一种透明质酸合酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种透明质酸合酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明专利技术将兽疫链球菌来源的透明质酸合酶在枯草芽孢杆菌中进行胞内结构域突变，获得产量和分子量均有正向效果的突变体。同时，对枯草芽孢杆菌中UDP‑GlcUA和UDP‑N‑GlcNAc合成途径的基因，进行模块化组装表达分析，通过调控不同的UDP‑GlcA和UDP‑GlcNAc浓度及比例，实现枯草芽孢杆菌高产大分子量范围的透明质酸。本发明专利技术为食品级微生物高效生产制备透明质酸奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。

【技术实现步骤摘要】
201610396747

【技术保护点】
一种透明质酸合酶突变体，其特征在于，是(a)或(b)或(c)：(a)在SEQ ID NO.2所示序列基础上，N196‑D203区域的氨基酸序列由NLLTRLTD变为IRLTRLSH，C226‑E236区域的氨基酸序列由CSGPLSVYRRE变为FSGPLFFYRRQ，S256‑N265区域的氨基酸序列由SIGDDRCLTN变为NIGDDRSLTN，L293‑E306区域的氨基酸由LKQQNRWNKSFFRE变为LTQQHRWKKSCFRE；(b)在(a)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有透明质酸合酶活性的由(a)衍生的蛋白质；(c)与(a)限定的氨基酸序列具有85％及以上同源性且具有透明质酸合酶活性的蛋白质。

【技术特征摘要】
1.一种透明质酸合酶突变体，其特征在于，是(a)或(b)或(c)：(a)在SEQ ID NO.2所示序列基础上，N196-D203区域的氨基酸序列由NLLTRLTD变为IRLTRLSH，C226-E236区域的氨基酸序列由CSGPLSVYRRE变为FSGPLFFYRRQ，S256-N265区域的氨基酸序列由SIGDDRCLTN变为NIGDDRSLTN，L293-E306区域的氨基酸由LKQQNRWNKSFFRE变为LTQQHRWKKSCFRE；(b)在(a)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有透明质酸合酶活性的由(a)衍生的蛋白质；(c)与(a)限定的氨基酸序列具有85％及以上同源性且具有透明质酸合酶活性的蛋白质。2.编码权利要求1所述透明质酸合酶突变体的基因。3.含有权利要求2所述基因的载体或细胞。4.一种获得权利要求1所述透明质酸合酶突变体的方法，其特征在于，对兽疫链球菌来源的透明质酸合酶的5段与底物结合和催化功能相关的区域：L156-I164，N196-D203，C226-E236，S256-N265和L293-E306进行组合突变。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，通过对兽疫链球菌来源的透明质酸合酶胞内结构域进行突变...

【专利技术属性】
技术研发人员：康振，陈坚，堵国成，张琳培，黄浩，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32