一种多内参结合序贯概率比检验分析HER2基因拷贝数变异的试剂盒及使用方法技术

本发明专利技术涉及一种基于数字PCR方法，并利用多内参结合序贯概率比检验(SPRT)分析HER2基因拷贝数变异的试剂盒及方法。该试剂盒包含数字PCR酶预混液、用于检测靶基因HER2及内参CEP17及EIF2C1的引物探针混合液、荧光素钠盐溶液和ddH

【技术实现步骤摘要】
一种多内参结合序贯概率比检验分析HER2基因拷贝数变异的试剂盒及使用方法
本专利技术涉及一种多内参结合序贯概率比检验分析HER2基因拷贝数变异的试剂盒及使用方法，属于生物医学核酸检测

技术介绍
人表皮生长因子受体2(HER2)是一种编码具有酪氨酸激酶活性的原癌基因，位于17号染色体上。针对HER2基因拷贝数变异的检测是判断乳腺癌预后和制定有效治疗方案的依据(包括激素治疗和化疗的参考指标)，也是是否可以采取靶向药物治疗的先决条件。目前医院广泛开展的HER2基因拷贝数变异的检测方法主要是免疫组化(IHC)方法和荧光原位杂交(FISH)方法。临床数据表明，IHC方法不能准确地判定HER2基因拷贝数变异的状态，结果常常显示将近50％的样本存在IHC判定为2+的情况，之后必须要使用FISH方法进行复检才能确定HER2基因拷贝数变异的状态。另外，还存在10％左右IHC判定为3+的样本再经过FISH检测后，却显示为HER2基因拷贝数变异为阴性的结果，这样的结果不仅会造成多次重复检测的经济损失，而且耽误了患者使用其他治疗方案进行治疗。同时，当本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多内参结合序贯概率比检验分析HER2基因拷贝数变异的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下四种组分：数字PCR酶预混液、引物探针混合液、荧光素钠盐溶液和ddH

【技术特征摘要】
1.一种多内参结合序贯概率比检验分析HER2基因拷贝数变异的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下四种组分：数字PCR酶预混液、引物探针混合液、荧光素钠盐溶液和ddH2O；所述引物探针混合液由SEQIDNO：1至SEQIDNO：9所示的引物核苷酸序列以及探针核苷酸序列的溶液组成；所述每种引物核苷酸序列溶液的浓度为10μM，所述每种探针核苷酸序列溶液的浓度为5μM；所述荧光素钠盐溶液的浓度为1μM。


2.一种多内参结合序贯概率比检验分析HER2基因拷贝数变异试剂盒的使用方法，其特征在于：提取待测样本的DNA作为模板，以SEQIDNO：1和SEQIDNO：2、SEQIDNO：3和SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6所示的引物核苷酸序列作为扩增引物，并加入SEQIDNO：7、SEQIDNO：8、SEQIDNO：9所示的探针核苷酸序列作为检测探针，并加入数字PCR酶预混液、荧光素钠盐溶液和ddH2O进行数字PCR扩增，对扩增结果进行拷贝数及微滴数统计并将HER2基因的拷贝数简写为H、CEP17基因的拷贝数简写为C、EIF2C1基因的拷贝数简写为EI，计算每个样本C/EI比值以及群体样本的C/EI的平均值并统计群体样本的C/EI比值的95％的置信区间，若某个样本的C/EI比值处于置信区间内，则判定为HER2基因所在的17号染色体为正常，若某个样本的C/EI比值处于置信区间之外，则判定为HER2基因所在的17号染色体疑似异常。


3.一种多内参结合序贯概率比检验分析HER2基因拷贝数变异试剂盒的使用方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)提取待测样本的DNA作为模板，以SEQIDNO：1和SEQIDNO：2、SEQIDNO：3和SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6所示的引物核苷酸序列作为扩增引物，并加入SEQIDNO：7、SEQIDNO：8、SEQIDNO：9所示的探针核苷酸序列作为检测探针，并加入数字PCR酶预混液、荧光素钠盐溶液和ddH2O进行数字PCR扩增，对扩增结果进行拷贝数及微滴数统计并将HER2基因的拷贝数简写为H、CEP17基因的拷贝数简写为C、EIF2C1基因的拷贝数简写为EI、HER2基因的阳性微滴数简写为dH、CEP17基因的阳性微滴数简写为dC、扩增的总微滴数简写为dTotal、仅包含HER2的阳性微滴数简写为NHER2、仅包含CEP17的阳性微滴数简写为NCEP17、仅包含HER2的阳性微滴占比简写为Pr、HER2扩增的阈值线简写为T、群体样本微滴中的CEP17拷贝数的平均值简写为MCEP...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚建，于祥春，高敏，冯晓燕，林挺，
申请(专利权)人：北京爱普拜生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11