一种新的多肽--磷酸酯酶30和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－磷酸酯酶３０，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的磷酸酯酶３０的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——磷酸酯酶30，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。DNA聚合酶是生物基因组复制和修复所必须的酶(Komberg,A.and Baker,T.1992DNA replication 2ndedition WH Freeman.San Francisco)。尽管它们的功能是一致的，但是这些酶以不同的方式存在时，是非常不一样的(Mushegian,A.R.andKoonn,E.V.1996Proc.Natl ACAD.Sci.USA.93 10268-10273)。DNA聚合酶按照它们大亚基或催化核甘酸聚合反应的结构域序列的相似性，可以分为四个不同的DNA聚合酶超家族。DNA聚合酶蛋白质序列分析发现，原来未确认的保守结构域属于两个不同的磷酸酯酶超家族。细菌DNA聚合酶Ⅲ的α亚基和两个不同的X DNA聚合酶家族蛋白都包含一个N端结构域，该结构域定义为一个新的具有酶活力的超家族，取名为聚合酶和组氨酸磷酸酯酶PHP。PHP超家族催化位点由四个包含保守组氨酸残基的基元序列，这些组氨酸残基可能参与依赖金属原子的磷酸酯的水解催化反应。PHP结构域在所有的细菌DNA聚合酶Ⅲα亚基中是高度保守的，但是在蛋白细菌和霉浆菌中，该保守的基元序列是不同的，暗示酶活性的丧失。另一个保守结构域，发现于古细菌DNA聚合酶Ⅱ的小亚基和真核生物DNA聚合酶α、δ亚基，都属于类似钙调磷酸酶磷酸酯酶超家族，该家族集合了各种各样的磷酸酯酶和核酸酶。在古细菌DNA聚合酶亚基中，磷酸酯酶的酶活性需要保守基元序列的完整性，但是在它们的真核生物同系物中，情况通常是相反的。有一个假说提出细菌和古细菌DNA聚合酶本身就具有磷酸酯酶活性，因为在核甘酸聚合过程中出现了水解的焦磷酸。有人提出，焦磷酸水解是推动核甘酸聚合的动力。磷酸酯酶结构域以及断的催化基元序列可能是DNA聚合酶全酶其它亚基的一个变构物，调节功能域。如果是这样的话，焦磷酸水解可以被一个停滞的磷酸酯酶水解，并且是细菌PHP超家族的成员。细菌DNA聚合酶Ⅲ的α亚基和DNA聚合酶X家族成员有统计学意义的序列相似性，即都包含PHP结构域。这两个家族的球状结构域有极大的相似性。该球状结构域有别于已知的X家族核甘酸转移酶结构域，并且可能和细菌DNA聚合酶Ⅲ的功能有关系。聚合酶反应包括单个核甘酸从脱氧核甘酸三磷酸转移至一个引物，伴随一个无机磷酸的失去。PHP结构域可能和负责核甘酸聚合的功能域融合在一起担当磷酸化任务。本专利技术人的多肽同样具有PHP结构域，属于磷酸酯酶超家族，同时推测其具有相似的生物学功能。由于如上所述磷酸酯酶30蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的磷酸酯酶30蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新磷酸酯酶30蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——磷酸酯酶30以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码磷酸酯酶30的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码磷酸酯酶30的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产磷酸酯酶30的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——磷酸酯酶30的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——磷酸酯酶30的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与磷酸酯酶30异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中19-840位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2305位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制磷酸酯酶30蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与磷酸酯酶30蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于磷酸酯酶30表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与磷酸酯酶30结合时，一种可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质活性的分子。激动剂可以包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合磷酸酯酶30的分子。“拮抗剂”或“抑制物”是指当与磷酸酯酶30结合时，一种可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－磷酸酯酶３０，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博道基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]