一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物化学分析技术领域，公开了一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用，包括PCR反应组件、PCR产物纯化组件、PCR测序组件封板覆膜、产品说明书；所述预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法包括：对服用药物的胃肠间质瘤患者进行静脉血抽取；用酚氯仿法抽提基因组DNA提取；设定PCR扩增、纯化、测序的反应体系和反应条件，反应结束后进行PCR测序；分析服用药物的胃肠间质瘤患者胃肠间质瘤游离肿瘤细胞情况，得到该药物对胃肠间质瘤的影响与否的结论。本发明专利技术提供的试剂盒设计合理，能够实现对胃肠间质瘤游离肿瘤细胞的精确获取，由此得到胃肠间质瘤耐药性与否的结论，使用方便且成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用
本专利技术属于生物化学分析
，尤其涉及一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用。
技术介绍
目前，胃肠间质瘤(GastrointestinalStromalTumors，GIST)是一类起源于胃肠道间叶组织的肿瘤，占消化道间叶肿瘤的大部分，由于肿瘤对常规放疗不敏感，手术切除曾是治疗GIST唯一有效的方法，对于肿瘤进展转移或术后复发而失去手术机会的患者，其中位生存期仅6-18个月，5年生存率小于10％。本世纪以来，随着现代分子生物学技术在GIST临床诊断治疗中的广泛应用，尤其以伊马替尼为代表的分子靶向药物的出现和普及，使GIST患者的预后得到显著改善。靶向治疗成为肿瘤治疗的热门，目前，伊马替尼用于治疗晚期GIST及GIST术后辅助治疗的显著疗效以得到广泛共识，但同时伊马替尼的原发性和继发性耐药问题也日益受到研究者关注，成为近期GIST研究的热点。目前，伊马替尼和舒尼替尼是用于治疗GIST的主要靶向药物，伊马替尼，酪氨酸激酶抑制剂，是一种小分子蛋白激酶抑制剂，它具有阻断一种或多种蛋白激酶的作用。临床用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法，其特征在于，所述预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法包括以下步骤：/n步骤一，对服用药物的胃肠间质瘤患者进行静脉血抽取；/n步骤二，用酚氯仿法抽提基因组DNA提取；使用试剂盒中PCR反应组件，依据单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物，设定PCR扩增的反应体系和反应条件，进行PCR扩增；/n所述用酚氯仿法抽提基因组DNA提取包括：/n(2.1)将血液中加入800μl的抽提缓冲液，摇匀，形成匀浆状；将匀浆液转移至1个2ml离心管中，加入800ul的Proteinase K以及4ul蛋白酶K，55℃水浴保温过夜；/n(2.2)加入等体积平衡酚，室温温...

【技术特征摘要】
1.一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法，其特征在于，所述预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法包括以下步骤：
步骤一，对服用药物的胃肠间质瘤患者进行静脉血抽取；
步骤二，用酚氯仿法抽提基因组DNA提取；使用试剂盒中PCR反应组件，依据单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物，设定PCR扩增的反应体系和反应条件，进行PCR扩增；
所述用酚氯仿法抽提基因组DNA提取包括：
(2.1)将血液中加入800μl的抽提缓冲液，摇匀，形成匀浆状；将匀浆液转移至1个2ml离心管中，加入800ul的ProteinaseK以及4ul蛋白酶K，55℃水浴保温过夜；
(2.2)加入等体积平衡酚，室温温和振荡，摇匀，10-15min；
(2.3)于4℃下离心8min，取上清液，再利用按1：1混合的酚与氯仿在此进行抽提，并离心；
(2.4)取离心后的上清液加入等体积的氯仿和异戊醇；
(2.5)取上清液加入2倍体积的冷冻后的无水乙醇，混合均匀；离心；
(2.6)利用冷冻后的70％的乙醇对离心沉淀洗涤3次，即可得高纯度的基因组DNA；
步骤三，使用试剂盒中的PCR产物纯化组件，设定PCR纯化反应体系和反应条件，利用PCR纯化试剂进行PCR纯化；
所述设定PCR纯化反应体系和反应条件包括：
设定PCR纯化反应体系为总体积30ul，包含PCR产物26ul，1U/ulSAP酶1.0ul；10U/ulExoI酶0.5ul；ddH2O4.125ul；
在PCR扩增仪上进行反应，反应条件为37℃反应20min，68℃反应20min；
步骤四，使用检测试剂盒中的PCR测序组件，依据DNA测序引物，设定PCR测序体系和测序条件，反应结束后放入测序仪进行PCR测序；
所述设定PCR测序体系和测序条件包括：
反应总体系为5ul，包括PCR纯化产物1ul，25％BigDyemix1ul；3.2uMDNA测序引物1ul；ddH2O2ul；
在扩增仪上进行反应，反应条件为98℃反应2min，后25个循环96℃反应30s，55℃反应1min，60℃反应5min；
步骤五，依据测序结果，分析服用药物的胃肠间质瘤患者胃肠间质瘤游离肿瘤细胞情况，由此得到该药物对胃肠间质瘤的影响与否的结论。


2.如权利要求1所述的预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法，其特征在于，步骤一中，所述服用药物的胃肠间质瘤患者服用的药物为伊马替尼和舒尼替尼中的一种或是两种的组合物。


3.如权利要求1所述的预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用方法，其特征在于，步骤二中，所述设定PCR扩增的反应体系包括：
设定PCR扩增的反应体系为：10×反应缓冲液2.0ul；10mMdNTPmix1.0μl；5U/ulTaqDNA聚合酶0.15ul；DNA模板1ul；20uM特异性引物对，每条引物各0.25ul；ddH2O补足20ul；
设定PCR扩增的反应条件为：94℃4min变性酶激活，95℃30sec变性，50℃30sec退火，72℃1min延伸；25个循环，最后69℃延长3min。


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【专利技术属性】
技术研发人员：余昆，张丽娟，张旋，李科，李振徽，邓有晓，张龄方，
申请(专利权)人：云南省肿瘤医院昆明医科大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：云南;53