本发明专利技术涉及可与ＣＤ２３（ＦＣεＲⅡ）Ⅱ型分子结合的抗体，特别是经改变的抗体，包括能够与ＣＤ２３（ＦＣεＲⅡ）Ⅱ型分子结合并且特征为亲和常数等于或大于１×１０↑［９］ＫａＭｏｌ↑［－１］的抗体，本发明专利技术还涉及这些抗体的制品和含有这些抗体的药物组合物及其在治疗中的应用，特别是在自身免疫和炎性病症的治疗中的应用。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及可与CD23(FCεRⅡ)Ⅱ型分子结合的抗体，特别是经改变的抗体，以及这些抗体的制品和含有这些抗体的药物组合物及其在治疗中的应用。CD23(FCεRⅡ)是C-凝集素家族的一种Ⅱ型分子，该家族另外还包括淋巴细胞归巢受体(MEL-14)和内皮白细胞粘着分子(ELAM-1)。CD23是一种IgE低亲和性受体。人体中有多种类型的造血细胞在其表面表达CD23，如小结树突细胞、B细胞、T细胞和巨噬细胞。CD23分子还以可溶形式存在于生物流体中。可溶性CD23(sCD23)分子是由跨膜受体经蛋白水解而形成。CD23具有多种活性，其中包括介导细胞粘着、调节IgE和组胺的释放、使B细胞免于凋亡以及调节骨髓细胞生长。这些功能活性是通过细胞相关的CD23或sCD23的特异配体相结合而介导的，sCD23则以细胞因子样方式发挥作用(Conrad,D.H.,Annu Rev lmmunol 8,623-645 1990)；Delepesse,G.,et al.,Advlmmnnol 49,149-191(1991)；Bonnefoy,J.Y.,et al.,Curr Opinlmmunol 5,944-47(1993)。在许多炎性疾病中曾观测到CD23表达的增加。在慢性滑膜炎患者的滑膜活检中可鉴定出CD23，而在类风湿性关节炎患者的血清和滑液中可检测到浓度超出正常范围的sCD23(Bansal,A.S.,Oliver,W.,Marsh,M.N.,Pumphrey,R.S.and Wilson,P.B.,免疫学79,285-289(1993)Hellen,E.A.,Rowlands,D.C.,Hansel,T.T.,Kitas,G.D.,and Crocker,J.J.,临床病理学44,293-296(1991)；Chomarat,P.,Brioloay,J.,Banchereau,J.& Miossec,P.,Arthritis Rheum 86,234-242(1993)；Bansal,A.,et al.,Clin Exp Immunol 89,452-455(1992)；Rezonzew,R.&Newkirk,M.N.,Clin lmmunol Immunopathol71,156-163(1994)。此外，类风湿性关节炎患者体内的血清sCD23水平与疾病状况有关,并且和血清类风湿因子相关(Bansal,A.S.,etal.,Clin Exp Rheumatol 12,281-285(1994)。促炎细胞因子似乎在类风湿性关节炎中尤其重要，而TNF-a和IL-1b则被认为在破坏患有关节炎的关节中发挥主要作用(Brennan,F.M.,Chantry,D.,Jackson,A.,Maini,R.,&Feldman,M.,Lancet 2,244-247(1989)Brennan,F.M.,Maini,R.M.,&Feidman,M.,Br J Rheumatol 31,293-298(1992)。典型的抗体通常含有两条重链和两条轻链，重链间通过二硫键相互连接。两条轻链则各自通过二硫键与相应的重链连接。两条重链的一端各含有一段可变，后面是许多段恒定。两条轻链则是一端为一个可变，另一端为一个恒定。轻链的可变与重链的可变对齐排列。轻链的恒定则与重链的第一个恒定对齐排列。轻链与重链的恒定并不直接参与抗体与抗原的结合。每个配对的轻链与重链的可变域可形成抗原结合位点。轻链与重链上的结构域具有相同的总体结构，并且每个结构域均含有一种由序列相对保守的四个区域形成的构架，其间由三个互补决定区(CDR)连接。四个构架区大多采取一种β-折叠构象，CDR则形成环以连接β-折叠结构，在某些情况下也可成为β-折叠结构的一部分。构架区使CDR之间紧密靠近，从而使其与其它结构域的CDR一同形成抗原结合位点。抗体CDR和构架区的测定可参考Kabat et al(“免疫学相关蛋白的序列”US Dept.of Health and Human Services,US GovernmentPrinting Office,1987)。目前，该领域已建立起完善的将啮齿动物抗体的可变区与人类抗体的恒定区相连接以制备改变抗体的方法(Oi and Morrison(1986)生物技术4,214-212)。在EP-A-0239400中公开了一些人源化抗体，其CDR的来源与抗体可变区构架的来源不同。CDR可来源于啮齿类或灵长类单克隆抗体。抗体的可变区构架和恒定区通常来源于人类抗体。与人针对来源于啮齿动物的抗体等完整外源抗体所产生的免疫应答相比，当这些经改变的抗体给药于人类时不应诱导出同等强度的免疫应答。目前已产生出抗CD23受体(FCεRⅡ)的鼠单克隆抗体(PCT/EP/95/04109)。但这些单克隆抗体并不能够理想地用于人类的治疗，因为当它们被注射到人类患者体内时可能会具有免疫原性和裂解性。此外，能够与CD23受体结合的商品形式的抗体还可识别CD23受体上表达的不同表位；而表位结合特异性对用于特定用途的抗体的效率具有重要的影响。而且，选择对靶受体具有高亲和力的抗体对治疗有利，因为其所需剂量将少于对相同受体的亲和力较低的单克隆抗体的剂量。本专利技术提供了一种含有如下所示各CDR氨基酸序列的经改变的抗体，这些氨基酸序列足以使其能够与造血细胞上表达的CD23(FCεRⅡ)Ⅱ型分子结合轻链RSSKSLLY KDGKTYLN CDRL1(SEQ ID NO:3)LMSTRAS.... CDRL2(SEQ ID NO:5)QQLVEYPFT CDRL3(SEQ ID NO:7)重链GYWMS.......CDRH1(SEQ ID NO:9)EIRLKSDNYATHYAESVKG CDRH2(SEQ ID NO:11)FID.............CDRH3(SEQ ID NO:13)本专利技术还涉及一种抗体，该抗体能够结合与具有上述CDR的抗体相同的表位。CD23分子等抗原上的表位的定位可采用竞争性抑制测定法。举例来说，FACS竞争性分析法包括将表达该分子的细胞用作靶，用一种荧光染料标记测试抗体，并用第二种不同的着色荧光染料标记已知能够与相同抗原结合的第二抗体。如果两种荧光染料均出现，则两种抗体相互之间不产生竞争性抑制，并认为它们识别的是靶分子上不同的表位。表位作图也可采用肽文库直接结合测定法，该方法是在大头针上表达靶抗原的肽序列，并用上述经荧光染料标记的抗体进行筛选。在表位作图研究中，已证实具有上述CDR的抗体确定了CD23分子上的新表位。因此，本专利技术提供了一种可对具有上述CDR序列的抗体与造血细胞上表达的CD23(FCεRⅡ)Ⅱ型分子的结合产生竞争性抑制的抗体。优选对本专利技术的抗体进行改造，它可以是含有如附图说明图1和2所述的鼠抗体C11重链和轻链可变序列(SEQ ID NO:1和2及SEQ ID NO:46、47、50和51)以及人类恒定区的嵌合抗体，该抗体所含重链及轻链可变序列足以使其能够与CD23分子结合。该抗体也可以是如WO 86/01533所述含有一种抗原结合区和一种非免疫球蛋本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗体，该抗体含有足够的如下所示的各ＣＤＲ氨基酸序列使其能够与造血细胞上表达的ＣＤ２３（ＦＣεＲⅡ）Ⅱ型分子结合：ＲＳＳＫＳＬＬＹＫＤＧＫＴＹＬＮ ＣＤＲＬ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）ＬＭＳＴＲＡＳ ＣＤＲＬ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ ：５）ＱＱＬＶＥＹＰＦＴ ＣＤＲＬ３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）ＧＹＷＭＳ ＣＤＲＨ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）ＥＩＲＬＫＳＤＮＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧ ＣＤＲＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）ＦＩＤ…… ＣＤＲＨ３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：JYMP邦尼福伊，SJ克罗维，JH埃利斯，NT拉普森，J舍林，
申请(专利权)人：葛兰素集团有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]
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