一种新的多肽—人谷氨酰胺富集因子56和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－－人谷氨酰胺富集因子５６，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如胚胎及组织发育不良；神经脊突细胞大动脉形态异常；造骨功能障碍；爱滋病等免疫缺陷型疾病；冠心病；各种肝脏疾病；各种肿瘤及癌症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人谷氨酰胺富集因子５６的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--人谷氨酰胺富集因子56，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。真核转录因子是近十几年来发现的一类在真核基因转录过程中起调节作用的蛋白质。它们在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录。编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。转录因子对基因表达的调控主要通过转录因子与特定的DNA序列结合、转录因子间的相互作用及转录因子与常规转录机构的相互作用在完成。对哺乳动物中的多种转录因子进行研究发现，各种转录因子中均含有80-100个左右氨基酸残基组成的长度不等的DNA结合结构域。DNA结合结构域大体上又有四种花式结构α螺旋-转角-α螺旋；Cys-His锌指；Cys-Cys锌指；Leu-拉链。花式结构对于维持整个结构域的结构及转录因子发挥正常的生物学功能都是十分重要的。肝细胞核因子3／fork head(HNF／fkh)蛋白家族在生物体内普遍存在。近几年，人们已从酵母至人体中分别克隆得到了众多该蛋白家族的成员。进一步的研究发现，该家族的成员均含有一由84-105个氨基酸残基组成的长度不等的特征性结构域---HNF／fkh结构域。HNF／fkh蛋白家族成员按其结构域原始序列的不同又可分为几个不同的亚类，不同亚类的家族成员除DNA结合结构域高度保守外，其余区域均没有明显的相似性(Chuan li，Philip W．Tucker；Proc．Natl．Acad．Sci．USA 1993，9011583-11587)。HNF／fkh结构域为DNA蛋白结合结构域中的一种，其在生物体内主要参与与特定的DNA序列结合以调控各种不同基因的表达，并使其发挥正常的生物学功能。研究发现，HNF／fkh蛋白家族的成员在生物体内具有许多重要的生物学功能，其与胚胎发育、细胞分化和增殖、各种器官形成、爱滋病等免役缺陷型疾病、冠心病、各种肝脏疾病及各种肿瘤、癌症的发生均有一定的关系(DaSliva L，Kirken RA et al．，Gene 199822135-142；Frank S，Zoll B；DNA Cell Biol 1998 17679-88)。HNF／fkh结构域由10个独立的结构单位组成。其N末端有一钩状结构，后跟两个亲水性螺旋结构。这两个螺旋结构被一转角结构分开，既DNA结合结构域花式结构中的α螺旋-转角-α螺旋结构。其中，螺旋结构中几个保守的氨基酸残基形成了两个疏水性中心，这两个疏水性区域与蛋白间相互作用及HNF／fkh结构域的稳定性有关。第二个α螺旋中唯一的T23残基为CK-2激酶的识别位点，这一位点的磷酸化与去磷酸化可能直接影响DNA的结合活性及HNF／fkh结构域二级结构的形成。同时，这一α螺旋还被证实为一识别螺旋，与DNA的识别及结合有关，其外侧面是蛋白与DNA结合专一性的主要决定因素；该花式结构后接一个芳香族残基及第三个亲水性螺旋结构，形成了结构域的中心部分；在结构域的C末端含有两个长度可变的loop结构，其两侧由七个氨基酸残基组成的螺旋后接一短核苷酸链组成。这一C末端的短核苷酸链是结构域与DNA相互作用的区域，这一结构域中的钩状结构可能直接参与蛋白与DNA的相互作用(Chuanli，Philip W．Tucker；Proc．Natl．Acad．Sci．USA 1993，9011583-11587)。由上可知，该结构域在转录因子与特定DNA序列相互作用，调节各种基因的表达过程中起着重要的作用。本专利技术的人的基因与鼠谷氨酰胺富集因子基因QRF-1在蛋白水平上有98％的同源性。且两者核甘酸序列均含有HNF／fkh蛋白家族的特征性结构域---HNF／fkh结构域(一DNA蛋白结合结构域)。基于以上各点，故认为本专利技术的新基因为人谷氨酰胺富集因子基因，命名为hQRF-1。并以此推断其与QRF-1相似，同为HNF／fkh蛋白家族的成员，并具有相似的生物学功能。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--人谷氨酰胺富集因子56以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人谷氨酰胺富集因子56的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人谷氨酰胺富集因子56的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人谷氨酰胺富集因子56的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--人谷氨酰胺富集因子56的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--人谷氨酰胺富集因子56的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人谷氨酰胺富集因子56异常相关的疾病的方法。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的人谷氨酰胺富集因子56，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。人谷氨酰胺富集因子56的特征是含有HNF／fkh蛋白家族84-105个氨基酸残基组成的特征性结构域---HNF／fkh结构域。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少98％相同性(a)编码上述人谷氨酰胺富集因子56的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中27-1547位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1580位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。下列附图用于说明本专利技术的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本专利技术范围。附图说明图1是本专利技术人谷氨酰胺富集因子56和鼠谷氨酰胺富集因子的氨基酸序列同源性比较图。上方序列是人谷氨酰胺富集因子56，下方序列是鼠谷氨酰胺富集因子。相同氨基酸在两个序列间用单字符氨基酸表示，相似氨基酸用“+”表示。图2为分离的人谷氨酰胺富集因子56的聚丙烯酰胺凝胶电泳图(SDS-PAGE)。55．7kDa为蛋白质的分子量。箭头所指为分离出的蛋白条带。如本专利技术所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的人谷氨酰胺富集因子56”是指人谷氨酰胺富集因子56基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化人谷氨酰胺富集因子56。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。人谷氨酰胺富集因子56多肽的纯度能用氨基酸序列分析。本专利技术提供了一种新的多本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人谷氨酰胺富集因子６５，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博道基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]