干燥转谷氨酰胺酶组合物制造技术

本发明专利技术涉及干燥转谷氨酰胺酶组合物，所述组合物可通过将包含转谷氨酰胺酶、盐和至少一种另外的选自糖、氨基酸和缓冲液的组分的含水组合物冻干或喷雾干燥而获得，其中含水组合物中盐的浓度范围为5‑100 mM。在进一步的方面，本发明专利技术涉及制备所述干燥转谷氨酰胺酶组合物的方法、复溶溶液、药物组合物以及治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2009年4月20日、申请号为200980124151.5、专利技术名称为“干燥转谷氨酰胺酶组合物”的专利技术专利申请的分案申请。专利
本专利技术涉及转谷氨酰胺酶组合物，具体地讲是凝血因子XIII的稳定的冻干或喷雾干燥组合物，而且还涉及制备所述组合物的方法、复溶溶液、药物组合物以及治疗方法。专利技术背景转谷氨酰胺酶是Ca2+依赖性酶，该酶催化蛋白质中的谷氨酰胺侧链γ-甲酰胺基与赖氨酸侧链ε-氨基之间形成异肽键。转谷氨酰胺酶存在于细胞外和细胞内。转谷氨酰胺酶的实例包括因子XIII、表皮转谷氨酰胺酶、II型转谷氨酰胺酶(组织型转谷氨酰胺酶、肝转谷氨酰胺酶)和I型转谷氨酰胺酶(角质形成细胞转谷氨酰胺酶)。凝血因子XIII(FXIII)是血浆转谷氨酰胺酶，亦称为“血纤维连接酶”和“血纤蛋白稳定因子”，其在血浆中的循环浓度为20微克/ml。该蛋白质在血浆中以由两个A亚基和两个B亚基组成的四聚体(A2B2)存在。每个亚基的分子量约为80000Da，整个蛋白质的分子量约为330000Da。A亚基含有转谷氨酰胺酶催化部位，而B亚基没有催化活性，但是却起着结构蛋白的作用，保护A亚基不被清除。因子XIII的活化取决于凝血酶和Ca2+。凝血酶在A亚基Arg37的C端侧切割，从而释放出活化肽(A亚基的残基1-37)和B亚基，留下活性形式的A2二聚体。活化的FXIII A2亚基(FXIIIa)是FXIII的催化活性形式。FXIII酶是凝血级联中被激活的最后一个酶，其作用是使α-血纤
蛋白链与γ-血纤蛋白链交联，形成对血纤蛋白溶解的抗性提高的更牢固的凝块。此外，多种抗纤维蛋白溶解、促止血和黏附蛋白交联成凝块，因此提供牢固的血纤蛋白结构，该结构对纤维蛋白溶酶和其它蛋白水解酶溶解的机械阻力增强。在许多情况下，市售可得的纯或部分纯的转谷氨酰胺酶或因子XIII制品含有添加的稳定剂，例如人血清白蛋白(HSA)。蛋白质稳定剂的使用尚有疑问，因为当给予患者时，其降低蛋白质比活，增加蛋白质负荷，并且可能干扰纯度评价。还可能使蛋白质制品产生免疫原性。蛋白质稳定剂的这些缺点使得它们特别不利于稳定非常纯的蛋白质(例如重组蛋白)。另外，当加入例如白蛋白时，蛋白质稳定剂的使用可能会造成被病毒抗原污染。自胎盘或血浆分离FXIII或者新鲜冰冻血浆形式的FXIII多年来一直被用来治疗因子XIII缺陷症。然而，这些制剂受含有外源蛋白质的缺点以及与之相连的所有问题(例如不利的免疫原性)所困。目前可采用重组DNA技术来制备转谷氨酰胺酶和因子XIII。本文所使用的rFXIII是指重组因子XIII。然而迄今为止，市场上尚无市售的rFXIII产品。用于治疗的蛋白质制品中的组合物和活性必须在相对较长的时间内处于稳定。在溶液中几乎不能达到这种稳定性，因此，这类产品通常以干燥状态销售。适度的冷冻干燥(冻干)是将这类产品干燥的精选方法之一。然而，即使当采用这种方法时，也难以得到满足完整性和持久性需要的稳定制品。例如，转谷氨酰胺酶或因子XIII溶液的冷冻干燥可能导致活性明显下降以及纯度损失。例如，冷冻干燥的因子XIII的另一个问题是由因子XIII的降解产物造成的，因子XIII的降解产物即所谓的非蛋白酶水解活化型(FXIIIa°)，亦称为前激活因子XIII。一般认为FXIIIa°会出现严重的毒性风险，注射FXIIIa°可能引起潜在的不良副作用。因此，需要使转谷氨酰胺酶或因子XIII制剂稳定以免形成非蛋白酶水解活
化产物。本领域已知各种干燥FXIII组合物。下面公开的是冻干FXIII组合物的公开内容的实例。WO2002/36155披露了可以用1mM EDTA、10mM甘氨酸、2％蔗糖的水溶液，或者用20mM组氨酸、3％(重量/体积)蔗糖、2mM甘氨酸和0.01％(重量/体积)聚山梨醇酯(pH 8.0)来制备冻干FXIII组合物。US 6204036(Aventis Behring)涉及稳定的冻干转谷氨酰胺酶制剂，所述制剂包含至少一种选自D-氨基酸和L-氨基酸及其盐、衍生物、类似物和二聚体、糖和糖醇、表面活性成分和还原剂的添加剂，前提条件是添加剂不是甘氨酸，也不是精氨酸，其中所述制剂不含蛋白质稳定剂，且其中所述制剂在适用于胃肠外给药的含水溶剂中是溶解的，并无任何浊度。然而，上述这些制剂可能受上述高水平非蛋白酶水解活化的因子XIII的缺点所困，一般认为这有碍于这些制剂的临床和商业可行性。因此显而易见的是，非常需要具有低水平非蛋白酶水解活化产物的稳定的干燥转谷氨酰胺酶和因子XIII制剂。而且，这类制剂不需要添加蛋白质稳定剂，例如HSA。专利技术概述本专利技术基于出乎意料的发现，即就纯度和前激活转谷氨酰胺酶的形成而言，盐(例如一价盐)对干燥转谷氨酰胺酶(例如因子XIII)组合物具有明显的稳定效应或作用。这种效应是干燥状态特有的，并且对于生产稳定的商品特别重要。在一个方面，本专利技术提供干燥转谷氨酰胺酶组合物，所述组合物可通过将含水组合物冻干或喷雾干燥而获得，所述含水组合物包含转谷氨酰胺酶、盐和至少一种另外的选自糖、氨基酸和缓冲液的组分，其中含水组合物中盐的浓度范围为5-100mM。在又一个方面，本专利技术提供制备所述干燥转谷氨酰胺酶组合物、复溶溶液、药物组合物的方法以及治疗方法。本专利技术的其它目的、特征和优势从下面的专利技术详述来看是显而易见的。然而，应当了解的是，专利技术详述和具体实施例虽然提供本专利技术的优选实施方案，但只是通过实例给出，因为从专利技术详述来看，本专利技术的精神和范围内的各种变动和修改对于本领域技术人员是显而易见的。附图描述图1：蔗糖和NaCl水平的评价。25mMNaCl对保存于40℃的样品的AIE-HPLC纯度的作用的Modde分析。图2：NaCl和组氨酸水平的全析因研究。25℃rFXIIIa°数据的Modde分析。图3：NaCl和组氨酸水平的全析因研究。AIE-HPLC纯度数据的Modde分析。定义本专利技术的术语“前激活”或“非蛋白酶水解活化”转谷氨酰胺酶是指不是蛋白酶水解激活的转谷氨酰胺酶，例如当因子XIII在凝血酶(凝血酶具有蛋白水解切割FXIII的能力)不存在时被激活，便被称为非蛋白酶水解活化；有关参考文献可参见例如Polgar J.等，Biochem J 1990；267：557-60。Muszbek L.等，Thrombosis Research 94(1999)271-305。作为FXIII的降解产物的非蛋白酶水解活化因子XIII(FXIII°)不利于FXIII药物组合物的效力(viability)，因为一般认为这种降解产物会出现严重的毒性风险。本文使用的术语“生物活性”是指在生物中具有活性，例如医学活性、农业活性或美容活性。本专利技术的术语“含水组合物”是指包含液体水分的组合物。这类组合物通常是溶液或悬浮液。用于本
技术实现思路
的术语“含水组合物”是指包含以重量计至少50％(重量/重量)的水的制剂。本专利技术的术语“稀释剂”是指液体溶液或悬浮液。用于本
技术实现思路
的术语“稀释剂”是指包含以重量计至少50％(重量/重量)水的溶液或悬浮液。在本专利技术的情况下，稀释剂用于干燥转谷氨酰胺酶组合物的复溶。所有参考文献，包括本文引用的出版物、专利申请和专利都通过引用其整体特此结本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种干燥转谷氨酰胺酶组合物，所述组合物可通过将含水组合物冻干或喷雾干燥获得，所述含水组合物包含转谷氨酰胺酶、盐和至少一种选自糖、氨基酸和缓冲液的另外的组分，其中含水组合物中的盐浓度为5‑100 mM。

【技术特征摘要】
2008.04.21 EP 08103642.81. 一种干燥转谷氨酰胺酶组合物，所述组合物可通过将含水组合物冻干或喷雾干燥获得，所述含水组合物包含转谷氨酰胺酶、盐和至少一种选自糖、氨基酸和缓冲液的另外的组分，其中含水组合物中的盐浓度为5-100 mM。2. 权利要求1的组合物，其中因子XIII化合物是人因子XIII。3. 权利要求1或2的组合物，其中所述盐是一价盐。4. 权利要求3的组合物，其中所述一价盐是氯化钠盐。5. 权利要求1-4中任一项的组合物，其中含水组合物中所述盐的浓度为10-75 mM。6. 权利要求1-5中任一项的组合物，其中所述组合物为粉末形式。7. 一种制备权利要求1-6中任一项的干燥组合物的方法，所述方法包括将包含转谷氨酰胺酶、盐和至少一种选自糖、氨基酸和缓冲液的另外的组分的含水组合物干燥，其中含水组合物中的盐浓度为5-100 mM。...

【专利技术属性】
技术研发人员：M布拉德，T法尔克，GK克里斯琴森，
申请(专利权)人：诺沃—诺迪斯克保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH