用于宫颈高级别病变和宫颈癌早期检测的组合物及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了用于宫颈高级别病变和宫颈癌早期检测的组合物及试剂盒，用于宫颈高级别病变和宫颈癌早期检测的组合物，包括FAM19A4基因甲基化引物、甲基化位点对应的探针和甲基化封闭引物，JAM3基因甲基化引物、甲基化位点对应的探针和甲基化封闭引物，PAX1基因甲基化引物、甲基化位点对应的探针和甲基化封闭引物，内参基因GAPDH的1对引物和甲基化位点对应的探针。采用多重多通道荧光和封闭技术手段，通过特异性引物探针与甲基化序列准确识别，加上多条封闭引物的作用将甲基化模板充分释放出来，以及优化的特殊的甲基化DNA聚合酶，对FAM19A4、JAM3和PAX1基因甲基化位点精确检测。

【技术实现步骤摘要】
用于宫颈高级别病变和宫颈癌早期检测的组合物及试剂盒
本专利技术属于核酸体外诊断的
，具体涉及一种将特定的基因甲基化标志物应用于宫颈高级别病变和宫颈癌早期检测的组合物及试剂盒。
技术介绍
目前，宫颈癌是世界女性第四大易发癌种，据统计，2018年全球宫颈癌新发病例570,000例，死亡311,000例，宫颈癌成为多数中低收入国家女性癌症死亡的主要原因。宫颈癌病因明确，高危型人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)持续感染是必要条件，由宫颈癌前病变发展至浸润性宫颈癌的过程可长达十年，因而早期进行宫颈癌筛查可以有效阻断癌前病变的进展。近几年宫颈癌的发病趋势愈发年轻化，小于35岁女性发病率明显上升，约占新发病例的30％，另有数据显示，宫颈癌的发病率存在地理差异，农村居民的发病率高于城市居民，我国中部地区较东、西部发病率高，这些差异可能部分归因于缺乏对宫颈癌的有效筛查及防治措施。近年来，随着基因检测和基因编辑技术的发展、预防性HPV疫苗的推广以及治疗性疫苗的开发研究，为宫颈癌早期筛查及预防指明了新的方向。r>人乳头瘤病毒(H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于宫颈高级别病变和宫颈癌早期检测的组合物，其特征在于，包括FAM19A4基因甲基化引物、JAM3基因甲基化引物和PAX1基因甲基化引物和1对内参基因GAPDH引物，引物序列如下：/nFAM19A4基因甲基化正向引物F：SEQ ID NO.1，/nFAM19A4基因甲基化反向引物R：SEQ ID NO.2；/nJAM3基因甲基化正向引物F：SEQ ID NO.3，/nJAM3基因甲基化反向引物R：SEQ ID NO.4；/nPAX1基因甲基化正向引物F：SEQ ID NO.5，/nPAX1基因甲基化反向引物R：SEQ ID NO.6；/n内参基因GAPDH正向引物F：SEQ ID NO...

【技术特征摘要】
1.一种用于宫颈高级别病变和宫颈癌早期检测的组合物，其特征在于，包括FAM19A4基因甲基化引物、JAM3基因甲基化引物和PAX1基因甲基化引物和1对内参基因GAPDH引物，引物序列如下：
FAM19A4基因甲基化正向引物F：SEQIDNO.1，
FAM19A4基因甲基化反向引物R：SEQIDNO.2；
JAM3基因甲基化正向引物F：SEQIDNO.3，
JAM3基因甲基化反向引物R：SEQIDNO.4；
PAX1基因甲基化正向引物F：SEQIDNO.5，
PAX1基因甲基化反向引物R：SEQIDNO.6；
内参基因GAPDH正向引物F：SEQIDNO.7，
内参基因GAPDH反向引物R：SEQIDNO.8。


2.根据权利要求1所述的用于宫颈高级别病变和宫颈癌早期检测的组合物，其特征在于，还包括FAM19A4基因的甲基化位点对应的Taqman探针、JAM3基因的甲基化位点对应的Taqman探针、PAX1基因的甲基化位点对应的Taqman探针和内参基因GAPDH对应的Taqman探针，探针序列如下：
FAM19A4基因探针：FAM-SEQIDNO.9-BHQ1；
JAM3基因探针：ROX-SEQIDNO.10-BHQ2；
PAX1基因探针：CY5-SEQIDNO.11-BHQ2；
内参基因GAPDH探针：VIC-SEQIDNO.12-BHQ1。


3.根据权利要求1所述的用于宫颈高级别病变和宫颈癌早期检测的组合物，其特征在于，还包括FAM19A4基因甲基化封闭引物、JAM3基因甲基化封闭引物和PAX1基因甲基化封闭引物，封闭引物序列如下：
FAM19A4基因甲基化封闭引物1：SEQIDNO.13-C3spacer；
FAM19A4基因甲基化封闭引物2：SEQIDNO.14-C3spacer；
JAM3基因甲基化封闭引物1：SEQIDNO.15-C3spacer；
JAM3基因甲基化封闭引物2：SEQIDNO.16-C3spacer；
PAX1基因甲基化封闭引物1：SEQIDNO.17-C3spacer；
PAX1基因甲基化封闭引物2：SEQIDNO.18-C3spacer。


4.根据权利要求1所述的用于宫颈高级别病变和宫颈癌早期检测的组合物，其特征在于，进行一次检测时，100μmol/L的FAM19A4基因正向引物F加入量为0.10-0.50μL，100μmol/L的FAM19A4基因反向引物R加入量为0.10-0.50μL，100μmol/L的JAM3基因正...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘沛，王林海，王紫芸，
申请(专利权)人：北京起源聚禾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11