筛选获得，Homer1b（130-180aa）的氨基酸序列对应SEQNO:1的第130aa-180aa。2.一种Ho...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂建成，张献伟，沈鹤霄，吴春燕，柴红燕，陈浩，井宣，王美钧，保罗·沃利，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42