一种人EGFR基因敏感突变检测试剂盒制造技术

一种人EGFR基因敏感突变检测试剂盒由盒体A和盒体B组成。盒体A包括：1个带关门式磁扣盒盖的盒体、1个海绵衬底、1个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管、1个装有L858R检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有19外显子缺失检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有阳性质控物的1.5mL离心管、1个装有阴性质控物的1.5mL离心管、12个装有相同体积数字PCR反应预混液并带独立管盖的八连管。盒体B包括：1个带有盒盖的盒体、1张光滑玻璃纸衬底、1个卡槽隔盒、1个光盘卡槽、1张光盘、1套包括3组数字PCR芯片的组件。本实用新型专利技术试剂盒完全基于一种新的实验方法而设计，使得检测更加精确、方便、快捷。

A human EGFR gene sensitive mutation detection kit

A human EGFR gene sensitive mutation detection kit is composed of a box body A and a box body B. The box body A includes 1 box body with shutting down box cover, 1 sponge substrates, 1 1.5mL centrifuge tubes with ultra pure deionized water without nuclease, 1 centrifuge tubes with L858R detection primers and probe mixture, 1 1.5mL centrifuge tubes with 19 exons deletion detection primers and probe mixtures and 1 positive substances. The 1.5mL centrifuge tube for the control, 1 1.5mL centrifuge tubes with negative quality control, 12 tube with the same volume digital PCR reaction premixture and the independent tube cover. The box body B includes 1 boxes with box cover, 1 smooth glass paper substrates, 1 slot boxes, 1 CD-ROM slots, 1 CDs, 1 sets of 3 groups of digital PCR chips. The kit is entirely designed based on a new experimental method, making the detection more precise, convenient and fast.

【技术实现步骤摘要】
一种人EGFR基因敏感突变检测试剂盒
本技术涉及一种人EGFR基因敏感突变检测试剂盒，属于生物医学核酸检测试剂盒

技术介绍
近年来针对EGFR基因为分子靶点的癌症治疗的地位越来越受到国内外的重视。许多研究显示EGFR基因突变与TKI药物的疗效密切相关，其中以吉非替尼和厄洛替尼(erlotinib)为代表的EGFR-TKI药物取得了良好的疗效。EGFR基因突变已成为癌症患者是否对TKI药物敏感的强预测因子，其中外显子21上的替代突变(L858R)占EGFR基因总敏感突变的45％，外显子19缺失突变占EGFR基因总敏感突变的50％，二者总和已占突变检测的95％左右。美国FDA以及NCCN指南也已规定TKI药物的使用必须依据EGFR基因的检测结果，筛选最合适的患者进行有针对性的靶向治疗，以提高药物疗效。我国已有的“EGFR突变NSCLC治疗之中国共识”、“中国NSCLC患者EGFR基因突变检测专家共识”以及CFDA也规定TKI药物的治疗必须先进行EGFR基因突变的伴随检测，只有具有EGFR敏感突变的患者才能进行EGFR-TKI药物治疗。因此，检测EGFR基因的突变状态是决定患者是否能够应用EGFR-TKI药物治疗的先决条件。目前，基因突变检测方法主要有一代测序法和基于实时定量PCR的ARMS两种方法。一代测序又被称为Sanger测序，其检测周期长(需要1-2天)，且灵敏度低，仅能检测到10％左右的突变。ARMS法又称为扩增阻碍突变系统(AmplificationRefractoryMutationSystem，ARMS)，由于其检测方便快速，ARMS法现已成为基因突变检测最常用的方法，但其灵敏度仅为1％。随着液态活检的快速发展以及临床检测需求的不断细化，基因突变检测灵敏度的高要求已成为精准诊断的重要组成部分。但是目前市场上还没有一种完全适用于临床需求的能够快速简便以及灵敏准确的，可以同时检测EGFR外显子21上的替代突变(L858R)和外显子19缺失突变的试剂盒。为了有效提高EGFR基因突变检测灵敏度，非常有必要提供一种基于液态活检的EGFR基因突变高灵敏检测方法以满足越来越细化的临床精准医疗的迫切需求。
技术实现思路
针对现有EGFR检测试剂盒的不足，本技术提供了一种能够简单快速高灵敏度检测EGFR基因敏感突变的试剂盒。为了实现上述目的，本技术所采用的技术解决方案：一种人EGFR基因敏感突变检测试剂盒，其特征在于，包括两个盒体，盒体A包括：1个带有关门式磁扣盒盖的盒体、1个固定海绵衬底、1个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管、1个装有L858R检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有19外显子缺失检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有阳性质控物的1.5mL离心管、1个装有阴性质控物的1.5mL离心管、12个八连管；所述的八连管为每个管带有独立的管盖，并分别装有相同体积的数字PCR反应预混液。盒体B包括：1个带盒盖的盒体、1个光滑玻璃纸衬底、1个卡槽隔盒、1张光盘、1套数字PCR芯片；所述的1套数字PCR芯片包括3个独立的数字PCR芯片。其中，盒体A中所述关门式磁扣盒盖为独立的左盒盖和右盒盖两个盒盖组成，两个盒盖大小相同，左盒盖的左端设有磁扣，右盒盖的左端设有磁扣；所述的固定海绵衬底置于盒体底部，海绵衬底上具有打好的管孔；所述的1个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管、1个装有L858R检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有19外显子缺失检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有阳性质控物的1.5mL离心管、1个装有阴性质控物的1.5mL离心管、12个带独立管盖的八连管分别置于1个固定海绵衬底的管孔中。盒体B中所述光滑玻璃纸衬底为固定于盒体B的底部；所述的1个卡槽隔盒固定于盒体B的左侧，将盒体B分成两部分，隔盒上具有打好的卡槽，放置1张光盘；所述的光盘内存有数字PCR的校准文件；所述PCR芯片为具有1个独立透明硬塑料外壳包装，里面有3组数字PCR芯片及配件；所述3组数字PCR芯片的每个芯片底部分别贴有唯一的识别条形码。进一步，所述盒体A中的固定海绵衬底，优选使用白色。进一步，所述盒体B中的光滑玻璃纸衬底，优选使用无色PET材质的玻璃纸。本技术试剂盒是基于一种新的检测方法而设计，设计简单合理、储存操作方便、制作简易；本试剂盒中设置的关门式磁扣盒盖为左右互相重叠搭在一起，能有效阻隔外界污染源的影响。所用到的八连管内已装有检测用的数字PCR预混液，而且每个八连管的管盖都是独立开合的，因此可以防止配液及加样时反应管之间的交叉污染，使得检测操作更为简单方便。所用到的光滑PET玻璃纸可以有效避免数字PCR芯片包装底部与盒体底部的摩擦，减少荧光信号采集时的误差，保证了数字PCR芯片荧光信号读取时的准确性。所用到的光盘是本试剂盒非常独特的设计，是其他相关种类试剂盒所不具有的，光盘内存有数字PCR的校准文件，为检测数据的比对与归正提供了技术支持。同时，所用到的数字PCR芯片的每个芯片底部分别贴有唯一的条形码，也是本试剂盒独特的设计，检测前可以直接扫描条形码保存检测病人的信息及检测数据即可，使得检测更加方便快捷。附图说明图1是本技术一种人EGFR基因敏感突变检测试剂盒盒体A的结构示意图。其中：1、盒体；2、固定海绵衬底；3、盒盖1；4、磁扣搭件1；5、0.2mL离心管孔；6、带独立管盖的八连管#1-#8；7、带独立管盖的八连管#9-#12；8、连接于PCR管上的独立PCR管盖；9、盒盖2；10、磁扣搭件2；11、装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管；12、1.5mL离心管孔；13、装有L858R检测引物及探针混合物的1.5mL离心管；14、装有19外显子缺失检测引物及探针混合物的1.5mL离心管；15、装有阳性质控物的1.5mL离心管；16、装有阴性质控物的1.5mL离心管。图2是本技术一种人EGFR基因敏感突变检测试剂盒盒体B的结构示意图。其中：17、盒体；18、光滑玻璃纸衬底；19、卡槽隔盒；20、光盘卡槽；21、光盘；22、数字PCR芯片套件。图3是本技术一种人EGFR基因敏感突变检测试剂盒盒体B中数字PCR芯片结构示意图。其中：22-1、透明硬塑料外壳；22-2、芯片条形码；22-3、数字PCR配件槽；22-4、数字PCR芯片。具体实施方式下面结合附图和实施例对本技术做进一步描述：实施例1如图1所示，一种人EGFR基因敏感突变检测试剂盒的盒体A包括：盒体1、1个固定海绵衬底2、带有磁扣搭件4的盒盖3、带有磁扣搭件10的盒盖9、#1-#8号带独立管盖8的八连管6、#9-#12号带独立管盖8的八连管7、1个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管11、1个装有L858R检测引物及探针混合物的1.5mL离心管13、1个装有19外显子缺失检测引物及探针混合物的1.5mL离心管14、装有阳性质控物的1.5mL离心管15、装有阴性质控物的1.5mL离心管16。其中，所述的盒体A的盒盖3和盒体A的盒盖9为关门磁扣式左右互相重叠搭在一起，盒体A的盒盖3的左侧中部设置有磁扣搭件4以及盒体A的盒盖9的左侧中部设置有磁扣搭本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人EGFR基因敏感突变检测试剂盒，其特征在于，盒体由盒体A和盒体B组成，其盒体A特征在于，包括：1个带盒盖(3)和盒盖(9)的盒体(1)、1个海绵衬底(2)、1个装有无核酸酶的超纯去离子水的离心管(11)、1个装有L858R检测引物及探针混合物的1.5mL离心管(13)、1个装有19外显子缺失检测引物及探针混合物的1.5mL离心管(14)、1个装有阳性质控物的1.5mL离心管(15)、1个装有阴性质控物的1.5mL离心管(16)、12个装有相同体积数字PCR反应预混液的编号为#1—#8的带盖PCR八连管(6)和编号为#9—#12的带盖PCR八连管(7)；其盒体B特征在于，包括：1个盒体(17)、1张光滑玻璃纸衬底(18)、1个卡槽隔盒(19)、1个光盘卡槽(20)、1张光盘(21)、1套数字PCR芯片(22)。

【技术特征摘要】
1.一种人EGFR基因敏感突变检测试剂盒，其特征在于，盒体由盒体A和盒体B组成，其盒体A特征在于，包括：1个带盒盖(3)和盒盖(9)的盒体(1)、1个海绵衬底(2)、1个装有无核酸酶的超纯去离子水的离心管(11)、1个装有L858R检测引物及探针混合物的1.5mL离心管(13)、1个装有19外显子缺失检测引物及探针混合物的1.5mL离心管(14)、1个装有阳性质控物的1.5mL离心管(15)、1个装有阴性质控物的1.5mL离心管(16)、12个装有相同体积数字PCR反应预混液的编号为#1—#8的带盖PCR八连管(6)和编号为#9—#12的带盖PCR八连管(7)；其盒体B特征在于，包括：1个盒体(17)、1张光滑玻璃...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚建，冯晓燕，林挺，王文利，于祥春，
申请(专利权)人：北京爱普拜生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：北京,11